检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2009年第5期29卷 453-458页

作者：胡光宇吴旭东彭小忠龚燕华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPE... 详细信息

目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPER载体中,观察其瞬时转染对HeLa细胞BrdU掺入的影响;用G418筛选并建立稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,观察敲低NSPc1对HeLa细胞体外增殖能力的影响。结果(1)设计的siRNA序列可显著敲低NSPc1的表达;(2)瞬时敲低NSPc1阻碍了HeLa细胞BrdU的掺入;(3)成功构建稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,其增殖速度较对照组明显变慢。结论NSPc1的正常表达是维持HeLa细胞正常增殖能力所必需的,稳定敲低NSPc1的HeLa细胞群可作为进一步研究NSPc1相关信号通路的有效模型。

关键词： Polycomb NSPc1 HeLa细胞稳定细胞系增殖

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真核生物中锌指蛋白的结构与功能

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第3期25卷 206-211页

作者：李晓波张俊武北京协和医学院基础学院、中国医学科学院基础医学研究所、医学分子生物学国家重点实验室北京100005

真核生物中的许多蛋白质分子包含锌指结构区,这类蛋白称为锌指蛋白.锌指蛋白因其包含特殊的指状结构,在对DNA、蛋白质和RNA的识别和结合中起重要作用.许多锌指蛋白的锌指结构域包含能与DNA特异结合的区域,并与某些效应结构域(如KRAB、S... 详细信息

真核生物中的许多蛋白质分子包含锌指结构区,这类蛋白称为锌指蛋白.锌指蛋白因其包含特殊的指状结构,在对DNA、蛋白质和RNA的识别和结合中起重要作用.许多锌指蛋白的锌指结构域包含能与DNA特异结合的区域,并与某些效应结构域(如KRAB、SCAN、BTB/POZ、SNAG、SANT和PLAG等)相连,这类锌指蛋白常作为转录因子起作用,可调控靶基因的转录.一些锌指蛋白包含蛋白质识别结构域(如LIM锌指、MYND锌指、PHD锌指和RING锌指等),它们能够特异地介导蛋白质之间的相互作用,因此被称作蛋白适配器.此外,某些锌指蛋白还可以结合RNA,起转录后调控作用.本文就锌指蛋白与DNA、RNA以及蛋白质分子间的相互作用作一综述.

关键词：锌指蛋白功能结构域转录因子蛋白质适配器 RNA结合

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PGC-1β调节大鼠ALAS-1基因表达机制的初步探讨

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 587-592页

作者：刘阳邵迪方福德常永生中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测PGC-1β在人肝癌细胞(Hep G2)和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达。方法在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统检测过表达PGC-1β时大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化。同时构建了5′端顺式元件系列截短和... 详细信息

目的检测PGC-1β在人肝癌细胞(Hep G2)和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达。方法在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统检测过表达PGC-1β时大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化。同时构建了5′端顺式元件系列截短和突变的ALAS-1启动子报告基因,检测并分析介导PGC-1β作用的转录因子结合元件。分离肝原代细胞并检测PGC-1β对ALAS-1转录的影响。构建干扰NRF-1基因的siRNA腺病毒,证明NRF-1介导PGC-1β激活ALAS-1启动子转录的作用。结果在Hep G2细胞中,过表达PGC-1β显著促进ALAS-1表达。分别构建了FoxA2和NRF1结合元件突变的ALAS-1启动子,发现PGC-1β对NRF1突变的ALAS-1启动子的激活作用显著下降,而FoxA2作用不明显。在肝原代细胞中过表达PGC-1β促进了ALAS-1的转录。当用小RNA干扰NRF-1的表达后,则抑制了PGC-1β对ALAS-1转录的促进作用。结论在Hep G2和大鼠肝原代细胞中,PGC-1β能够促进ALAS-1基因的表达,并且这种作用是通过NRF-1介导完成的。

关键词： PGC-1β NRF-1 ALAS-1 转录调控

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孤独症的遗传学和神经生物学研究进展

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中国科学：生命科学 2015年第8期45卷 717-724页

作者：朱春燕许琪中国医学科学院基础医学研究所&北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

孤独症是一种遗传度高达90%的多基因复杂疾病,具有典型的遗传和表型异质性,并受到环境因素的影响.本文对近年来孤独症遗传学、表观遗传学和神经生物学3方面的进展进行了简要综述.细胞遗传学法、全基因组扫描及候选基因法是孤独症分子遗... 详细信息

孤独症是一种遗传度高达90%的多基因复杂疾病,具有典型的遗传和表型异质性,并受到环境因素的影响.本文对近年来孤独症遗传学、表观遗传学和神经生物学3方面的进展进行了简要综述.细胞遗传学法、全基因组扫描及候选基因法是孤独症分子遗传学研究中较为常见的3种方法.虽然应用上述方法发现了一些孤独症易感基因集中的染色体区域,但确切的致病或易感基因仍未被检出.因而,越来越多的关注被集中于如何提高样本同质性、如何将遗传学机制与环境作用相联系、如何提高微效基因的检出率上.在提高样本同质性方面,功能核磁共振及交叉表型的研究正在进行.同时,表观遗传学的研究可以联系遗传与环境因素,从而更好地解释孤独症的发病机制.目前,对染色体上表观遗传与遗传共同调控的区域,如7号和15号染色体长臂,进行了大量研究.在神经生物学方面,神经递质、神经发育及神经免疫学假说均有一定的进展.其中,针对神经递质的研究主要集中于5-羟色胺、?-氨基丁酸及谷氨酸.在神经发育假说方面,神经发育相关蛋白,如肝细胞生长因子、神经生长因子及Reelin,研究得较为深入.

关键词：孤独症分子遗传学表观遗传学神经生物学

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一种用作阴性对照的siRNA可诱导人K562细胞向红系分化

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中国生物化学与分子生物学报 2011年第4期27卷 330-336页

作者：范翠青朱宁沈岩陈梅红中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

我们发现,一种在RNA干扰实验中用作阴性对照的商业化siRNA具有明显的诱导人慢性髓性白血病K562细胞系向红系方向分化的作用.它表现为K562细胞瞬时转染该siRNA后,红系分化的特异表面标志CD235及ε-、γ-和β-珠蛋白的表达升高,GATA-2的... 详细信息

我们发现,一种在RNA干扰实验中用作阴性对照的商业化siRNA具有明显的诱导人慢性髓性白血病K562细胞系向红系方向分化的作用.它表现为K562细胞瞬时转染该siRNA后,红系分化的特异表面标志CD235及ε-、γ-和β-珠蛋白的表达升高,GATA-2的表达降低,细胞增殖速度减慢,软琼脂克隆形成率降低,并且此过程不伴随细胞凋亡.而生物信息学分析显示,该siRNA序列与目前所有已知人类基因均无明显同源性.研究结果提示,该siRNA不适于用作红系分化实验中的阴性对照.siRNA的作用远比人们目前所知的要复杂得多,siRNA的脱靶效应应当引起研究者的足够重视,在RNA干扰实验中阴性对照siRNA的选择会极大地影响对实验结果的判读.

关键词： siRNA K562细胞红系分化

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重组融合蛋白EGF-E4orf4多聚体的鉴定及结构分析

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中国生物工程杂志 2012年第7期32卷 1-7页

作者：倪蓓蓓范真真陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的:确认重组融合蛋白EGF-E4orf4为多聚体及其具有EGFR结合活性。方法:通过凝胶过滤层析、SDS-PAGE和免疫印迹分析重组融合蛋白EGF-E4orf4是否形成聚合物。利用动态光散射、静态光散射和圆二色谱测定EGF-E4orf4的分子半径、分子量和二... 详细信息

目的:确认重组融合蛋白EGF-E4orf4为多聚体及其具有EGFR结合活性。方法:通过凝胶过滤层析、SDS-PAGE和免疫印迹分析重组融合蛋白EGF-E4orf4是否形成聚合物。利用动态光散射、静态光散射和圆二色谱测定EGF-E4orf4的分子半径、分子量和二级结构。应用流式细胞术分析EGF-E4orf4与细胞表面EGFR结合能力。结果:凝胶过滤等方法证实EGF-E4orf4形成了多聚体,光散射实验证明了EGF-E4orf4多聚体的分子量和分子半径分别为1.656×107Da、67.90nm,约为820聚体。圆二色谱表明该聚合体融合蛋白含有大量的β-折叠结构。受体结合实验证明该聚合物具有EGFR结合活性。结论:重组融合蛋白EGF-E4orf4以蛋白多聚体形式存在,可以与EGFR结合。因此,EGF-E4orf4作为一种新型靶向性抗肿瘤药物,具有潜在的临床应用前景。

关键词： EGF-E4orf4 多聚体光散射圆二色谱生物学活性

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稳定表达人血红素加氧酶-1细胞系的建立及其功能鉴定

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中国医学科学院学报 2014年第4期36卷 420-425页

作者：杨根欢吴为李砚川倪冷王占启宋希涛刘昌伟中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Weste... 详细信息

目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测HO-1的表达。将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒。用携带HO-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测HO-1的表达。将过氧化氢加入正常的及过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量。结果成功筛选出能稳定表达HO-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其HO-1的表达明显升高。加入过氧化氢后,过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少。结论成功构建了能稳定表达人HO-1的细胞系,内源性过表达HO-1能够对抗细胞的氧化损伤。

关键词：血红素加氧酶-1 慢病毒稳定细胞株氧化损伤

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非编码RNA与动物发育

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中国科学（C辑） 2009年第1期39卷 21-30页

作者：黄守均朱大海北京协和医学院基础学院/中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是指不翻译产生蛋白质的RNA.近年来,对ncRNA在基因表达调控中的功能进行了广泛的研究,ncRNA在发育、代谢和疾病等生命活动中都起着重要的作用.本文总结了ncRNA在胚胎发育、干细胞维持和器官发生等动物... 详细信息

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是指不翻译产生蛋白质的RNA.近年来,对ncRNA在基因表达调控中的功能进行了广泛的研究,ncRNA在发育、代谢和疾病等生命活动中都起着重要的作用.本文总结了ncRNA在胚胎发育、干细胞维持和器官发生等动物发育过程中的作用.

关键词： ncRNA发育干细胞基因印记

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梅毒螺旋体外膜蛋白研究进展

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微生物学报 2021年第3期61卷 539-554页

作者：王哲储引娣张艳娟李军范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院皮肤科北京100730

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)亚种苍白螺旋菌引起的性传播感染性疾病,主要通过母婴感染或性接触的方式传播。梅毒螺旋体的外膜蛋白在梅毒螺旋体的传播和宿主的黏附等方面起重要作用,因此,鉴定可以作为抗生素作用靶点的梅毒... 详细信息

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum)亚种苍白螺旋菌引起的性传播感染性疾病,主要通过母婴感染或性接触的方式传播。梅毒螺旋体的外膜蛋白在梅毒螺旋体的传播和宿主的黏附等方面起重要作用,因此,鉴定可以作为抗生素作用靶点的梅毒螺旋体外膜蛋白一直是梅毒疫苗开发的研究重点。本文重点阐述了梅毒螺旋体外膜蛋白的结构功能等特性,并将目前针对细菌外膜蛋白为靶点的药物的研究进展进行总结,以期为针对梅毒螺旋体的外膜蛋白为靶点的相关药物的研发提供一些新思路。

关键词：梅毒螺旋体外膜蛋白抗生素药物靶点

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NF-κB抑制剂通过逆转LPS诱导的BMPRⅡ下调改善肺血管重构

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生理学报 2020年第5期72卷 541-550页

作者：周美君邢岩江杨隽中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院细胞生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 浙江大学医学院基础医学院生理学系浙江大学医学院附属第二医院心内科杭州310058

动脉性肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)的发生、发展与骨形态发生蛋白受体II型(bone morphogeneticprotein receptor type II,BMPRII)编码基因的遗传突变和核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)通路介导的炎症反应密切相关。本文旨在研究NF-κB通路抑制剂对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺动脉内皮细胞损伤的作用。用1μg/mL的LPS处理人肺动脉内皮细胞,用免疫印迹和qPCR检测BMPRII和白介素8(interleukin-8,IL-8)的表达水平。腹腔注射野百合碱(monocrotaline,MCT)建立大鼠PAH模型,用免疫荧光染色法检测肺动脉内皮细胞BMPRII和IL-8的表达情况,检测模型大鼠心脏血流动力学变化和肺血管重构情况。结果显示,LPS可引起人肺动脉内皮细胞BMPRII的表达下调和IL-8的表达上调,NF-κB抑制剂BAY11-7082(10μmol/L)可逆转LPS的作用。在MCT-PAH大鼠模型中,肺动脉内皮细胞BMPRII表达下调,IL-8表达上调,右心室/(左心室+室间隔)重量比值[weight ratio of right ventricle to left ventricle plus septum,RV/(LV+S)]和右心室收缩压(rightventricular systolic pressure,RVSP)显著升高,心输出量(cardiac output,CO)和三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annular plane systolicexcursion,TAPSE)明显降低,肺血管壁明显增厚,连续21天腹腔注射BAY11-7082(5 mg/kg)可逆转上述变化。以上结果提示,LPS通过NF-κB信号通路下调BMPRII的表达水平,促进PAH的发生、发展,因此NF-κB信号通路可作为PAH潜在治疗靶点。

关键词：肺动脉高压骨形态发生蛋白受体Ⅱ型核因子κB信号通路 BAY11-7082

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