检索结果-内蒙古大学图书馆

医学研究杂志 2012年第8期41卷 21-25页

作者：张艳君程谟斌代辉沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室

目的确定JMJD6与转录因子p53的相互作用,研究JMJD6对p53转录活性的影响,并通过鉴定JMJD6的赖氨酸羟化酶活性探讨其可能的作用机制。方法免疫共沉淀技术和GST pull-down实验分析JMJD6和p53的相互作用及其作用区域;荧光素酶双报告基因系... 详细信息

目的确定JMJD6与转录因子p53的相互作用,研究JMJD6对p53转录活性的影响,并通过鉴定JMJD6的赖氨酸羟化酶活性探讨其可能的作用机制。方法免疫共沉淀技术和GST pull-down实验分析JMJD6和p53的相互作用及其作用区域;荧光素酶双报告基因系统检测JMJD6对p53靶基因启动子活性的影响;体外羟基化实验和质谱鉴定JMJD6的羟化酶活性。结果 JMJD6与p53相互作用,并由p53的C端结构域介导;JMJD6参与激活p53的转录活性;JMJD6具有赖氨酸羟化酶活性,可以催化组蛋白H4发生羟基化。结论赖氨酸羟化酶JMJD6可以结合肿瘤抑制因子p53并参与调节其转录活性。

关键词： p53 JMJD6 赖氨酸羟基化

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小鼠体内生精系统重塑模型的建立

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医学研究杂志 2012年第10期41卷 30-32页

作者：关欣李树春狄茜缪时英王琳芳北京协和医学院(清华大学医学部)基础学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的建立小鼠体内生精系统重塑模型,为在体研究生精相关基因的功能提供技术方法。方法以白消安(busulfan)40mg/kg腹腔注射后3～5周雄性小鼠为受体小鼠,以稳定表达GFP的精原细胞系GC-1spg为供体细胞,移植入受体小鼠睾丸曲细精管中,观察... 详细信息

目的建立小鼠体内生精系统重塑模型,为在体研究生精相关基因的功能提供技术方法。方法以白消安(busulfan)40mg/kg腹腔注射后3～5周雄性小鼠为受体小鼠,以稳定表达GFP的精原细胞系GC-1spg为供体细胞,移植入受体小鼠睾丸曲细精管中,观察供体细胞移植后在受体小鼠曲细精管中的定位、增殖和分化情况。结果成功建立小鼠睾丸曲细精管显微注射技术平台,并发现精原细胞系GC-1spg移植回体内环境后,不但能够在受体小鼠曲细精管生存,而且能够定位于相当于精原干细胞所处的niche中增殖、分化,并产生成熟精子。结论我们应用精原细胞系GC-1spg成功地建立了小鼠体内生精系统重塑模型。

关键词：精原细胞系精子发生细胞移植

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人外周血新鲜分离的αβ T细胞与γδ T细胞microRNA表达差异比较

人外周血新鲜分离的αβ T细胞与γδ T细胞microRNA表达差异比较

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第八届全国免疫学学术大会

作者：朱于莉李珍崔莲仙何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:比较新鲜分离的人外周血中αβT细胞与γδT细胞microRNAs的差异表达。材料和方法:新鲜采集健康志愿者外周静脉血,用淋巴细胞分离液分出人外周血单个核细胞(PBMC)后,用磁珠分别分选出αβT细胞与γδT细胞,提取 RNA并反转录,进行mi... 详细信息

目的:比较新鲜分离的人外周血中αβT细胞与γδT细胞microRNAs的差异表达。材料和方法:新鲜采集健康志愿者外周静脉血,用淋巴细胞分离液分出人外周血单个核细胞(PBMC)后,用磁珠分别分选出αβT细胞与γδT细胞,提取 RNA并反转录,进行microRNA实时荧光定量PCR。首先对3位志愿者共351条免疫相关的microRNAs进行检测,获得两者之差异表达谱;继而在20位志愿者中对αβT细胞与γδT细胞差异表达的microRNAs进行验证,并对结果进行统计学分析。结果:在3位健康志愿者的筛查中,得到αβT细胞与γδT细胞有统计学意义的差异表达microRNAs共13条(P<0.05)。在进一步对20位健康志愿者的验证中,不仅有已获得的13条差异表达microRNAs,而且结合文献资料又增加8条与免疫学功能相关的microRNAs,共21条microRNAs作为检测对象进行验证,最终得到有统计学意义的差异表达microRNAs 14条(P<0.05,其中12条P<0.01),分别是miR-99a-5p、miR-125b-5p、miR-31-5p、miR-365a-3p、miR-193b-3p、miR-450a-5p、miR-150-5p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-22-3p、miR-22-5p、miR-24-3p、miR-34a-5p和miR-9-5p,其中前7条microRNAs在γδT细胞中表达量低于αβT细胞;后7条则在前者中的表达高于后者。但未发现在αβT细胞或γδT细胞中特异表达的microRNA。结论:本实验通过实时定量PCR的方法,对数十位健康志愿者外周血中新鲜分离的αβT细胞与γδT细胞microRNAs的差异表达谱进行检测,得到了14条在统计学中具有明显差异的microRNAs。实验结果提示,这些microRNAs在不同个体、不同T细胞亚型中表达相对稳定,进而为深入探讨microRNA在不同T细胞亚型的分化发育以及功能差异中的作用奠定基础。

关键词： αβT细胞 γδT细胞 microRNAs表达差异

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TrkA与snapin蛋白的直接相互作用

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医学研究杂志 2012年第1期41卷 47-50页

作者：王岚崔迎彬马晓骊陈虹王欣黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所清华大学医学部北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的确认TrkA与snapin蛋白间的直接相互作用。方法采用DNA重组技术,构建增强型荧光蛋白表达载体pECFP-TrkAICD(TrkA膜内区)和pEYFP-snapin,共转染HEK 293T细胞后以激光扫描共聚焦显微镜观察并进行荧光共振能量转移(fluorescence resonan... 详细信息

目的确认TrkA与snapin蛋白间的直接相互作用。方法采用DNA重组技术,构建增强型荧光蛋白表达载体pECFP-TrkAICD(TrkA膜内区)和pEYFP-snapin,共转染HEK 293T细胞后以激光扫描共聚焦显微镜观察并进行荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)分析。结果成功构建了snapin和TrkA的重组质粒,共转染细胞后激光扫描共聚焦显微镜分析表明两种蛋白分布在细胞质同一层面,荧光共振能量转移(FRET)分析表明能量转移效率>5%,与对照相比有显著区别(P<0.05)。结论激光扫描共聚焦及FRET实验结果都证明了TrkA膜内区与snapin两个蛋白之间存在着直接的相互作用。

关键词： TrkA snapin激光扫描共聚焦荧光共振能量转移蛋白质相互作用

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内源性代谢小分子X以信号分子的方式通过激活Erk/Cyclin D1信号通路促进骨骼肌干细胞增殖与再生

内源性代谢小分子X以信号分子的方式通过激活Erk/Cyclin D1信号通...

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2012全国发育生物学大会

作者：邹小停孟姣李莉张勤王威钟冉李常银周玉长张勇朱大海中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系

最新研究发现,内源性代谢中间产物在不同的生物学过程中都发挥着十分重要的调控功能,但目前已知具有这样功能的内源性代谢小分子却寥寥无几。我们通过系统发现鉴定了一个与骨骼肌发育相关的内源性代谢小分子X。实验表明内源性代谢小分子... 详细信息

最新研究发现,内源性代谢中间产物在不同的生物学过程中都发挥着十分重要的调控功能,但目前已知具有这样功能的内源性代谢小分子却寥寥无几。我们通过系统发现鉴定了一个与骨骼肌发育相关的内源性代谢小分子X。实验表明内源性代谢小分子X剂量和时间依赖的促进C2C12和原代骨骼肌干细胞的增殖。同时,X可以协同IGF-1对肌细胞增殖的促进作用和拮抗Myostatin对骨骼肌干细胞增殖的抑制作用。同时,利用cardiotoxin诱导的小鼠骨骼肌再生模型,我们探讨了该小分子在骨骼肌再生种的功能。我们的结果表明,该内源性代谢小分子可以通过调控骨骼肌干细胞的激活和增值加速骨骼肌的再生。本研究的重要发现是,内源性代谢小分子X通过非Ras和不依赖能量代谢的方式激活Mek/Erk/Cyclin D1信号通路从而促进骨骼肌干细胞的激活、增殖和再生。结论:内源性代谢小分子X除了可以为细胞提供能量外,本研究首次证明了该代谢小分子还具有细胞信号分子的重要调控功能。该研究结果为揭示内源性代谢中间产物的细胞信号转导功能提供了全新的视野和研究方向。同时,也为应用该代谢小分子治疗骨骼肌疾病展示了良好的临床前景。

关键词：骨骼肌干细胞小分子 Erk/Cyclin D1 内源性 Cyclin 信号通路信号分子

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MRG通过影响骨骼肌干细胞微环境调控骨骼肌干细胞功能

MRG通过影响骨骼肌干细胞微环境调控骨骼肌干细胞功能

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2012全国发育生物学大会

作者：孟姣邹小停张勇朱大海中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系

骨骼肌干细胞在骨骼肌损伤再生中起着十分重要的作用,而各种细胞因子和细胞间的相互作用为骨骼肌干细胞的活化、增殖、分化以及融合提供了关键的微环境。因此,研究微环境对骨骼肌干细胞功能的调控作用具有十分重要的理论意义和临床价值... 详细信息

骨骼肌干细胞在骨骼肌损伤再生中起着十分重要的作用,而各种细胞因子和细胞间的相互作用为骨骼肌干细胞的活化、增殖、分化以及融合提供了关键的微环境。因此,研究微环境对骨骼肌干细胞功能的调控作用具有十分重要的理论意义和临床价值。最近我们实验室发现了一个在转录和翻译水平都受Myostatin上调,而且在骨骼肌损伤早期高表达的泛素连接酶基因MRG(Mmyostatin Regulated Gene)。为了研究MRG在骨骼肌发育以及再生中的功能,我们建立了MRG基因敲除小鼠。利用MRG基因敲除小鼠进行的骨骼肌再生研究表明,与野生型相比MRG基因敲除小鼠骨骼肌损伤后再生速度加快。有趣的是,我们发现单个肌纤维上骨骼肌干细胞的数目在野生型和MRG基因敲除小鼠间并没有明显差异。同时,我们还发现CTX损伤2小时后MRG的表达就迅速升高。基于以上结果我们假设,MRG很可能是通过影响细胞因子的分泌从而改变骨骼肌干细胞的微环境进而影响其活化增殖和再生过程。为了验证这一假设,我们检测了损伤后血清中细胞因子的浓度变化,发现在MRG基因敲除小鼠中大部分细胞因子浓度均低于野生型小鼠,而这些细胞因子在mRNA水平的表达却没有明显差异。以上结果为我们的假设提供了部分理论依据。同时,分子机制研究表明,MRG对骨骼肌干细胞微环境的影响可能是通过泛素化它的底物Snapin来调节细胞因子的分泌来实现的。

关键词：骨骼肌干细胞细胞因子野生型 MRG 基因敲除小鼠干细胞微环境

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盲肠结扎穿孔术建立急性肺损伤小鼠模型

盲肠结扎穿孔术建立急性肺损伤小鼠模型

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第九届中青年呼吸学者论坛

作者：郭峰邹镇蒋澄宇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系

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Myostatin信号调节的miR-A通过调控靶基因Eya4表达促进骨骼肌干细胞激活

Myostatin信号调节的miR-A通过调控靶基因Eya4表达促进骨骼肌干细...

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2012全国发育生物学大会

作者：武日茂翟丽丽王威李婷婷于潇华李常银钟冉周玉长张勇朱大海中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系

Myostatin属于TGF-beta生长因子超家族成员之一,功能研究表明Myostatin是骨骼肌生长发育负调控因子。但是,目前对Myostatin在骨骼肌干细胞的激活、增殖与分化过程中的功能及作用机制并不清楚。近年来的研究发现miRNA参与骨骼肌干细胞的... 详细信息

Myostatin属于TGF-beta生长因子超家族成员之一,功能研究表明Myostatin是骨骼肌生长发育负调控因子。但是,目前对Myostatin在骨骼肌干细胞的激活、增殖与分化过程中的功能及作用机制并不清楚。近年来的研究发现miRNA参与骨骼肌干细胞的激活、增殖与分化过程的调控。因此,我们利用Myostatin基因敲除小鼠通过miRNA芯片的分析,系统筛选了骨骼肌组织中受Myostatin信号调控的miRNAs,发现miR-A受Myostatin信号的负调控。采用C2C12细胞系的体外（In vitro）研究表明miR-A能够促进骨骼肌细胞的分化。为了进一步分析miR-A对骨骼肌干细胞功能的调控作用,我们制备了miR-A转基因小鼠。miR-A转基因鼠的骨骼肌组织发育正常,与野生型小鼠相比,miR-A转基因鼠的骨骼肌干细胞数量显著减少。采用Cardiotoxin（CTX）诱导的骨骼肌损伤-再生模型,发现骨骼肌组织损伤1.5天和3.5天后Pax7、MyoD及Pax7/MyoD的细胞数量在miR-A转基因小鼠中均高于野生型小鼠,这些数据提示miR-A能够促进骨骼肌干细胞的激活。进一步分析miR-A调控的靶基因,发现Eya4基因的3'-UTR含有miR-A的结合位点,通过报告基因分析表明miR-A可以靶向Eya4。miR-A转基因鼠骨骼肌组织中Eya4蛋白表达显著降低进一步证明miR-A可以调控Eya4基因的表达和功能。结论:总之,本研究发现Myostatin负调控的miR-A能够通过靶向Eya4基因促进骨骼肌干细胞的激活,从而促进骨骼肌再生。

关键词：骨骼肌干细胞 Myostatin miR-A 信号调节靶基因

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低频超声辐照对顺铂抑制人肝癌细胞体内外生长增效作用的实验研究

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中国医药 2012年第12期7卷 1538-1541页

作者：刘朝阳王振潮李涛宋丽京翁春晓中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院生物检测中心北京100021 北京中美联医学科学研究院中国医学科学院基础医学研究所基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的观察低频超声辐照对顺铂抑制人肝癌细胞的体内外生长增效作用，探讨低频超声在肿瘤化学治疗增效中的应用价值。方法①体外实验：将人肝癌细胞SMMC7721分为A组（实验空白对照）；B组（SMMC7721细胞常规培养）；C组（单纯使用顺铂治... 详细信息

目的观察低频超声辐照对顺铂抑制人肝癌细胞的体内外生长增效作用，探讨低频超声在肿瘤化学治疗增效中的应用价值。方法①体外实验：将人肝癌细胞SMMC7721分为A组（实验空白对照）；B组（SMMC7721细胞常规培养）；C组（单纯使用顺铂治疗，药物终浓度为2．5和5mg／L；D组（低频超声治疗，频率为30kHz，强度分别为1．4和2．8W／cm2，每个强度分别辐照2min、5min）；E组（顺铂＋低频超声，用法同c组和D组）。计算联合治疗指数值，用噻唑蓝比色法检测对人肝癌细胞SMMC7721生长抑制率。②体内实验：16只裸鼠体内移植人肝癌肿瘤SMMC7721模型分为对照组、顺铂组、低频超声组和观察组（顺铂＋低频超声），各4只。采用裸鼠体内移植人肝癌细胞SMMC7721，用低频超声波（频率30000Hz，超声强度2．8W／cm2）对腹腔内注射顺铂（5m/kg）的裸鼠进行肿瘤局部辐射，测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，实验结束称瘤重和体重，计算肿瘤抑制率。结果D组1．4W／cm。和2．8w／cm2辐照2min的生长抑制率分别为5．3％和8．0％，辐照5min的生长抑制率分别为12．2％和23．8％；E1组（顺铂终浓度2．5mg／L＋低频超声强度1．4W／cm2）辐照2和5min的生长抑制率分别为55．4％和69．5％，E2组（顺铂终浓度2．5mg／L＋低频超声强度2．8w／cm。）分别为70．9％和77．9％，E3（顺铂终浓度5．0mg／L＋低频超声强度1．4W／cm2）分别为70．8％和75．5％，E4组（顺铂终浓度5．0mg／L＋低频超声强度2．8W／cm。）分别为80．1％和84．9％。低频超声波联合顺铂对SMMC7721细胞生长抑制率明显高于单独低频超声。体内实验中，不同治疗方法干预后，对照组、顺铂组、低频超声组和观察组裸鼠平均瘤重分别为（0．65±0．31）、（0．42±0．19）、（0．50±0．17）、（0．29±0．18）g，观察组与对照组间差异有统计学意义（P〈0．05）。顺铂组、低频超声组和观察组的肿瘤抑制率分别为36．0％、23．8％、55．2％，低频超声组和顺铂组的差异无统计学意义（P〉0．05），观察组与低频超声组的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论低频超声在体内、外均明显增强抗癌药顺铂对人肝癌细胞SMMC7721的抑制作用。低频超声波的作用时间是增加化学治疗药物细胞毒作用的关键因素，低频超声波局部透射可以增加全身给药化学治疗的疗效，有望成为临床治疗的新方法。

关键词：低频超声人肝癌细胞顺铂增效作用

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连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响

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中国计划生育学杂志 2012年第5期20卷 313-317页

作者：高小博马燕马旭彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家人口计生委科学技术研究所

目的:研究与先天性白内障相关的连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响。方法:将野生型和携带S258F突变的Cx50编码区分别构建到pcDNA3.1myc/his真核表达载体上,通过体外转录获得相应的RNA产物,将RNA产物分别显微注射到1细... 详细信息

目的:研究与先天性白内障相关的连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响。方法:将野生型和携带S258F突变的Cx50编码区分别构建到pcDNA3.1myc/his真核表达载体上,通过体外转录获得相应的RNA产物,将RNA产物分别显微注射到1细胞期的斑马鱼胚胎,通过显微镜观察斑马鱼晶状体表型,并利用全胚原位杂交技术分析过表达野生型和突变型Cx50对晶状体标志基因Cx23表达的影响。结果:与野生型胚胎相比,S258F突变型Cx50过表达引起斑马鱼胚胎白内障表型,过表达野生型Cx50也引起白内障表型,但是畸形数量明显少于突变型,野生型和突变型Cx50的过表达均下调了Cx23的表达。结论:连接蛋白Cx50S258F突变体可引起斑马鱼白内障表型,提示Cx50的S258F突变体是造成先天性白内障的原因。

关键词：先天性白内障晶状体连接蛋白 S258F 斑马鱼

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