检索结果-内蒙古大学图书馆

红细胞生成素基因克隆及其在酵母细胞中的表达

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中国医学科学院学报 1997年第5期19卷 389-394页

作者：张旭黄秉仁蔡良琬中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

用PCR方法从人红细胞生成素CDNA中扩增出咸熟肽基因片段，与含酵母系统启动子的中间载体pSK43SB融合后重组于酵母游离型表达载体YEpHc8中，转化宿主菌后获得表达，并对表达蛋白的活性及糖基化情况初步进行分析。

关键词：酵母表达红细胞生成素基因克隆糖基化 PCR

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在大肠杆菌中以融合蛋白高效表达基因工程产品人心钠素

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中国医学科学院学报 2001年第6期23卷 573-579页

作者：陈伟京王俊路金芝卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建以融合蛋白形式在大肠杆菌中高效表达心钠素的重组质粒,稳定高效地获得基因工程产品心钠素。方法采用PCR和亚克隆技术构建带有心钠素的融合基因并在大肠杆菌中高效表达融合蛋白,利用操纵子重复克隆提高表达量,以凝血酶切割融合... 详细信息

目的构建以融合蛋白形式在大肠杆菌中高效表达心钠素的重组质粒,稳定高效地获得基因工程产品心钠素。方法采用PCR和亚克隆技术构建带有心钠素的融合基因并在大肠杆菌中高效表达融合蛋白,利用操纵子重复克隆提高表达量,以凝血酶切割融合蛋白释放心钠素小肽并通过柱层析纯化蛋白质,检定产品的各项理化指标和大鼠的体内降压、体内利尿和体外舒张血管等药理活性。结果构建了4个高效表达的心钠素融合蛋白的质粒,分别含1～4个目的基因串联操纵子;通过温度诱导表达后,该系列表达的目的蛋白分别为菌体总蛋白的46%、54.8%、56.1%和60.1%;提取纯化包涵体形式的融合蛋白后,以凝血酶切割释放心钠素,再经纯化分离出心钠素;实验室摇瓶发酵每升培养液可获得3mg以上的纯度大于96%的产品,产品具有利尿、降压和舒张血管的药理活性。结论利用融合基因的克隆与表达成功地研制了人心钠素基因工程产品。

关键词：心钠素大肠杆菌融合蛋白凝血酶基因工程

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小RNA干扰PCBP2在神经胶质瘤细胞中对P53相关基因的调节和对细胞增殖的影响

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 776-781页

作者：韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP... 详细信息

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP2蛋白的抑制效果及对P53蛋白和它的两个靶基因PUMA和BAX的表达影响,同时检测P53共调节因子FHL2和同家族成员FHL1表达变化。用生物素pull-down分析PCBP2是否和FHL家族成员mRNA结合。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法检测细胞增殖能力,Hoechst染色观察细胞凋亡率。结果 PCBP2 siRNA转染这3株细胞后使PCBP2蛋白表达水平明显下调(P<0.05);增加P53及它的靶基因PUMA和BAX的蛋白表达(P<0.05);抑制FHL2蛋白(P<0.05),但并不结合其mRNA的3'非编码区(3'UTR);Brd U阳性细胞减少(P<0.05);Hoechst染色阳性细胞增多(P<0.05)。结论抑制PCBP2表达可以增强胶质瘤细胞中P53通路活性,并减弱细胞增殖能力,诱导细胞凋亡。

关键词： RNA干扰多聚胞嘧啶结合蛋白2 P53 细胞增殖细胞凋亡

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联合使用米索前列醇和米非司酮以获取恒河猴胎猴样品

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基础医学与临床 2009年第9期29卷 908-910页

作者：赵理罕园园唐东红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立获取恒河猴早、中、晚期不同胎龄胎猴样品的新方法。方法通过B超确定恒河猴孕猴怀孕天数后,皮下注射米非司酮,在其阴道后穹窿放置米索前列醇以促使孕猴终止妊娠,获取胎猴样品。通过b ishop评分、孕猴终止妊娠率和胎猴脑组织总RN... 详细信息

目的建立获取恒河猴早、中、晚期不同胎龄胎猴样品的新方法。方法通过B超确定恒河猴孕猴怀孕天数后,皮下注射米非司酮,在其阴道后穹窿放置米索前列醇以促使孕猴终止妊娠,获取胎猴样品。通过b ishop评分、孕猴终止妊娠率和胎猴脑组织总RNA提取质量评估该新方法效果。结果实验组孕猴的宫颈评分和胎猴3日娩出率均高于对照组(P<0.05),从胎猴脑组织中提取的总RNA质量良好。结论联合使用米索前列醇和米非司酮是一种有效而安全的获取恒河猴胎猴样品的新方法。

关键词：恒河猴米非司酮米索前列醇

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树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶cDNA和蛋白质序列结构分析

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中国医学科学院学报 2002年第2期24卷 149-155页

作者：张坚曾武威陈保生吴钢张文成张可满中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的克隆获得树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶cDNA序列并进行结构分析。方法以树鼩肝脏mRNA逆转录出的Ⅰ链cDNA为模板,运用SMARTRACEPCR扩增技术,扩增得到树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)cDNA序列,并推导出LCAT氨基酸序列。利用分子生物... 详细信息

目的克隆获得树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶cDNA序列并进行结构分析。方法以树鼩肝脏mRNA逆转录出的Ⅰ链cDNA为模板,运用SMARTRACEPCR扩增技术,扩增得到树鼩卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)cDNA序列,并推导出LCAT氨基酸序列。利用分子生物学软件DNAMAN对氨基酸序列的一、二级结构及主要结构域进行分析和比较。结果树鼩LCATcDNA序列由1340个核苷酸构成,开放阅读框架1320bp,编码440个氨基酸的LCAT前体(含24个氨基酸构成的信号肽和416个氨基酸组成的成熟蛋白)熏3'非翻译区18bp,终止密码TAA,加尾信号AATAAA和一个25bp的poly(A)尾。树鼩LCATcDNA序列已作为新基因被GenBank接受,登记号AF272861。树鼩与人和狒狒LCATcDNA的同源性分别为90%和89%。结论树鼩LCATcDNA序列与人及其他实验动物高度同源。

关键词：树Qu 卵磷脂酰基转移酶 cDNA

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重组表达人载脂蛋白(a)羧基末端kringle结构域抑制新生血管

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 655-660页

作者：申乐陈保生薛红中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院麻醉科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100730

目的利用毕赤酵母重组表达人载脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末端kringle结构域,明确其抑制新生血管和肿瘤细胞增殖的能力。方法分别构建重组表达Apo(a)羧基末端kringleⅤ结构域(RHAKA)与kringleⅣ10型-krin-gleⅤ结构域(RHAKB)的pPICZαA质粒... 详细信息

目的利用毕赤酵母重组表达人载脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末端kringle结构域,明确其抑制新生血管和肿瘤细胞增殖的能力。方法分别构建重组表达Apo(a)羧基末端kringleⅤ结构域(RHAKA)与kringleⅣ10型-krin-gleⅤ结构域(RHAKB)的pPICZαA质粒;转染毕赤酵母X-33分泌表达RHAKA与RHAKB,RHAKs利用***亲和层析纯化,以及反相高效液相色谱与氨基酸残基测序鉴定;明确RHAKs的糖基化及二硫键形成情况后,利用细胞增殖实验与鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测RHAKs对新生血管和肿瘤细胞增殖的影响。结果毕赤酵母可以大量表达RHAKs,并对RHAKs进行翻译后修饰;RHAKA与RHAKB可以抑制血管内皮细胞的增殖和CAM的新生血管,但对肿瘤细胞增殖无直接的抑制作用。结论利用毕赤酵母高效重组表达人Apo(a)羧基末端kringle结构域可以显著抑制新生血管。

关键词：载脂蛋白 kringle结构域毕赤酵母新生血管

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孟德尔遗传糖尿病研究进展

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中国医学科学院学报 2005年第3期27卷 382-387页

作者：杨燕丽孟雁方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

糖尿病是由多种遗传和环境因素相互作用而引起的一组慢性代谢异常综合征。一些特殊类型的糖尿病,如:青年发病的成年型糖尿病、矮妖精貌综合征、脂肪萎缩性糖尿病和Rabson-Mendenhall综合征为单基因致病并符合孟德尔遗传。本文对孟德尔... 详细信息

糖尿病是由多种遗传和环境因素相互作用而引起的一组慢性代谢异常综合征。一些特殊类型的糖尿病,如:青年发病的成年型糖尿病、矮妖精貌综合征、脂肪萎缩性糖尿病和Rabson-Mendenhall综合征为单基因致病并符合孟德尔遗传。本文对孟德尔遗传糖尿病的研究进展加以综述。

关键词：盂德尔遗传青年发病的成年型糖尿病矮妖精貌综合征脂肪萎缩性糖尿病 Rabson-Mendenhall综合征

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遗传性乳光牙本质家系致病基因突变的鉴定

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中华医学遗传学杂志 2016年第1期33卷 34-37页

作者：刘彦山黄颖之高劲松李闪赵秀丽张学中国医学科学院基础医学研究所一北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院妇产科

目的对一个遗传性乳光牙本质（dentinogenesis imperfecta shieldstype Ⅱ ，DGI-Ⅱ）家系进行DSPP基因的突变分析。方法采集家系成员外周血或胎儿绒毛组织，用酚氯仿法提取基因组DNA。应用聚合酶链反应（polymerasechain reaction，PCR... 详细信息

目的对一个遗传性乳光牙本质（dentinogenesis imperfecta shieldstype Ⅱ ，DGI-Ⅱ）家系进行DSPP基因的突变分析。方法采集家系成员外周血或胎儿绒毛组织，用酚氯仿法提取基因组DNA。应用聚合酶链反应（polymerasechain reaction，PCR）-Sanger测序方法鉴定先证者DSPP基因第2～5外显子及外显子／内含子衔接区序列，并进行突变分析；针对突变位点设计错配引物引入AluI酶切位点，通过限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳方法在该家系正常人及60名无关正常个体中进行致病突变验证；构建含微型DSPP基因的pcDNA3．1基因表达载体，在体外培养细胞中验证突变致病性。结果该家系3例患者和一名胎儿均携带DSPP基因内C．52—1G〉A的杂合突变，突变造成该基因第3外显子5’端剪接点变异；60名对照者和家系正常个体均未携带该突变；微小基因（Minigene）体外表达显示e．52—1G〉A导致DSPP基因转录产物第3外显子的跳跃剪接。结论本研究在一个DGI-Ⅱ家系中发现了DSPP基因内一个新的致病剪接突变（c．52—1G〉A），并在此基础上为先证者提供了产前基因诊断。

关键词：乳光牙 DSPP基因剪接点突变微小基因

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人apoE_7基因在NIH/3T3细胞中瞬时及稳定表达

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中国医学科学院学报 1998年第2期20卷 138-143页

作者：孙明增琦祖和潘燕中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的为了探索人apoE_7基因受控于异源启动子MT-I时,能否在鼠类细胞中表达。方法自10.3 kb人apoE_7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE_7基因组DNA片段(60 kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(MT-I)重组,构建pME_7真核表达质粒,用Lipofectamin... 详细信息

目的为了探索人apoE_7基因受控于异源启动子MT-I时,能否在鼠类细胞中表达。方法自10.3 kb人apoE_7基因组DNA获得不带自身启动子的人apoE_7基因组DNA片段(60 kb),与小鼠金属硫蛋白启动子(MT-I)重组,构建pME_7真核表达质粒,用Lipofectamine转染NIH/3T3细胞。结果瞬时表达结果表明,重组pME_7质粒能够在NIH/3T3细胞中表达。稳定表达的结果则表明,人apoE_7基因的表达水平与其整合到宿主细胞基因组的拷贝数密切相关。ELISA测定结果显示,人apoE_7基因在NIH/3T3细胞中可以进行正确的转录剪切和翻译加工,合成有生物活性的人apoE_7蛋白;研究结果还表明:重金属可以诱导增强人apoE_7基因的高效表达,诱导后表达水平提高45%～60%。结论人apoE_7基因的表达不仅局限于人类的组织细胞,也可以在鼠类组织细胞中表达;而且MT-I启动子能够诱导表达人apoE_7基因,为人apoE_7转基因小鼠模型的建立奠定了基础。

关键词：真核表达质粒 apoE7基因 MT-I启动子 NIH/3T3

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腺病毒介导人FL与GM-CSF联合抗肿瘤免疫基因治疗实验研究

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中国免疫学杂志 2006年第7期22卷 623-628页

作者：张艳丽魏义举王亚栋邓艳春苏林刘长征杨克恭陈松森中国医学科学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院北京100005

目的:研究腺病毒介导人F lt3 ligand(hFL)与GM-CSF在体内外的表达、体外生物学活性,体内扩增小鼠脾脏DCs及抑制小鼠EL-4淋巴瘤的效应。方法:应用AdEasy系统,将hFL和hGM-CSF DNA重组到穿梭质粒的两个独立转录单位上,得到重组腺病毒Ad-hFL... 详细信息

目的:研究腺病毒介导人F lt3 ligand(hFL)与GM-CSF在体内外的表达、体外生物学活性,体内扩增小鼠脾脏DCs及抑制小鼠EL-4淋巴瘤的效应。方法:应用AdEasy系统,将hFL和hGM-CSF DNA重组到穿梭质粒的两个独立转录单位上,得到重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF。采用ELISA、W estern b lot法测定重组腺病毒介导的hFL和hGM-CSF在体内外的表达情况。MTT法测定hFL和hGM-CSF刺激细胞增殖的生物学活性。利用流式细胞分析技术研究重组腺病毒对小鼠脾脏树突状细胞(DCs)的扩增情况。在移植EL-4淋巴瘤的小鼠皮下注射4次重组腺病毒(每次5×109pfu),研究其抑制肿瘤生长的功能。结果:构建得到含有双基因的重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF,并在体内、外高效共表达hFL和hGM-CSF。hFL对小鼠骨髓有核细胞,hGM-CSF对TF1细胞,均有明显的刺激增殖作用。Ad-hFL-hGM-CSF显著扩增小鼠脾脏DCs至正常值的50倍。抑瘤实验中,Ad-hFL-hGM-CSF使小鼠EL-4淋巴瘤生长延慢,瘤体比对照组明显减小,抑瘤率为30%,P<0.05。病理切片显示,Ad-hFL-hGM-CSF治疗组肿瘤细胞间隙有大量淋巴细胞浸润。结论:腺病毒介导hFL和hGM-CSF在小鼠体内显著扩增脾脏DCs,并可抑制EL-4淋巴瘤的生长。

关键词： hFL 树突状细胞(DC) 腺病毒免疫基因治疗

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