检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 402-406页

作者：曹威左瑾方福德中日友好医院临床医学研究所北京100029 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ... 详细信息

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ和ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ；采用细胞原位杂交法，以地高辛标记的ＧＳＴ－ｐｉ　ｃＤＮＡ为探针，检测两细胞株ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的表达水平；用ＭＴＴ法检测不同抗癌药物对细胞株的毒性作用。结果ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ表达明显升高，而ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ和ＨｅＬａ细胞的表达水平很低。阿霉素、丝裂霉素Ｃ和顺铂对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＩＣ５０分别为７０．１３、１０．９５和１６．５２ｕｇ／ｍｌ，对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ的ＩＣ５０分别为１０．３４、７．４８和１３．７０ｕｇ／ｍｌ，长春新碱对两细胞株的毒性无明显差别。结论ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ细胞具有较高的耐药性。ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的大量表达可能是产生多药耐药的原因，此细胞株可作为一个稳定的遗传学系统在ＧＳＴ－ｐｉ与肿瘤细胞耐药的研究中广泛应用。

关键词： GST-pi 肿瘤耐药性

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人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

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科学通报 1999年第19期44卷 2088-2094页

作者：杜光伟潘美辉周严陈建和姚辉袁建刚强伯勤中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

通过筛选人胎儿脑cDNA文库 ,克隆了编码一个新的RNA结合蛋白的人cDNA ,命名为GRY RBP .人GRY RBPcDNA的长度为 2 932bp ,编码一个具 6 2 3个氨基酸 ,分子量为 6 9.6ku的RNA结合蛋白 .GRY RBP蛋白含有 3个RNA识别基序 (RNARecognitionmot... 详细信息

通过筛选人胎儿脑cDNA文库 ,克隆了编码一个新的RNA结合蛋白的人cDNA ,命名为GRY RBP .人GRY RBPcDNA的长度为 2 932bp ,编码一个具 6 2 3个氨基酸 ,分子量为 6 9.6ku的RNA结合蛋白 .GRY RBP蛋白含有 3个RNA识别基序 (RNARecognitionmotifs,RRMs)和一个富含甘氨酸 (G)、精氨酸 (R)、酪氨酸 (Y)的羧基端 .经数据库比较发现该蛋白与许多RRMRNA结合蛋白有较高的相似性 .还以鼠脑cDNA文库为模板 ,利用PCR扩增了鼠GRY RBPcDNA的全编码区和部分非编码区 .Northern杂交发现人GRY RBP在所检测的 8种成人组织中都有表达 ,在心脏。

关键词： cDNA RNA结合蛋白 GRY-RBP 克隆

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3种化学诱导物对大鼠GST-P基因表达的影响及机理

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科学通报 1999年第23期44卷 2550-2554页

作者：廖名湘刘东远左瑾张红云方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

大鼠谷胱甘肽S_转移酶P(GST_P)基因可被多种化学致癌物诱导表达 .采用基因诱导实验、共转染报告质粒瞬时表达实验、凝胶阻滞实验和分子杂交实验探讨了 3种化学物诱导GST_P基因表达的机理 .结果表明 ,佛波酯 (TPA)、甲基丙烯酸环氧丙酯 (... 详细信息

大鼠谷胱甘肽S_转移酶P(GST_P)基因可被多种化学致癌物诱导表达 .采用基因诱导实验、共转染报告质粒瞬时表达实验、凝胶阻滞实验和分子杂交实验探讨了 3种化学物诱导GST_P基因表达的机理 .结果表明 ,佛波酯 (TPA)、甲基丙烯酸环氧丙酯 (GMA)和H2 O2 对GST_P基因表达的影响及其机理不甚相同 :TPA和GMA主要通过激活AP_1或相应转录因子与GPEⅠ增强子元件相作用而促进GST_P表达 ,H2 O2

关键词：癌变 GST-P基因基因表达调控化学诱导物

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应用酵母双杂交法对人精子膜蛋白YWK-Ⅱ胞外区作用配体的筛选

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 287-287,292页

作者：张树民缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

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肿瘤的基因预防

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 399-401页

作者：张敏磊方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

肿瘤的发生和发展是一个渐进和缓慢的过程，在人类，有的癌形成需要几十年时间，但在出现临床症状以前，分子水平的改变大多已经出现。肿瘤的发生一方面有赖于外界致癌因素（化学的，生物的和物理的因素，特别是环境中化学致癌物）的反... 详细信息

肿瘤的发生和发展是一个渐进和缓慢的过程，在人类，有的癌形成需要几十年时间，但在出现临床症状以前，分子水平的改变大多已经出现。肿瘤的发生一方面有赖于外界致癌因素（化学的，生物的和物理的因素，特别是环境中化学致癌物）的反复刺激，另一方面也取决于个体的遗传学背景，即基因水平功能的完损与否。不同的个体其ＤＮＡ的修复、细胞的凋亡与分化、酶的解毒功能以及免疫系统的差异等因素，决定了该个体对致癌因素的易感性。因此肿瘤的预防包括两大方面，一是减少个体对致癌因素的暴露；另一是要修复或完善基因水平的功能，亦即肿瘤的基因预防。目前，肿瘤基因预防主要通过食物、药物和其他化学物质影响和调节基因的功能或直接导入不同作用原

关键词：肿瘤基因预防预防

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症临床缓解患者仍可查出异常血细胞

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中华血液学杂志 1999年第4期20卷 183-186页

作者：李强张之南吕照江刘尔坤武永吉许彩民中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血液科华西医科大学附属第二医院儿科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的观察临床完全缓解的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内是否仍有异常造血细胞并探讨其临床意义。方法用免疫荧光标记及流式细胞术检测患者骨髓有核细胞、外周血红细胞ＣＤ５９抗原表达及骨髓ＣＤ３４＋造血干／祖细胞数。... 详细信息

目的观察临床完全缓解的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内是否仍有异常造血细胞并探讨其临床意义。方法用免疫荧光标记及流式细胞术检测患者骨髓有核细胞、外周血红细胞ＣＤ５９抗原表达及骨髓ＣＤ３４＋造血干／祖细胞数。结果２例临床完全缓解的ＰＮＨ患者体内仍呈正常造血细胞与异常克隆并存状态，但与未缓解ＰＮＨ患者相比，完全缓解患者外周血红细胞、骨髓单个核细胞及ＣＤ３４＋细胞中均以正常的ＣＤ５９＋细胞为主，表明体内异常克隆造血优势已经消失。结论临床完全缓解的ＰＮＨ患者仍可有残存的异常克隆；ＰＮＨ达到临床完全缓解并不一定需要体内异常克隆的彻底消灭；ＰＮＨ患者体内异常克隆的造血优势在一定条件下是可以消失的。

关键词：血红蛋白尿 PNH 抗原造血干细胞流式细胞术

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体外转运富含GPI-蛋白的红细胞囊泡改善PNH溶血的探索

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 278-281页

作者：杨洋许彩民潘华珍吕照江张之南中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　在体外观察是否能将富含ＣＤ５９的红细胞囊泡转运到缺失ＣＤ５９的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞膜上，以改善ＰＮＨ溶血，为ＰＮＨ的治疗提供新的线索。方法　采用免疫亲和层析分离技术分离ＰＮＨＣＤ５９－红... 详细信息

目的　在体外观察是否能将富含ＣＤ５９的红细胞囊泡转运到缺失ＣＤ５９的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞膜上，以改善ＰＮＨ溶血，为ＰＮＨ的治疗提供新的线索。方法　采用免疫亲和层析分离技术分离ＰＮＨＣＤ５９－红细胞，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析、流式细胞仪及蛇毒因子溶血实验等检测和分析红细胞与囊泡的结合。结果　Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析显示，红细胞囊泡含有ＣＤ５９；流式细胞仪测定表明，ＰＮＨＣＤ５９－红细胞与囊泡结合后，ＣＤ５９的荧光标记率明显增高（Ｐ＜０００１）；蛇毒因子溶血实验显示，加入囊泡后ＰＮＨＣＤ５９－红细胞溶血度也显著下降（Ｐ＜００５）。结论　红细胞囊泡上的ＣＤ５９可以在体外转运到ＰＮＨＣＤ５９－红细胞上，并产生抑制补体溶血的作用，使ＰＮＨＣＤ５９－

关键词：红细胞囊泡 PNH 糖肌醇磷脂血红蛋白尿症

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改进的反向PCR技术克隆转移基因的旁侧序列

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生物化学与生物物理进展 1999年第6期26卷 600-602页

作者：李竹红刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

对传统的反向ＰＣＲ技术作了一些改进：用巢式ＰＣＲ扩增含量极少的靶序列；ＰＣＲ反应体系中加入５％的甲酰胺以减少非特异性扩增．结果表明，改进的反向ＰＣＲ体系是克隆人基因组已知片段旁侧序列的高度灵敏、高度特异的方法．

关键词：反向PCR 旁侧序列转移基因

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一个新的人类硫氧化还原蛋白基因的克隆

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科学通报 1999年第12期44卷 1307-1310页

作者：周彦潘美辉袁建刚杜光伟强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

根据不同发育阶段 ( 1 3,33周 )的人胎脑组织mRNA差异显示分析 (又称DDRT PCR)所得到的具有差异表达的EST的序列 ,设计引物筛选点阵排列的人胎脑cDNA文库 ,得到一个新的全长cDNA克隆 .这个克隆全长 1 2 0 8bp ,包含一个 889bp的开放阅读... 详细信息

根据不同发育阶段 ( 1 3,33周 )的人胎脑组织mRNA差异显示分析 (又称DDRT PCR)所得到的具有差异表达的EST的序列 ,设计引物筛选点阵排列的人胎脑cDNA文库 ,得到一个新的全长cDNA克隆 .这个克隆全长 1 2 0 8bp ,包含一个 889bp的开放阅读框 ,一个 1 32bp的 5′非翻译序列和一个 2 0 9bp的 3′非翻译序列以及典型的polyA加尾信号 .其推断的氨基酸序列与人硫氧化还原蛋白同源 ,而且含有硫氧化还原蛋白的保守的活性位点序列 .将它命名为人的类硫氧化还原蛋白基因 (humanthioredoxinlikegene ,hTRXL) .

关键词：差异显示硫氧化还原蛋白胎脑基因克隆

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重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在啤酒酵母中的表达和分泌

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基础医学与临床 1999年第1期19卷 43-48页

作者：李旌军黄秉仁蔡良琬中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

利用啤酒酵母α－因子启动子和前导肽区与中国人ＧＭ－ＣＳＦ基因编码区正确融合后能产生具有正确Ｎ－端的分泌型表达载体，ＧＭ－ＣＳＦ基因在啤酒酵母细胞中得到表达和分泌。Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交和染糖结果表明酵母细胞能识别ｈＧＭ... 详细信息

利用啤酒酵母α－因子启动子和前导肽区与中国人ＧＭ－ＣＳＦ基因编码区正确融合后能产生具有正确Ｎ－端的分泌型表达载体，ＧＭ－ＣＳＦ基因在啤酒酵母细胞中得到表达和分泌。Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交和染糖结果表明酵母细胞能识别ｈＧＭ－ＣＳＦ中潜在的糖化位点。表达的ｈＧＭ－ＣＳＦ以不同程度的糖化形式存在。体外生物学活性测定表明，培养上肩能刺激骨髓干细胞的增殖，形成集落，其生物学活性为１．２５ｘ１０４Ｕ／ｍＬ。

关键词： GM-CSF 啤酒酵母表达分泌糖化

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