检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第1期35卷 92-96页

作者：俞作仁郭睿葛晔华关纪奎马静薛社普韩代书中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

为了避免差异显示技术中的放射性污染 ,并用之于筛选、克隆精子发生早期的相关基因 ,分离纯化了小鼠的原始精原细胞及B型精原细胞 ,提取其总RNA ,逆转录获得cDNA ,以荧光差异显示方法筛选差异表达基因。利用斑点杂交技术对差异片段进行... 详细信息

为了避免差异显示技术中的放射性污染 ,并用之于筛选、克隆精子发生早期的相关基因 ,分离纯化了小鼠的原始精原细胞及B型精原细胞 ,提取其总RNA ,逆转录获得cDNA ,以荧光差异显示方法筛选差异表达基因。利用斑点杂交技术对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。选取 16条差异显著的片段做克隆测序 ,通过Gen Bank/Blast比较 ,有 7个片段属于新的EST ,且均表现为在B型精原细胞中表达强度高于原始精原细胞。提交Gen Bank获得注册号。从中选取较有意义的 3条基因片段通过半定量RT PCR方法进一步验证其表达特征。和传统的差异显示方法比较 ,文中所采用的mRNA差异显示技术可快速排除假阳性结果 ,避免同位素标记带来的放射性污染。结果表明所获得的 7个新EST均表现为B型精原细胞中高表达 ,这些表达升高的基因可能与其后精子发生过程中的一系列特殊现象 (如减数分裂、变态成形 )有关 ,为生精细胞的分化做物质上的准备。

关键词：荧光mRNA差异显示技术精子发生基因克隆斑点杂交

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Toll样受体(TLRs)的信号转导与免疫调节

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生物化学与生物物理进展 2006年第9期33卷 820-827页

作者：王海坤韩代书中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是进化中比较保守的一个受体家族,至少包括10个成员.TLRs能特异地识别病原相关的分子模式(PAMPs),不仅在激活天然免疫中发挥重要的作用,而且还调节获得性免疫,是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁.... 详细信息

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是进化中比较保守的一个受体家族,至少包括10个成员.TLRs能特异地识别病原相关的分子模式(PAMPs),不仅在激活天然免疫中发挥重要的作用,而且还调节获得性免疫,是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁.近年来,TLRs信号转导的研究,特别是在负调控研究领域,进展非常迅速.对TLRs信号通路新进展以及TLRs在抗感染免疫中的作用进行了综述.

关键词： Toll样受体天然免疫获得性免疫信号转导

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应用PAMAM dendrimers作为DNA运送载体的体外研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第9期31卷 804-811页

作者：郭晨莹王恒蔺亚晖蔡启良中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病原生物学系分子寄生虫学实验室北京100005

StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与... 详细信息

StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与DNA结合后介导其转染细胞的能力,并初步评价这种复合物转染对细胞活力的影响.实验证实,全代的PAMAMdendrmers皆可与DNA结合,并可在体外培养的细胞中介导高效的DNA转染.PAMAMdendrimer/DNA复合物很稳定,在较大的pH值变化范围内(pH 2～ 10 )不解离.PAMAMdendrimers可保护与之复合的DNA分子免受限制性内切酶的降解.在一定的电荷比范围内,高代数的dendrimers分子与DNA形成的复合物对培养细胞的转染效率高于低代数dendrimer分子,复合物所介导的转染效率在不同的细胞系之间也有差异.在有效作用浓度范围内(≤ 1 3× 10 -1g/L),PAMAMdendrimers/DNA复合物对被转染细胞无毒性.但是,未与DNA复合的dendrimers分子在较低浓度时则表现出毒性,表明StarburstTM PAMAMdendrimers分子可作为新型的低毒非病毒DNA载体,用于介导DNA对体外培养细胞的转染.这些前期观察。

关键词： DNA转运 Starburst^TM PAMAM dendrimers 转染非病毒载体

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小分子干扰RNA(siRNA)表达载体沉默靶基因的研究

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解剖学报 2004年第6期35卷 607-611页

作者：马鹏鹏葛晔华郭睿马静陈平薛社普韩代书中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

目的　研究siRNA表达载体在体外培养细胞中对目的基因的干扰作用 ,建立利用RNA干扰技术研究基因功能的平台。　方法　构建针对β actin基因的表达siRNA载体 ,转染HeLa细胞 ,然后在mRNA水平、蛋白水平和细胞形态水平评价siRNA表达载体对 ... 详细信息

目的　研究siRNA表达载体在体外培养细胞中对目的基因的干扰作用 ,建立利用RNA干扰技术研究基因功能的平台。　方法　构建针对β actin基因的表达siRNA载体 ,转染HeLa细胞 ,然后在mRNA水平、蛋白水平和细胞形态水平评价siRNA表达载体对 β actin基因表达的抑制作用。　结果　siRNA表达载体可以有效的抑制体外培养细胞 β actin基因的表达 ,使 β actin基因的mRNA和蛋白表达量显著下降 ,细胞形态发生显著变化。　结论siRNA表达载体可以在体外培养细胞中有效的沉默 β actin基因 ,为研究基因功能提供了一个快速、有效的系统。

关键词：小干扰RNA RNA干扰哺乳动物细胞 β-actin基因

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血管紧张素Ⅱ受体介导细胞凋亡及其功能的研究进展

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解剖学报 2003年第3期34卷 333-335页

作者：刘艳张世馥金叔敏程凯中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

肾素．血管紧张素系统(renin-angiotensin system， RAS)是机体调控内环境稳定的重要体液调节系统之一，它主要通过血管紧张素的作用而产生多种生物学效应。血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，ANGⅡ)是肾素一血管紧张素系统的主要活性肽，愈... 详细信息

肾素．血管紧张素系统(renin-angiotensin system， RAS)是机体调控内环境稳定的重要体液调节系统之一，它主要通过血管紧张素的作用而产生多种生物学效应。血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，ANGⅡ)是肾素一血管紧张素系统的主要活性肽，愈来愈多的证据表明，在一些以组织器官发生进行性纤维化为特征的慢性疾病，尤其是心血管，肾脏疾病的进展中起着重要作用~[1]。已知RAS的生物学效应均通过ANGⅡ与相应的受体作用而介导的。根据不同的药理和生化特性，ANGⅡ受体分为两个亚型ATl和AT2~([1,2])。血管内皮上的受体由循环ANGII激活，而心脏、血管壁、肾脏等血管中的受体则以自分泌或旁分泌形式生成的ANGⅡ激活。 ANGⅡ除了具有调节血管张力、血流及促进细胞生长、的作用之外。近几年研究表明，它还具有介导细胞凋亡用。

关键词：血管紧张素Ⅱ受体细胞凋亡细胞功能生物学特性肾脏细胞心血管细胞

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长白猪精原细胞的分离和纯化

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解剖学报 2002年第6期33卷 662-664页

作者：俞作仁孙晓冬关纪奎薛社普韩代书中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

目的　分离和纯化猪的精原细胞 ,从而对与人类具有高同源性的猪的精子发生进行研究。　方法　酶消化法制备 2月龄未成熟长白猪睾丸组织的单细胞悬液 ,以 2 %～ 4 %牛血清白蛋白 (BSA)连续梯度作为分离介质 ,采用重力沉降法并结合细胞贴... 详细信息

目的　分离和纯化猪的精原细胞 ,从而对与人类具有高同源性的猪的精子发生进行研究。　方法　酶消化法制备 2月龄未成熟长白猪睾丸组织的单细胞悬液 ,以 2 %～ 4 %牛血清白蛋白 (BSA)连续梯度作为分离介质 ,采用重力沉降法并结合细胞贴壁培养的方法分离精原细胞。　结果　重力沉降法分离细胞后所获精原细胞纯度为 91% ,进一步经过贴壁培养纯化后 ,精原细胞纯度达到 94 2 %。　结论　该方法方便、快捷 ,分离效果好 ,能满足在分子水平研究精原细胞的需要。

关键词：长白猪精原细胞纯化细胞分离重力沉降法生殖生物学

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中心体蛋白Centrin在不育症病人精子中的异常表达

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科学通报 2002年第2期47卷 139-140页

作者：孙晓冬马静葛晔华李赛俞作仁薛社普韩代书中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学细胞生物学系北京100005

为研究中心体蛋白Centrin与男性不育的关系,从而深入理解Centrin在精子发生过程中的功能,用抗Centrin多克隆抗体对10例正常人及18例男性不育症病人的成熟精子进行了免疫荧光染色.结果发现,在正常男性成熟精子中有两个明显的点状荧光阳... 详细信息

为研究中心体蛋白Centrin与男性不育的关系,从而深入理解Centrin在精子发生过程中的功能,用抗Centrin多克隆抗体对10例正常人及18例男性不育症病人的成熟精子进行了免疫荧光染色.结果发现,在正常男性成熟精子中有两个明显的点状荧光阳性信号,位于鞭毛的基体部,分别为近端中心粒和远端中心粒;而一些不育病人精子中Centrin蛋白定位异常,染色信号呈弥散分布,未显示正常大小的近端和远端中心粒.这表明中心体蛋白异常可能与某些男性不育相关,这一表型有可能用作某些男性不育及精子异常的新标志.

关键词： Centrin 男性不育症精子中心体蛋白异常表达

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一种新发现的基因表达调控机制——核糖开关

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第2期21卷 151-157页

作者：赵谨杨克恭张学中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传学系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系北京100005

最近发现 ,某些依赖代谢物调节的基因转录产物的 5′UTR存在特征性结构———核糖开关(riboswitch) .核糖开关可以特异性结合代谢物 ,通过构象变化 ,在转录或翻译水平上调节基因表达 .核糖开关广泛存在于G+ 及G-细菌的代谢相关基因中 ,... 详细信息

最近发现 ,某些依赖代谢物调节的基因转录产物的 5′UTR存在特征性结构———核糖开关(riboswitch) .核糖开关可以特异性结合代谢物 ,通过构象变化 ,在转录或翻译水平上调节基因表达 .核糖开关广泛存在于G+ 及G-细菌的代谢相关基因中 ,在真菌、植物中也有发现 .核糖开关调节维生素、氨基酸、核苷酸等基础代谢过程 ,其调节基因表达不需要任何蛋白因子作为中介 ,在进化上可能是RNA世界遗留的分子化石 .核糖开关可用于研究基因功能 ,开发新型药物及基因治疗 .

关键词：代谢物结合mRNA 适体核糖开关基因表达调控

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中心体蛋白Cenexin在大鼠精子发生过程中的表达特征

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实验生物学报 2002年第1期35卷 21-25页

作者：孙晓冬俞作仁马静葛晔华李赛薛社普韩代书中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物学系北京100005

中心体蛋白Cenexin是成熟中心粒的唯一标志分子。为阐明中心粒在大鼠精子发生过程中的成熟以及功能,我们首先通过RT-PCR技术从大鼠睾丸组织中扩增出了Cenexin cDNA片段,原核表达重组蛋白后,用其免疫小鼠制备了高滴度的抗Cenexin的多克... 详细信息

中心体蛋白Cenexin是成熟中心粒的唯一标志分子。为阐明中心粒在大鼠精子发生过程中的成熟以及功能,我们首先通过RT-PCR技术从大鼠睾丸组织中扩增出了Cenexin cDNA片段,原核表达重组蛋白后,用其免疫小鼠制备了高滴度的抗Cenexin的多克隆抗体,然后利用免疫荧光染色、Western Blot和半定量RT-PCR方法,研究了大鼠精子发生过程中Cenexin蛋白和基因的表达特征。结果显示Cenexin mRNA水平在精原细胞和精母细胞中较高,随后表达水平下降,而蛋白质分子在精原细胞到精子细胞中都定位于细胞的一个中心粒上,表示有成熟中心粒的存在,在长形精子细胞中该蛋白位于鞭毛的基体部。附睾的绝大多数成熟精子中Cenexin免疫染色消失。中心体蛋白Cenexin在精子变态期的表达变化可能与精子鞭毛形成的起始有关。

关键词： Cenexin 中心体蛋白成熟中心粒精子发生大鼠

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TNFA基因启动子区多态性与HBV感染结局的关联研究

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中华医学遗传学杂志 2005年第4期22卷 406-410页

作者：刘英郭新会都特李俊红朱席琳高冀荣卢亮平勾春燕李卓李辉中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系北京100005 首都医科大学附属佑安医院中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学流行病学系北京100005

目的在中国汉族人群中探讨TNFA基因启动子区单核苷酸多态性是否与HBV感染结局相关联。方法以148例HBV自限性感染者和207例慢性乙肝患者为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和序列特异性引物-PCR方法对TNFA基因启动子区5... 详细信息

目的在中国汉族人群中探讨TNFA基因启动子区单核苷酸多态性是否与HBV感染结局相关联。方法以148例HBV自限性感染者和207例慢性乙肝患者为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和序列特异性引物-PCR方法对TNFA基因启动子区5个位点,-238G/A、-308G/A、-857C/T、-863C/A和-1031T/C进行基因型分型,用EPI和EH等统计学软件分析各位点等位基因、基因型、单倍型频率及其组间差异。结果TNFA基因-238位GG基因型在慢性肝炎组的频率显著高于自限性感染组(P=0.02),-857TT基因型的频率在慢性肝炎组显著低于自限性感染组(P=0.02)。TNFA基因-238/-308/-857/-863/-1031组成的单倍型GGCCT的频率在慢性肝炎组显著低于自限性感染组(P=0.03),单倍型GGCAT与GGTAT在慢性肝炎组的频率显著高于自限性感染组(P=0.0001,P=0.004)。结论TNFA基因启动子区多态性与HBV感染结局显著关联。

关键词： TNFA基因基因启动子区基因多态性乙型肝炎病毒病毒感染

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