检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2013年第3期33卷 325-329页

作者：宋伟陈迎春缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究HSD1蛋白在各级生精细胞中的空间特异性表达及其在细胞中的核质穿梭特性。方法分离小鼠生精细胞,用免疫荧光法观察HSD1蛋白的内源定位。构建pEGFP-C1-HSD1融合表达质粒并转染CHO细胞,用激光共聚焦和电镜观察HSD1融合蛋白的定位... 详细信息

目的研究HSD1蛋白在各级生精细胞中的空间特异性表达及其在细胞中的核质穿梭特性。方法分离小鼠生精细胞,用免疫荧光法观察HSD1蛋白的内源定位。构建pEGFP-C1-HSD1融合表达质粒并转染CHO细胞,用激光共聚焦和电镜观察HSD1融合蛋白的定位及其核质分布情况。结果 HSD1蛋白在初级精母细胞和圆形精子细胞的胞质中表达;在成熟精子细胞中主要表达于顶体和尾部。HSD1蛋白在CHO细胞中存在3种分布形式:细胞核型、细胞质型和核质分布型。进一步研究发现该蛋白在细胞中呈动态分布,存在细胞核-质间的穿梭特性。结论HSD1蛋白在生精细胞中呈空间特异性表达并且具有核质穿梭能力。

关键词： HSD1 精子发生免疫荧光核质穿梭

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睾丸高表达蛋白质HSD13调节CHO细胞系周期进程

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基础医学与临床 2013年第2期33卷 179-183页

作者：宋伟胡廷徽缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达,并用免疫组化... 详细信息

目的研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达,并用免疫组化观察其在小鼠睾丸组织中的表达定位。通过构建HSD13过表达的CHO稳定细胞系,用双胸苷阻断法并结合流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果电子克隆获得HSD13基因。HSD13蛋白在睾丸组织中高表达,主要定位于生精细胞中的精原细胞和初级精母细胞。成功构建HSD13过表达和对照的CHO稳定细胞系,过表达HSD13蛋白可以显著加快细胞G2/M期进程。结论 HSD13蛋白于睾丸中精子发生早期表达,其过表达能够加速细胞周期进程。

关键词： HSD13 精子发生细胞周期流式细胞术

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主动免疫肌动蛋白样蛋白7a蛋白引起小鼠睾丸曲细精管的损伤

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中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 595-600页

作者：付俊宗书东缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家人口和计划生育委员会科学技术研究所生殖生理学实验室北京100081

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表... 详细信息

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂纯化和SDS-PAGE切胶分离目的蛋白,溶胶后以表达的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠。ELISA检测抗体效价,PAS染色检测主动免疫后曲细精管的发育。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a,纯化后免疫ICR小鼠,经PAS染色发现主动免疫ACTL7a的小鼠其睾丸曲细精管出现生精细胞脱落、核凝聚、生精细胞缺如、生精细胞退化等异常的管腔。结论成功构建了ACTL7a基因全长的原核表达载体,经诱导表达和纯化获得高纯度的目的蛋白。发现ACTL7a蛋白主动免疫ICR小鼠产生抗精子抗体后,小鼠睾丸的曲细精管发生严重损伤。

关键词：肌动蛋白样蛋白7a 表达纯化主动免疫抗精子抗体

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MicroRNA-29抑制胰岛素刺激的大鼠L6细胞葡萄糖吸收

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基础医学与临床 2013年第5期33卷 562-566页

作者：刘长征李静静焦涛何小东常永生中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医院基本外科北京100730

目的研究microRNA-29(miR-29)在糖尿病模型大鼠(GK)骨骼肌组织中的表达,并探讨其对大鼠骨骼肌细胞L6葡萄糖吸收的影响。方法利用real-time PCR方法检测miR-29家族,miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中的表达特征。L6骨骼肌... 详细信息

目的研究microRNA-29(miR-29)在糖尿病模型大鼠(GK)骨骼肌组织中的表达,并探讨其对大鼠骨骼肌细胞L6葡萄糖吸收的影响。方法利用real-time PCR方法检测miR-29家族,miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中的表达特征。L6骨骼肌细胞诱导分化为肌管细胞,经葡萄糖与胰岛素处理后,利用real-time PCR与Northern blot分析miR-29家族的表达情况。选择腺病毒表达系统在L6分化的肌管细胞中过表达或抑制内源miR-29的功能,利用葡萄糖吸收实验检测胰岛素刺激的葡萄糖吸收情况。结果 miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中表达上调。L6分化的肌管细胞经葡萄糖与胰岛素处理,miR-29b和miR-29c的表达上调,而miR-29a表达无明显变化。在L6分化的肌管细胞中过表达miR-29可以明显抑制胰岛素刺激的葡萄糖吸收。结论miR-29参与了GK大鼠骨骼肌细胞葡萄糖耐受及胰岛素抵抗的产生,抑制其表达可能是治疗Ⅱ型糖尿病的一种新策略。

关键词： microRNA-29 Ⅱ型糖尿病葡萄糖耐受胰岛素抵抗

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过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用

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中国医学科学院学报 2013年第2期35卷 177-184页

作者：周海胜李春查晓军陈兵刘德培安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿科合肥230001 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。... 详细信息

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。

关键词： LMO2 胚胎干细胞成血管细胞增殖分化

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Kir4.1和AQP4基因多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 752-756页

作者：牛凤鹤林华李景云朱席琳伍晓盼刘英中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学宣武医院神经内科北京100053

目的探讨在星形胶质细胞中高表达的两个基因Kir4.1和AQP4多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究策略,以中国汉族人群438例颞叶癫痫患者和695例非癫痫受试者为研究对象,应用Taq-Man法检测Kir4.1和AQP4基因的多态性。... 详细信息

目的探讨在星形胶质细胞中高表达的两个基因Kir4.1和AQP4多态性与颞叶癫痫遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究策略,以中国汉族人群438例颞叶癫痫患者和695例非癫痫受试者为研究对象,应用Taq-Man法检测Kir4.1和AQP4基因的多态性。结果共选择Kir4.1基因上的5个SNP位点以及AQP4基因上的7个SNP位点,在病例组和对照组的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡,这些多态性位点与颞叶癫痫之间并无相关性,基因单倍型与疾病的关联无显著性的差异,结合临床表型进行分层分析,亦未有显著差异。结论在中国汉族人群中,Kir4.1和AQP4基因多态性在颞叶癫痫的发生和发展过程中无重要作用。

关键词：颞叶癫痫 Kir4 l AQP4 单核苷酸多态性

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新疆哈萨克族人Furin基因变异与中心性肥胖的相关性研究

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中华医学遗传学杂志 2013年第2期30卷 227-232页

作者：王红梅沈岩洪静周玲罗文利王新玲朱沂李南方中国医学科学院北京协和医学院基础医学院博士后流动站北京100005 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室高血压诊疗研究中心新疆高血压诊疗研究中心新疆维吾尔自治区人民医院神经内科

目的研究哈萨克族人弗林蛋白基因（Furin）变异与中心性肥胖的相关性。方法以哈萨克族自然人群横断面流行病学调查为基础选取478例肥胖者和378名正常个体进行病例一对照研究。从肥胖者中随机选择66例，对其Furin启动子、外显子区测序筛... 详细信息

目的研究哈萨克族人弗林蛋白基因（Furin）变异与中心性肥胖的相关性。方法以哈萨克族自然人群横断面流行病学调查为基础选取478例肥胖者和378名正常个体进行病例一对照研究。从肥胖者中随机选择66例，对其Furin启动子、外显子区测序筛查其代表性变异；并采用TaqManPCR技术对筛查出的Furin代表性变异在856名哈萨克族个体中进行分型，分析其与哈萨克族人肥胖的相关性。结果在478例肥胖者中随机选择66例（男女各33例），共筛查出Furin的12个变异，其中rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178是代表性变异；这4个代表性变异均在大样本哈萨克族人中基因型分型成功（成功率≥99％）；在总体、男性、女性哈萨克族自然人群中，rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多态性位点的基因型、等位基因、单倍型频率在肥胖组及对照组分布差异无统计学意义（P〉0．05）；不同基因型携带者之间的腰围平均水平差异也无统计学意义（P〉0．05）。结论Furin变异与新疆哈萨克族中心性肥胖不相关，该变异可能不是哈萨克族人中心性肥胖的易感因素。

关键词： Furin基因中心性肥胖哈萨克族基因变异

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集成干扰素突变体IIFN/165S的构建及其生物学评价

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中国生物工程杂志 2013年第7期33卷 8-12页

作者：田硕姚文兵徐晨中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国药科大学 210009 北京三元基因工程有限公司北京102600

目的:通过定点突变,构建集成干扰素(IIFN/165S),以期获得高效的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素IIFN基因的第165位密码子由CGT突变为AGT。扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。在L... 详细信息

目的:通过定点突变,构建集成干扰素(IIFN/165S),以期获得高效的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素IIFN基因的第165位密码子由CGT突变为AGT。扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。在LB培养基中培养,经IPTG诱导表达的IIFN/165S经包涵体变性、复性以及层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot和MALDI-TOF-MS分析,用WISH-VSV系统进行抗病毒活性测定同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:IIFN/165S以包涵体形式表达。纯化后,IIFN/165S的纯度大于95%,分子量为18172,比活性(7.63±0.22)×108IU/mg,诱导细胞凋亡率呈剂量依赖。结论:构建了IIFN/165S的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高纯度高活性突变分子IIFN/165S。

关键词：集成干扰素定点突变高效抗肿瘤

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DNA甲基化介导的microRNA-33b下调及其在胃癌中的作用

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基础医学与临床 2013年第10期33卷 1269-1274页

作者：阴海鑫王斌王芳余佳赵浩亮山西医科大学普外科山西太原030032 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学附属山西医学科学院山西大医院普外科山西太原030032

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌... 详细信息

目的探讨miR-33b基因上游CpG岛甲基化对该基因在胃癌组织中表达情况的影响,分析其表达与临床统计学资料间的关系。方法使用Taqman real-time PCR法检测miR-33b在42例胃癌患者癌及癌旁组织中的相对表达情况,并分析miR-33b表达水平与胃癌临床病理特征间的关系,随后使用组织基因组DNA快速提取试剂盒提取胃癌组织及正常人血液基因组DNA,经重亚硫酸氢盐处理后,甲基化特异性PCR法检测其上游CpG岛的甲基化程度,PCR产物经琼脂糖凝胶检测,并进行统计分析。结果 miR-33b表达下调与胃癌患者的年龄、性别、发生部位、有无脉管转移、肿瘤分型无相关性,但与肿瘤是否发生远处转移具有相关性(P<0.05),且其低表达与上游CpG岛的甲基化沉默修饰密切相关(P<0.05)。结论 miR-33b的表达在胃癌中受甲基化调控且与胃癌远处转移相关。

关键词： miR-33b 胃癌甲基化

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慢病毒介导的稳定表达人睾丸组织泛素连接酶TRIM69基因的细胞系的建立

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医学研究杂志 2013年第11期42卷 23-26页

作者：吴为李琴山宋伟缪时英王琳芳中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的利用改造的慢病毒表达系统构建表达人睾丸组织新的泛素连接酶TRIM69基因的稳定细胞系。方法采用RT-PCR方法从人胚肾细胞系HEK293T cDNA中扩增TRIM69基因及其缺失RING结构域的突变体,将其克隆至改造的plentilox3.7慢病毒载体中。将... 详细信息

目的利用改造的慢病毒表达系统构建表达人睾丸组织新的泛素连接酶TRIM69基因的稳定细胞系。方法采用RT-PCR方法从人胚肾细胞系HEK293T cDNA中扩增TRIM69基因及其缺失RING结构域的突变体,将其克隆至改造的plentilox3.7慢病毒载体中。将慢病毒质粒pLenti-TRIM69或其突变体与慢病毒辅助质粒(plp1,plp2,VSVG)共转染HEK293T包装细胞,产生有活性的病毒。包装后的重组慢病毒感染HEK293细胞,Western blot检测确认TRIM69及其突变体蛋白的表达。结果经Western blot检测证实,成功建立了稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系。结论利用慢病毒成功制备稳定表达TRIM69基因及其突变体的293细胞系,这些细胞为TRIM69生物学功能的研究提供了平台。

关键词： TRIM69 慢病毒稳定细胞株

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