检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2011年第11期31卷 1217-1222页

作者：许家林李艳凤朱大海中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建心肌锚定重复序列蛋白(CARP)基因心脏特异敲除小鼠模型,为研究CARP基因与心脏疾病的关系奠定基础。方法构建CARP基因条件打靶载体pL253-CARP-LoxP电转入小鼠胚胎干细胞(ES)细胞,G418和GANC药物筛选阳性细胞克隆,Southern blot确... 详细信息

目的构建心肌锚定重复序列蛋白(CARP)基因心脏特异敲除小鼠模型,为研究CARP基因与心脏疾病的关系奠定基础。方法构建CARP基因条件打靶载体pL253-CARP-LoxP电转入小鼠胚胎干细胞(ES)细胞,G418和GANC药物筛选阳性细胞克隆,Southern blot确定CARP基因条件打靶载体转染成功。胚胎注射ES细胞入小鼠囊胚,获得嵌合体小鼠与心脏特异启动子Cre小鼠(α-MHC-Cre)杂交。结果得到6只嵌合体小鼠,与α-MHC-Cre小鼠杂交获得CARP基因心脏特异敲除小鼠(CARP-KO),半定量RT-PCR和Western blot确定CARP基因在CARP-KO小鼠心脏缺失。该小鼠早期胚胎发育和个体生长、心脏发育正常,但心肌肥厚标志基因β-MHC和ANF显著升高(分别为2.25±0.04和1.45±0.03)(P<0.05)。结论成功构建CARP基因心脏特异敲除小鼠,CARP基因缺失对小鼠胚胎发育、个体生长和心脏发育没有显著影响。

关键词：心肌锚定重复序列蛋白基因打靶心肌肥厚

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人γδT细胞能够识别肿瘤相关蛋白AGR2

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免疫学杂志 2018年第8期34卷 658-665,673页

作者：董青青陈慧张建民何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家分子生物学重点实验室北京100005

目的筛选人外周血γδT细胞识别的肿瘤相关蛋白配体,为阐明γδT细胞的抗原识别机制及抗肿瘤免疫效应机制奠定基础。方法以3种特异性结合肿瘤的CDR3δ序列合成肽为探针,通过人类全蛋白质组芯片筛选CDR3δ合成肽相互作用的蛋白;流式细胞... 详细信息

目的筛选人外周血γδT细胞识别的肿瘤相关蛋白配体,为阐明γδT细胞的抗原识别机制及抗肿瘤免疫效应机制奠定基础。方法以3种特异性结合肿瘤的CDR3δ序列合成肽为探针,通过人类全蛋白质组芯片筛选CDR3δ合成肽相互作用的蛋白;流式细胞术检测蛋白在肿瘤细胞系的表达;原核表达纯化肿瘤相关蛋白AGR2(前梯度2蛋白),ELISA验证其与探针肽的结合;固相化包被蛋白,检测人外周血单个核细胞中γδT细胞的活化相关分子的表达;乳酸脱氢酶释放法检测蛋白对γδT细胞体外细胞毒活性的作用。结果生物素标记的CDR3δ肽,共筛选到与蛋白质组芯片结合的候选蛋白配体共6种,分别是PHF21A、LDB3、SYF2、PPP1R14A、AGR2和SYAP1;流式结果显示AGR2在几种肿瘤细胞系细胞中均有表达,但表达水平不一致;ELISA结果显示GST-AGR2能特异性地结合CDR3δ肽OT3;固相包被GST-AGR2,能显著促进γδT细胞活化相关分子CD69、CD25的表达;与GST-AGR2预孵育能在体外显著促进γδT细胞对MDA-MB-231和MCF-7细胞的细胞毒作用。结论肿瘤相关蛋白AGR2能够在体外促进γδT细胞的活化,增强γδT细胞对乳腺癌细胞的细胞毒活性,可能是γδT细胞识别的肿瘤相关蛋白配体。

关键词： γδT细胞蛋白芯片肿瘤蛋白配体前梯度2蛋白

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亚硒酸钠通过AMPK/mTOR通路调控白血病NB4细胞凋亡

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基础医学与临床 2013年第3期33卷 297-302页

作者：段婧罗慧史可鉴杨洋许彩民中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院北京100005

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及... 详细信息

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及P70S6K的磷酸化水平、流式细胞术检测NB4细胞凋亡率;免疫共沉淀法检测AMPK和mTOR的相互作用。结果亚硒酸钠可以上调NB4细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR及P70S6K的磷酸化水平;AICAR和亚硒酸钠单独处理具有类似的促进NB4细胞凋亡的效果;干扰AMPK后,mTOR及P70S6K的磷酸化水平上升,亚硒酸钠对NB4细胞的促凋亡作用被拮抗;AMPK和mTOR有直接相互作用。结论亚硒酸钠可通过激活AMPK表达,抑制mTOR及P70S6K,促进NB4细胞凋亡。

关键词：亚硒酸钠白血病 AMPK mTOR

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miR-196a-5p抑制小鼠胚胎干细胞的自我更新

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基础医学与临床 2014年第12期34卷 1645-1649页

作者：赵华路姚南魏雪菊王兰兰张俊武黄粤余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家医学分子生物学重点实验室北京100005

目的研究miR-196a-5p在小鼠胚胎干细胞(m ESC)自我更新中的功能。方法定量PCR法确定miR-196a-5p在m ESC早期分化过程中的表达。在胚胎干细胞中过表达miR-196a-5p类似物,通过集落形成实验、细胞周期分析、碱性磷酸酶染色和Oct4染色确定mi... 详细信息

目的研究miR-196a-5p在小鼠胚胎干细胞(m ESC)自我更新中的功能。方法定量PCR法确定miR-196a-5p在m ESC早期分化过程中的表达。在胚胎干细胞中过表达miR-196a-5p类似物,通过集落形成实验、细胞周期分析、碱性磷酸酶染色和Oct4染色确定miR-196a-5p过表达对m ESC自我更新及增殖的影响。结果 miR-196a-5p在m ESC早期分化过程中表达上升(P<0.05),在m ESC中过表达miR-196a-5p类似物后,ESC的集落形成及增殖能力被明显抑制(P<0.01),碱性磷酸酶活性下降,Oct4蛋白水平也出现明显下降。结论 miR-196a-5p具有抑制m ESC自我更新的能力,在m ESC早期分化过程中可能发挥重要作用。

关键词：小鼠胚胎干细胞自我更新

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靶向细胞衰老在血管疾病中的作用及其潜在应用

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中国科学：生命科学 2022年第5期52卷 682-690页

作者：王惠瑜丁杨楠魏子钰陈厚早刘德培中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

血管衰老是指血管发生形态、结构改变及功能失常的一系列退行性变化的过程.随着血管衰老、动脉粥样硬化等血管性疾病的发病风险显著增加,血管衰老成为探索衰老相关性血管疾病干预策略的重要方向,改变血管衰老的进程有望延缓心血管疾病发... 详细信息

血管衰老是指血管发生形态、结构改变及功能失常的一系列退行性变化的过程.随着血管衰老、动脉粥样硬化等血管性疾病的发病风险显著增加,血管衰老成为探索衰老相关性血管疾病干预策略的重要方向,改变血管衰老的进程有望延缓心血管疾病发生.细胞衰老是血管衰老的重要基础,以往的研究集中于血管内皮细胞衰老在血管衰老和血管性疾病中的作用,而对于血管平滑肌细胞衰老的认识较少.本文重点讨论了血管细胞中平滑肌细胞的衰老及其在血管性疾病发病中的研究进展,并阐述了血管衰老细胞的清除(senotherapy)在延缓衰老和衰老相关血管性疾病中的作用,以期为促进血管健康和延缓衰老相关血管性疾病提供新策略.

关键词：血管衰老平滑肌细胞衰老血管性疾病 senotherapy

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全反式维甲酸对SH-SY5Y细胞全基因组启动子区组蛋白H3乙酰化修饰的影响

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科学通报 2009年第1期54卷 46-52页

作者：方洪波米洋张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA,简称RA)诱导人类神经细胞分化的表观遗传调控机制,应用染色质免疫沉淀与启动子芯片联合技术(ChIP-on-chip),对RA诱导24h后神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中两万余个基因启动子区的组蛋白H3... 详细信息

为研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA,简称RA)诱导人类神经细胞分化的表观遗传调控机制,应用染色质免疫沉淀与启动子芯片联合技术(ChIP-on-chip),对RA诱导24h后神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中两万余个基因启动子区的组蛋白H3乙酰化修饰状态进行了高通量检测和分析.首先分别制备RA处理组和对照组的标记探针,然后将人类基因组启动子芯片与探针进行杂交,获得RA诱导SH-SY5Y细胞分化早期全基因组启动子区H3组蛋白乙酰化的数据.结果分析显示,RA处理导致597个基因启动子的乙酰化程度显著升高、647个基因降低.本研究结果显示上述技术的高效与可行,并为深入研究RA诱导分化相关基因的表观遗传调控机制奠定了基础.

关键词：全反式维甲酸(RA) 染色质免疫沉淀启动子芯片细胞分化组蛋白乙酰化

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神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响

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中华医学杂志 2015年第8期95卷 601-605页

作者：刁永鹏郭李龙连利珊闫盛陈厚早李拥军中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科 100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的评价神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响.方法 54只小鼠按随机数字表法分为正常对照组（n=6）、单纯缺血组（n=24）和缺血＋去神经支配组（n=24）.分别建立单纯后肢缺血模型和后肢缺血＋去神经支配模型,在术后第7... 详细信息

目的评价神经因素对缺血肢体血管生成和骨骼肌肌纤维重塑的影响.方法 54只小鼠按随机数字表法分为正常对照组（n=6）、单纯缺血组（n=24）和缺血＋去神经支配组（n=24）.分别建立单纯后肢缺血模型和后肢缺血＋去神经支配模型,在术后第7、14、21和28天取患肢腓肠肌.对3组腓肠肌标本进行HE染色,CD31和PCNA免疫组化染色,酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测神经生长因子（NGF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达.结果术后第7天,缺血＋去神经支配组的患肢缺血程度评估1～4级的比例高于单纯缺血组（33.4％比16.6％）,而0级的比例低于单纯缺血组（16.7％比33.3％）,两组总体差异有统计学意义（χ^2 =7.94,P =0.047）.术后第28天缺血＋去神经支配组与单纯缺血组相比,其内皮细胞增殖指数[（2.4±0.4）％比（5.7±1.0）％,P=0.000]、毛细血管密度[（0.44±0.05）比（0.61 ±0.07）,P=0.000]、NGF表达量[（6.71±0.94）pg/ml比（8.36±0.77） pg/ml,P=0.008]和VEGF表达量[（11.32±1.56） pg/ml比（15.13 ±2.93）pg/ml,P=0.018]均明显降低.术后第28天,缺血＋去神经支配组的腓肠肌Ⅱ型肌纤维比例[（84.9±3.8）％]明显高于单纯缺血组[（78.8±1.8）％,P=0.008].结论神经因素在缺血肢体血管生成和维持骨骼肌肌纤维类型上具有重要作用,但相关的分子调控机制仍需进一步研究.

关键词：肢体缺血去神经支配血管生成肌纤维类型

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巴曲酶对犬颈总动脉人工血管旁路术后远端吻合口内膜增生的影响

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中华医学杂志 2009年第1期89卷 48-53页

作者：陈野野刘昌伟叶炜张然韦玉生刘德培中国医学科学院北京协和医院血管外科 100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的研究人工血管旁路术后远端吻合口局部内膜增生的形态学表现、部分炎症因子及生长因子的表达及药物巴曲酶对其的影响。方法建立12只犬左颈总动脉膨体聚四氟乙烯（ePTFE）人工血管旁路移植模型，随机分为巴曲酶组和对照组，28d后吻合... 详细信息

目的研究人工血管旁路术后远端吻合口局部内膜增生的形态学表现、部分炎症因子及生长因子的表达及药物巴曲酶对其的影响。方法建立12只犬左颈总动脉膨体聚四氟乙烯（ePTFE）人工血管旁路移植模型，随机分为巴曲酶组和对照组，28d后吻合口局部取材，应用HE、Masson染色、免疫组化（IHC）、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫印迹（Western Blot）等实验方法观察吻合口内膜厚度、胞外基质（ECM）相对含量、新生内膜平滑肌细胞增殖率及单核细胞趋化蛋白．1（MCP一1）、血小板源生长因子B（PDGF—B）mRNA和蛋白表达，并用半定量方法比较两组间的差异。结果术后28d，远端吻合口均已形成有内皮细胞（EC）覆盖的新生内膜，且均表达MCP-1及PDGF．B。实验组与对照组相比，其吻合口新生内膜厚度明显减少[（381．3±144．7）μm对（213．8±29．0）μm，P=0．036]，胞外基质相对含量明显降低（P=0．006），MCP-1表达量明显下降（RT-PCRP=0．025，Western BlotP=0．016），而PDGF—B表达量差异无统计学意义（RT—PCRP=0．055，Western BlotP=0．337），平滑肌细胞增殖率无明显差异（P=0．109）。结论巴曲酶可抑制人工血管旁路术后早期吻合口新生内膜胞外基质的沉积和MCP-1的表达，抑制新生内膜厚度，为提高人工血管移植远期通畅率提供新的临床应用及研究思路。

关键词：人工血管内膜增生单核细胞趋化蛋白-1 血小板源生长因子-B

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IFN-λs的最新研究进展

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 95-100页

作者：惠希武陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

干扰素-λs(Interferon-λs,IFN-λs)是近年来发现的一类新型干扰素,由于其兼具I型干扰素和白细胞介素(interleukin,IL)-10家族的双重特征,因此其成员的命名为IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28A)和IFN-λ3(IL-28B)。IFN-λs的受体隶属于II型细胞因子受体家族(classII cytokine receptor family,CRF2),由特有的配基结合亚基CRF2-12/IFN-λR1(又称IL-28Rα)和辅助亚基CRF2-4(IL-10R2)组成。IFN-λs与I型IFN相同,均可通过激活JAK-STAT(janus kinase-signal transducer and activator of transcription)信号通路来传递配基结合信号,因此IFN-λs显示了与IFN-α相似的抗病毒、抑制肿瘤细胞生长以及具免疫调节功能等生物学活性,但由于其骨髓抑制及毒副作用少而生物学作用具长效性,且临床试验研究已经取得了突破性进展,故有望在不久的将来成为一个新的基因工程药物。

关键词： IFN-λs IFN-λ受体生物学功能

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蛋白质、多肽类药物聚乙二醇修饰的研究进展

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 520-524页

作者：惠希武陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

随着基因工程技术的发展,蛋白质、多肽类药物的临床应用越来越受到重视。但蛋白质、多肽类药物的免疫原性和毒副反应及半衰期短等问题限制了其应用和发展。聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)能够使蛋白药物溶解行为改善,稳定性增强,免... 详细信息

随着基因工程技术的发展,蛋白质、多肽类药物的临床应用越来越受到重视。但蛋白质、多肽类药物的免疫原性和毒副反应及半衰期短等问题限制了其应用和发展。聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)能够使蛋白药物溶解行为改善,稳定性增强,免疫原性消除或降低,循环半衰期延长,药代动力学优化,在生物技术和生物医学中具有广泛的应用前景。本文就蛋白质、多肽类药物的PEG修饰、修饰技术的发展、修饰的主要途径以及PEG修饰药物的现状及前景作一综述。

关键词：蛋白多肽聚乙二醇聚乙二醇修饰

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