检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2024年第10期44卷 1419-1427页

作者：代娣杨振丽夏雨佳卞晓翠刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、病理学系北京100005

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞... 详细信息

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞系(AsPC-1、CFPAC-1、HPAC、BxPC-3、HS 766T、MIA PaCa-2、PANC-1和SW 1990)、小鼠胰腺癌细胞系(Pan02)中,感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9m1.1-Puro,挑选单细胞克隆培养扩增,提取总蛋白质后,Western blot验证Cas9的表达水平;感染荧光蛋白质表达质粒pLv-EF1α-EGFP、pLv-EF1α-mCherry、pLv-EF1α-tdTomato、pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取每种细胞Cas9稳定表达的一个克隆感染pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取其中2个细胞株感染Lv-EF1a-mCherry,流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞,再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA,细胞扩增后,通过荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况;5只BALB/c Nude小鼠皮下接种MIA PaCa-2-Luc2-tdT细胞(1.0×10^(7)个/只),36 d后活体成像。结果筛选到48个Cas9稳定表达的胰腺癌细胞株(其中表达Cas9m1.1的细胞23株,表达Cas9m1.1-Luc2-tdT的细胞25株),筛选到33个荧光蛋白质稳定表达的胰腺癌细胞株(表达EGFP的细胞8株,表达mCherry的7株,表达Luc2-tdT和tdTomato的各9株)。表达mCherry和Cas9的细胞感染mCherry gRNA后,mCherry被敲除。活体成像显示,表达Luc2-tdT的MIA PaCa-2细胞生物发光和荧光发光均存在。结论成功建立了33个荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,其中表达Luc2-tdT的细胞株具有荧光素酶活性;成功建立了48个Cas9稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,Cas9具有基因编辑活性,基因编辑活性因原始细胞系不同而存在差异。

关键词： Cas9 荧光素酶胰腺癌活体成像基因编辑

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成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞的培养及其代谢表型与成瘤能力鉴定

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基础医学与临床 2024年第1期44卷 16-22页

作者：仇佳星刘宇涵郭泓江张迪雅王钰铖鞠瑞郭磊中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁... 详细信息

目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁培养U87 SLCs通过在培养表面包被Matrigel基质胶实现;通过RT-qPCR和Western blot检测培养物的干性标志物mRNA和蛋白质水平;通过流式细胞测量术检测培养物中CD133+细胞的比例;通过Seahorse实时细胞代谢分析检测细胞耗氧速率的变化;通过接种动物皮下移植瘤验证细胞成瘤能力的改变。结果干细胞培养基中的U87 SLCs在1周内即会成长为典型的细胞球形态,细胞球在培养过程中会不断增大;在贴壁剂合适的浓度下,U87 SLCs可以在干细胞培养基中完好地平铺贴壁增殖;CD133、nestin、OLIG2、CD44、CD15、整合素α6(ITGA6)等干性标志物的mRNA表达水平在两种方式培养后与U87相比均显著提升(P<0.05),CD133和nestin的蛋白水平在两种方式培养后也均升高(P<0.05);U87 SLCs展现出了更高的线粒体储备呼吸能力(P<0.05);U87 SLCs能够以更少的接种细胞数形成更大的皮下肿瘤(P<0.05),U87 SLCs体内增殖更加迅速,具有更强的成瘤能力。结论U87 SLCs具有典型的干性特征,是一个良好的干性更高的肿瘤细胞模型。

关键词：成胶质细胞瘤干细胞样细胞神经球干性

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乳腺癌类器官的培养及鉴定

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1223-1228页

作者：夏雨佳杨振丽代娣刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、... 详细信息

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、顺铂药敏测试。结果共培养建立了44例乳腺癌类器官,均呈实性类球状生长。类器官ER、PR、HER-2、CK表达情况与患者临床样品一致。乳腺癌类器官对化疗药紫杉醇、多柔比星、顺铂具有一定敏感性。结论乳腺癌类器官作为新型体外模型,具有一定异质性,再现体内病生理功能特性。

关键词：乳腺癌类器官药敏实验

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大数据时代中医症状疗效评价存在的问题与解决对策

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中医杂志 2024年第8期65卷 792-795页

作者：张晓雨田思超尤良震郭茜陈昭刘春玲史楠楠商洪才中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京市100700 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京中医药大学东直门医院北京科技大学

重视症状疗效是中医辨证论治个体化诊疗特色的重要体现。目前中医药临床实践中存在症状表述多样、规范难度大,症状疗效评价标准不一、缺少通用量化方法,症状信息复杂多变、难以完整准确采集的问题,使得症状信息不能得到充分、有效利用... 详细信息

重视症状疗效是中医辨证论治个体化诊疗特色的重要体现。目前中医药临床实践中存在症状表述多样、规范难度大,症状疗效评价标准不一、缺少通用量化方法,症状信息复杂多变、难以完整准确采集的问题,使得症状信息不能得到充分、有效利用。针对症状术语规范、症状疗效量化分级、症状信息采集的研究现状及存在问题,围绕大数据时代有效记录、充分利用中医症状疗效信息的方法学难题,提出基于患者报告采集中医症状信息、从测量尺度和评价维度规范中医症状疗效评价、融入临床诊疗过程的中医症状疗效评价、利用人工智能技术获取并处理中医症状疗效信息。基于患者视角与人工智能技术的中医症状疗效评价策略将有助于充分发挥数据要素价值,助力中医药特色疗效的客观展示和有效规律的挖掘。

关键词：中医症状疗效评价患者报告人工智能

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器官芯片——更具前景的体外模型

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1202-1207页

作者：杨振丽夏雨佳刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内... 详细信息

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内各系统角度介绍器官芯片的研究进展和应用,同时提出目前器官芯片发展过程中存在的局限性和未来的发展方向。

关键词：器官芯片类器官疾病模型

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克罗恩病患者123例长程随访中因病住院的影响因素研究

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中华消化杂志 2022年第12期42卷 828-836页

作者：罗涵青李玥孙园园吕红胜利王丽钱家鸣中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院保健医疗部北京100730 中国医学科学院、北京协和医学院、北京协和医院消化内科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院北京100005 北京和睦家医院精神科北京100015

目的探讨临床缓解期或轻度活动期克罗恩病患者在长程随访中因病住院的影响因素。方法采用前瞻性队列研究设计,选择2013年8月5日至2015年1月5日就诊于北京协和医院消化内科的临床缓解期或轻度活动期克罗恩病患者123例,收集所有患者的基... 详细信息

目的探讨临床缓解期或轻度活动期克罗恩病患者在长程随访中因病住院的影响因素。方法采用前瞻性队列研究设计,选择2013年8月5日至2015年1月5日就诊于北京协和医院消化内科的临床缓解期或轻度活动期克罗恩病患者123例,收集所有患者的基线资料,包括年龄和性别等一般资料,是否有(包括曾有或现有)肠外表现或并发症、糖皮质激素使用效果、超敏C反应蛋白(hsCRP)、血白蛋白等临床资料,以及炎症性肠病生命质量问卷(IBDQ)总分及其全身维度评分等。对所有患者进行长程随访直至2022年5月31日或因病住院。采用受试者操作特征曲线(ROC)分析hsCRP、血白蛋白等预测因病住院的最佳截断值。采用多因素Cox回归模型分析克罗恩病患者因病住院的影响因素。结果123例患者的中位年龄为32.0岁(25.0岁,49.0岁),女性占32.5%(40/123);71例(57.7%)患者因病住院,中位随访时间为29.2个月(9.0个月,57.9个月)。ROC分析显示,hsCRP、血白蛋白预测克罗恩病患者因病住院的最佳截断值分别为1.5 mg/L、40 g/L(均P<0.001)。多因素Cox回归模型分析结果显示,有肠外表现[HR=1.869,95%置信区间(95%CI)1.014~3.443]、有并发症(HR=2.511,95%CI 1.368~4.608)、糖皮质激素无效或依赖(HR=1.958,95%CI 1.128~3.396)、血hsCRP≥1.5 mg/L(HR=2.116,95%CI 1.111~4.029)、血白蛋白≤40 g/L(HR=3.040,95%CI 1.716~5.386)是克罗恩病患者因病住院的独立危险因素(P=0.045、0.003、0.017、0.023、<0.001),IBDQ全身维度评分(HR=0.873,95%CI 0.805~0.948)是因病住院的独立保护因素(P=0.001)。结论有肠外表现、有并发症、糖皮质激素无效或依赖、血hsCRP≥1.5 mg/L、血白蛋白≤40 g/L的临床缓解期或轻度活动期克罗恩病患者是因病住院的高风险人群,需给予更积极的治疗和紧密随访。IBDQ全身维度评分更高的克罗恩病患者病情更稳定。

关键词：克罗恩病缓解期住院预后危险因素

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五味子化学成分和缓解非酒精性脂肪肝病研究进展

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中国中药杂志 2023年第4期48卷 861-878页

作者：穆新路李斌邹雨岑刘久石张本刚肖培根刘海涛中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所、中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京100193

五味子是一种传统中草药,主要化学成分有木脂素、三萜、多糖和挥发油类等。临床上常用于治疗心脑血管、肝脏、胃肠道和呼吸系统等疾病。现代药理学研究表明五味子提取物及单体类成分具有降低肝脏脂肪、缓解胰岛素抵抗和抗氧化应激等药... 详细信息

五味子是一种传统中草药,主要化学成分有木脂素、三萜、多糖和挥发油类等。临床上常用于治疗心脑血管、肝脏、胃肠道和呼吸系统等疾病。现代药理学研究表明五味子提取物及单体类成分具有降低肝脏脂肪、缓解胰岛素抵抗和抗氧化应激等药理活性,在缓解非酒精性脂肪肝病方面具有良好的应用前景。因此,该文对近年来五味子化学成分及其缓解非酒精性脂肪肝病的研究进展进行综述,以期为五味子治疗非酒精性脂肪肝病的研究提供参考。

关键词：五味子化学成分非酒精性脂肪肝病

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菌根栽培对铁皮石斛小分子化学成分的影响

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中国中药杂志 2023年第17期48卷 4655-4662页

作者：陈彤垚曾旭孟志霞田丽霞单婷婷陈晓梅郭顺星中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所教育部中草药物质基础与资源利用重点实验室北京100193

研究菌根栽培对铁皮石斛指纹图谱及6种化学成分含量的影响,为铁皮石斛菌根栽培技术的推广应用提供科学依据。收集浙江金华等4个地区菌根栽培和常规栽培的17个铁皮石斛样品,用HPLC指纹图谱评价样品的相似度,用HPLC测定6种化学成分的含量... 详细信息

研究菌根栽培对铁皮石斛指纹图谱及6种化学成分含量的影响,为铁皮石斛菌根栽培技术的推广应用提供科学依据。收集浙江金华等4个地区菌根栽培和常规栽培的17个铁皮石斛样品,用HPLC指纹图谱评价样品的相似度,用HPLC测定6种化学成分的含量。研究结果显示:指纹图谱有15个共有峰,通过对照品指认了5个共有峰,分别是柚皮素、4,4′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄、3,4′-二羟基-5-甲氧基联苄、3′,4-二羟基-3,5′-二甲氧基联苄(gigantol)和3,4-二羟基-4′,5-二甲氧基联苄(DDB-2);菌根栽培和常规栽培样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别为0.733~0.936和0.834~0.942,菌根栽培对指纹图谱的影响与种植地区、栽培种质和菌剂用量等因素相关;样品中6种化学成分的含量差异较大,DDB-2的含量最高,质量分数为69.83~488.47μg·g^(-1);上海崇明和江苏泰州的菌根栽培样品有5~6种成分的含量提高,福建漳州和浙江金华的菌根栽培样品仅有1~2种成分的含量提高。以上结果表明,菌根栽培未改变铁皮石斛小分子化学成分的轮廓,对联苄等化学成分的含量有影响,具有较好的应用前景。

关键词：铁皮石斛菌根栽培指纹图谱含量测定联苄

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基于蛋白质跨外膜自转运系统的细菌细胞表面蛋白展示技术研究进展

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微生物学报 2022年第2期62卷 458-475页

作者：蔡锟储引娣黄丕英韦良婉范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨... 详细信息

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨膜步骤介导蛋白质穿过阴性菌的内外膜。据信Ⅴa型是目前已知蛋白质跨膜转运时最简单的分泌途径,故该蛋白质分泌系统作为一种生物工程手段被认为是进行外源蛋白细菌细胞表面展示的理想系统。本文概括了目前已知的自转运蛋白的种类、结构域组成及其可能的分泌机理,总结基于自转运蛋白构建细菌细胞表面展示系统的生物工程应用,特别是其在疫苗研发领域的最新研究进展,并探讨了其在病原体检测方面的潜在应用,以期深入拓展该分泌系统在生物工程方面的应用。

关键词：自转运蛋白细菌细胞表面蛋白展示蛋白质分泌活疫苗生物工程技术

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茯苓基因组中MYB转录因子基因家族鉴定及表达分析

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中草药 2023年第1期54卷 245-253页

作者：陈泓宇董树廷郭妙弦罗红梅中国医学科学院北京协和医学院、药用植物研究所中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京100193

目的从全基因组水平挖掘茯苓Poria cocos MYB转录因子基因家族成员,并分析其在菌丝、菌核等部位及茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)诱导后菌丝中的表达模式,以期发现与茯苓发育及次生代谢物生物合成调控相关的MYB转录因子。方法基... 详细信息

目的从全基因组水平挖掘茯苓Poria cocos MYB转录因子基因家族成员,并分析其在菌丝、菌核等部位及茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)诱导后菌丝中的表达模式,以期发现与茯苓发育及次生代谢物生物合成调控相关的MYB转录因子。方法基于茯苓基因组数据,通过序列比对及保守结构域分析挖掘MYB转录因子基因,利用ExPASy在线工具预测分析MYB蛋白质理化性质,利用MEGA7.0软件构建茯苓MYB蛋白进化树,利用MEME在线工具分析保守基序,利用Plant CARE进行启动子区顺式作用元件分析,通过MeJA诱导菌丝并采用qRT-PCR方法检测基因相对表达量。结果在茯苓基因组中共鉴定到10个含有特征性保守结构域的MYB转录因子,其中4个属于1R类型,4个属于2R类型,2个属于4R类型。进化树及保守基序显示,相同进化枝的MYB蛋白所含基序类型相似。启动子区预测分析发现了多类激素及逆境响应顺式作用元件。基因表达谱分析显示有2个基因(PcMYB7和PcMYB8)在菌丝中的表达量高于菌核中的表达量,而PcMYB9则是在菌核中表达量相对较高。MeJA诱导后,有3个基因(PcMYB5、PcMYB6和PcMYB7)在诱导3 h时表达量明显上调。结论从茯苓全基因组中系统鉴定MYB转录因子基因家族,为进一步研究MYB基因在调控茯苓发育及次生代谢物合成方面的生物学功能奠定基础。

关键词：茯苓 MYB转录因子全基因组鉴定生物信息学分析基因表达分析

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