检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2012年第4期29卷 618-621,F0004页

作者：倪冷刘昌伟刘暴宋伟李天佳王琳芳中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的构建携带目的基因B细胞淋巴瘤／白血病．xL（bcl—xL）的重组腺病毒并鉴定其功能。方法构建重组腺病毒pAdxsi—GFP-bcl—xL并体外感染人脐静脉内皮细胞，检测目的蛋白表达及氧化应激下细胞凋亡。结果重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—x... 详细信息

目的构建携带目的基因B细胞淋巴瘤／白血病．xL（bcl—xL）的重组腺病毒并鉴定其功能。方法构建重组腺病毒pAdxsi—GFP-bcl—xL并体外感染人脐静脉内皮细胞，检测目的蛋白表达及氧化应激下细胞凋亡。结果重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—xL构建成功，感染人脐静脉内皮细胞后可成功表达目的蛋白bcl—xL，膜联蛋白V／异硫氰酸荧光素（AnnexinV／FITC）荧光染色及碘化丙锭（PI）染色结果提示，在氧化应激下，重组腺病毒感染组早期及中晚期细胞凋亡率均较对照组（H2O2组）显著降低，两组早、中晚期凋亡率分别为（3．7±0．2）％、（10．3±0．5）％（P〈0．01）及（6．8±1．3）％、（18．3±2．8）％（P〈0．05）。结论成功构建重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—xL，它可显著降低氧化应激介导的血管内皮细胞凋亡。

关键词： B细胞淋巴瘤白血病-xL 腺病毒脐静脉内皮细胞氧化应激

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肝内及肝外胆管癌表达下调microRNAs表达谱的鉴定

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基础医学与临床 2012年第6期32卷 628-633页

作者：刘长征刘卫于岚蔡磊李静静何小东陈松森中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医院基本外科北京100730 中国医学科学院整形外科医院北京100144

目的筛选并鉴定肝内及肝外胆管癌组织表达下调的miRNAs,进行初步的功能研究。方法利用miRNA-基因芯片方法筛选肝内、肝外胆管癌组织特异表达下调或共同表达下调的miRNAs,选择real-time PCR方法进行验证;根据肝内及肝外胆管癌不同的下调m... 详细信息

目的筛选并鉴定肝内及肝外胆管癌组织表达下调的miRNAs,进行初步的功能研究。方法利用miRNA-基因芯片方法筛选肝内、肝外胆管癌组织特异表达下调或共同表达下调的miRNAs,选择real-time PCR方法进行验证;根据肝内及肝外胆管癌不同的下调miRNAs表达谱,选择差异明显且具有代表性的miRNAs,利用miRNA特异模拟物转染胆管癌细胞系QBC939,利用MTT试剂盒分析细胞增殖变化,研究表达下调miRNAs与胆管癌细胞增殖的关系。结果表达分析显示,肝外胆管癌组织特异表达下调的miRNAs共25个,肝内胆管癌组织特异表达下调的miRNAs共15个,在肝内及肝外胆管癌组织均表达下调的miRNAs共6个。在胆管癌细胞系QBC939中分别过表达miR-181a、miR-596、miR-492以及miR-602可以明显抑制细胞增殖。结论肝内及肝外胆管癌具有不同的miRNAs表达谱,表达下调的miRNAs可以明显抑制胆管癌细胞增殖。

关键词： microRNA 胆管癌细胞增殖

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PDZ结构域中间序列结合特性及其临床应用

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基础医学与临床 2012年第10期32卷 1230-1234页

作者：牟一蔡鹏飞高友鹤中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生理与病理生理学系国家医学分子生物学重点实验室北京100005 中国医学科学院病原生物学研究所北京协和医学院寄生虫学实验室北京100730

PDZ结构域在生物体中广泛存在,介导着大量的蛋白质相互作用,参与和执行多种生物过程和生理功能。PDZ结构域常规地结合配体蛋白C末端4～5个氨基酸残基。然而,蛋白质的相互作用可能比想象中复杂得多。研究发现PDZ结构域还存在着非常规的... 详细信息

PDZ结构域在生物体中广泛存在,介导着大量的蛋白质相互作用,参与和执行多种生物过程和生理功能。PDZ结构域常规地结合配体蛋白C末端4～5个氨基酸残基。然而,蛋白质的相互作用可能比想象中复杂得多。研究发现PDZ结构域还存在着非常规的结合特性,PDZ结构域非常规结合的特性研究有助于丰富蛋白质相互作用网络,发现蛋白质新功能,并能以结合特性为基础研发安全有效的药物应用于相关疾病的治疗。

关键词： PDZ结构域非常规结合特性中间序列临床应用

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肝内及肝外胆管癌组织表达上调microRNAs表达谱的鉴定

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中华肝胆外科杂志 2012年第6期18卷 466-469页

作者：刘长征刘卫李静静郑毅于岚何小东陈松森中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医院基本外科

目的筛选、鉴定肝内及肝外胆管癌组织表达上调的miRNAs，并探讨其在胆管癌细胞增殖中的作用。方法利用miRNA-基因芯片方法筛选肝内、肝外胆管癌组织特异表达上调或共同表达上调的miRNAs；利用实时PCR方法对其进行验证；选择特异miRNA抑... 详细信息

目的筛选、鉴定肝内及肝外胆管癌组织表达上调的miRNAs，并探讨其在胆管癌细胞增殖中的作用。方法利用miRNA-基因芯片方法筛选肝内、肝外胆管癌组织特异表达上调或共同表达上调的miRNAs；利用实时PCR方法对其进行验证；选择特异miRNA抑制剂转染胆管癌细胞系QBC939并利用MTT检测方法，对上述表达上调明显的miRNAs进行初步的功能研究，探讨miRNAs表达上调与胆管细胞癌细胞增殖的关系。结果12个miRNAs在肝外及肝内胆管癌组织共同表达上调，肝外胆管癌组织特异表达上调的miRNAs有28个，其中miR-125b与miR-19a分别表达上调3．7倍与3．6倍（P〈0．05）；肝内胆管癌有12个miRNAs特异表达上调，其中miR-92a与miR-205分别表达上调约4．5倍与3．5倍（P〈0．05）；在胆管癌细胞系QBC939中抑制miR-125b、miR-19a、miR-21以及miR-378’的内源性表达，可以明显抑制QBC939细胞的增殖，其抑制效率分别为71％、72％、69％与76％（P〈0．05，36h），61％、63％、60％与59％（P〈0．01，48h），61％、56％、60％与59％（P〈0．05，60h）。结论肝内及肝外胆管癌具有不同的miRNAs上调表达谱，敲低表达上调的miRNAs可以明显抑制胆管癌细胞增殖。

关键词：肝外胆管癌肝内胆管癌 microRNA 细胞增殖

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AIDS患者γδ T细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4^+ T细胞

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基础医学与临床 2012年第7期32卷 778-782页

作者：李珍焦艳梅崔莲仙吴昊何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学附属北京佑安医院感染科北京100069

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+... 详细信息

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+T细胞,加入植物血凝素(PHA)和白细胞介素-2(IL-2)共同培养,建立自体HIV感染的CD4+T细胞模型。流式细胞术检测HIV-P24+CD4+T细胞的比例。乳酸脱氢酶(LDH)法测定γδT细胞的细胞毒作用。结果培养到第10天时,HIV-P24+CD4+T细胞的比例达到最高值。AIDS患者的γδT细胞不仅能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞(细胞溶解率为71.1±97),而且对HIV也有一定的杀伤作用(细胞溶解率为24.2±18.2)。而健康志愿者γδT细胞对自体CD4+T细胞没有杀伤作用(细胞溶解率为4.3±10.1)。结论 AIDS患者γδT细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞,为采用γδT细胞过继免疫治疗AIDS提供了依据。

关键词： γδT细胞人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征

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2009甲型H1N1疫苗株与普通季节性H1N1疫苗株在呼吸道细胞中感染效率的比较

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基础医学与临床 2012年第6期32卷 613-617页

作者：王玉国洪小栩何丽芳杨宁王丽丽赵琼英蒋澄宇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家药典委员会北京100061 云南沃森生物技术股份有限公司云南昆明650106

目的探讨2009甲型H1N1疫苗株与季节性H1N1疫苗株在人呼吸道细胞中感染效率的差异。方法用间接免疫荧光法检测H1N1病毒感染A549、CNE-2Z、H1650、Hep-2和MRC-5细胞的效率;用间接免疫荧光法检测抑制因子对H1N1病毒侵入细胞的影响。结果 1)... 详细信息

目的探讨2009甲型H1N1疫苗株与季节性H1N1疫苗株在人呼吸道细胞中感染效率的差异。方法用间接免疫荧光法检测H1N1病毒感染A549、CNE-2Z、H1650、Hep-2和MRC-5细胞的效率;用间接免疫荧光法检测抑制因子对H1N1病毒侵入细胞的影响。结果 1)2009甲型H1N1疫苗株感染人呼吸道细胞的效率:H1650>A549>CNE-2Z>MRC-5>Hep-2;季节性H1N1疫苗株感染人呼吸道细胞的效率A549>CNE-2Z>H1650>MRC-5>Hep-2;2)2009甲型H1N1疫苗株和季节性H1N1疫苗株均依赖于内吞作用进入细胞。结论在A549细胞中,季节性H1N1疫苗株的感染效率明显高于甲型H1N1疫苗株;在H1650细胞中,甲型H1N1疫苗株的感染效率明显高于季节性H1N1疫苗株。

关键词：甲型H1N1病毒流感病毒呼吸道细胞感染效率

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EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中表达

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基础医学与临床 2012年第4期32卷 369-374页

作者：蒋凤兵阎文婷朱勇王斌马艳妮余佳施琼重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学第一附属医院普外科山西太原030001

目的研究红系分化过程中,红系分化特异转录因子EKLF对miR-96的表达调控。方法氯化高铁血红素(Hemin)诱导人K562细胞(人红白血病细胞系)向红系分化,real-time PCR检测miR-96表达。生物信息学分析miR-96转录起始点上游可能的EKLF结合位点... 详细信息

目的研究红系分化过程中,红系分化特异转录因子EKLF对miR-96的表达调控。方法氯化高铁血红素(Hemin)诱导人K562细胞(人红白血病细胞系)向红系分化,real-time PCR检测miR-96表达。生物信息学分析miR-96转录起始点上游可能的EKLF结合位点。并经染色质免疫共沉淀(ChIP)与双荧光报告基因实验验证EKLF与这些位点结合的生物学意义。结果 Hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,miR-96表达显著升高,且在48 h表达最高(3.94±0.64,P<0.05)。生物信息学分析显示miR-96转录起始位点上游2.0 kb内含有多个EKLF结合位点。经ChIP验证这些位点有EKLF的结合,且EKLF与这些位点结合能募集RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)结合,起始转录。进一步的双荧光报告基因实验也证明EKLF对miR-96转录起始点上游序列具有转录激活作用。结论 EKLF转录激活miR-96在红系分化过程中的表达。

关键词：红系分化 EKLF miR-96 染色质免疫共沉淀

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重组人p75NTR169-Fc抗酶裂嵌合体在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定

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医学研究杂志 2012年第4期41卷 48-52页

作者：景丽玲王欣陈虹张俊文中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的制备重组人p75NTR169-Fc融合蛋白,其是一种潜在的抗凋亡和止痛的候选药物。方法 (1)应用PCR法,以本组保存的pUC12-NGFR和人肝cDNA为模板,扩增出p75NTR(1～169氨基酸),IgG Fc(216～433氨基酸)基因顺序,再按照重叠PCR的原则和方法,将... 详细信息

目的制备重组人p75NTR169-Fc融合蛋白,其是一种潜在的抗凋亡和止痛的候选药物。方法 (1)应用PCR法,以本组保存的pUC12-NGFR和人肝cDNA为模板,扩增出p75NTR(1～169氨基酸),IgG Fc(216～433氨基酸)基因顺序,再按照重叠PCR的原则和方法,将两组扩增产物混合变性、复性后再扩增,得到"p75NTR(1～169)-IgG Fc(216～433)"融合基因,缩写为p75NTR169-Fc。(2)应用DNA重组技术将p75NTR169-Fc融合DNA片段经NcoⅠ、EcoRⅠ酶切插入到pET28a(+)原核表达载体中,获得pET28a-p75NTR169-Fc重组质粒。(3)利用pET28a(+)/BL21(DE3)原核表达系统诱导表达目的蛋白,经protein A亲和层析纯化,得到纯度约96%的p75NTR169-Fc重组蛋白质。(4)用MTT方法,以PC12细胞检验不同剂量重组蛋白抗β-淀粉样肽(Aβ25～35)细胞毒的作用。结果 (1)成功构建了pET28a-p75NTR169-Fc/BL21(DE3)表达系统,其高效表达可溶性重组蛋白。实验表明:该重组蛋白p75NTR169-Fc稳定性好,不再被蛋白酶降解,为单一条带。亲和层析纯化后,分子质量均一。(2)p75NTR169-Fc与p75NTR竞争结合Aβ(25～35),拮抗Aβ(25～35)对PC12的细胞毒作用。结论重组人抗酶裂嵌合体蛋白p75NTR169-Fc具有生物学活性,在临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)上具有应用前景,系针对神经退行性疾病的新的候选药物。

关键词： p75NTR169-Fc p75NTR β-淀粉样肽(Aβ)

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RanBPM的结构和功能

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生命的化学 2012年第1期32卷 55-61页

作者：张俊文陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所清华大学医学部北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

RanBPM是Ran蛋白在微管组织中心的结合蛋白。RanBPM包含5个结构域,分别是氨基端的脯氨酸结构域、SPRY结构域、LiSH结构域、CTLH结构域和CRA结构域。其中SPRY结构域和CRA结构域介导RanBPM与其它蛋白质间相互作用。RanBPM能与众多蛋白质... 详细信息

RanBPM是Ran蛋白在微管组织中心的结合蛋白。RanBPM包含5个结构域,分别是氨基端的脯氨酸结构域、SPRY结构域、LiSH结构域、CTLH结构域和CRA结构域。其中SPRY结构域和CRA结构域介导RanBPM与其它蛋白质间相互作用。RanBPM能与众多蛋白质相互作用,因而被认为是脚手架蛋白(scaffolding protein),它和几种受体蛋白相互作用后参与了细胞内多种信号转导途径。RanBPM能与细胞周期相关蛋白相互作用,调节细胞周期,它还参与了免疫系统、生殖系统和神经系统的调节。此外,RanBPM还能抑制蛋白质泛素化,是一个肿瘤细胞的抑制因子。

关键词： RanBPM 脚手架蛋白蛋白质相互作用

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染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立

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医学研究杂志 2012年第1期41卷 19-23页

作者：赵忠亮赵吉成代辉沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuclear assemblyprotein-1)及ACF(ATP-utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系。方法在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测。结果获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP-1和ACF;建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功。结论利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础。

关键词：组蛋白ACF NAP-1染色质组装

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