检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 158-162页

作者：李永海苏华何维崔莲仙越智宏伦中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室国家医学分子生物学重点实验室北京100005 日本老化制御研究所

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从... 详细信息

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。

关键词： DDRT-PCR 小鼠胸腺基因差异表达克隆

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TCR/CD3介导T细胞活化的信号途径

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中国免疫学杂志 2006年第10期22卷 970-975页

作者：陈采凤刘彦信郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

T淋巴细胞经特异抗原刺激后,由于TCR/CD3的介导作用,使细胞骨架蛋白及核内转录因子活化,并引起细胞形态改变、生长因子分泌、细胞黏附性改变等免疫应答,使细胞发生活化或激活诱导的细胞死亡(Activation-induced cell death,AICD)。T细... 详细信息

T淋巴细胞经特异抗原刺激后,由于TCR/CD3的介导作用,使细胞骨架蛋白及核内转录因子活化,并引起细胞形态改变、生长因子分泌、细胞黏附性改变等免疫应答,使细胞发生活化或激活诱导的细胞死亡(Activation-induced cell death,AICD)。T细胞活化需要两种信号,一种是TCR/CD3与抗原提呈细胞(Antigen presenting cells,APCs)表面特异的MHC-抗原肽复合物结合产生的特异性抗原刺激信号;另一种是非特异性抗原刺激信号,如:CD2、CD28、CD80、LFA-1(Lymphocyte function associated antigen-1)和ICAM(Intercellular adhesion moleculel)等与各自相应配体结合而产生的协同刺激信号。如果只有TCR/CD3复合物存在,没有协同刺激信号参与,则不能有效地激活T细胞,而可能导致T细胞产生不应性(Anergy),甚至细胞凋亡(Apoptosis)。T细胞特异性抗原或TCR/CD3的特异性抗体可引起T细胞跨膜受体以及膜附近的其它信号分子的活化或抑制,调节T细胞的增殖、分化或凋亡,这个过程涉及一系列下游信号传导和基因表达调控。近几年对TCR/CD3近膜区的信号复合体的形成、相关信号分子的磷酸化、细胞骨架重组、NF-κB活化、以及与多个信号通路密切相关的蛋白分子,如PI-3K和PKCθ等,在信号通路中的作用有了更深刻的了解,本文就这方面的进展作一简要综述。

关键词： TCR/CD3复合物 T细胞活化信号途径介导作用 MHC-抗原肽复合物协同刺激信号激活诱导的细胞死亡特异性抗原

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谷胱甘肽巯基转移酶pi参与肿瘤细胞耐药性的产生

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 402-406页

作者：曹威左瑾方福德中日友好医院临床医学研究所北京100029 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ... 详细信息

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ和ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ；采用细胞原位杂交法，以地高辛标记的ＧＳＴ－ｐｉ　ｃＤＮＡ为探针，检测两细胞株ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的表达水平；用ＭＴＴ法检测不同抗癌药物对细胞株的毒性作用。结果ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ表达明显升高，而ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ和ＨｅＬａ细胞的表达水平很低。阿霉素、丝裂霉素Ｃ和顺铂对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＩＣ５０分别为７０．１３、１０．９５和１６．５２ｕｇ／ｍｌ，对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ的ＩＣ５０分别为１０．３４、７．４８和１３．７０ｕｇ／ｍｌ，长春新碱对两细胞株的毒性无明显差别。结论ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ细胞具有较高的耐药性。ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的大量表达可能是产生多药耐药的原因，此细胞株可作为一个稳定的遗传学系统在ＧＳＴ－ｐｉ与肿瘤细胞耐药的研究中广泛应用。

关键词： GST-pi 肿瘤耐药性

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MicroRNA-29抑制胰岛素刺激的大鼠L6细胞葡萄糖吸收

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基础医学与临床 2013年第5期33卷 562-566页

作者：刘长征李静静焦涛何小东常永生中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医院基本外科北京100730

目的研究microRNA-29(miR-29)在糖尿病模型大鼠(GK)骨骼肌组织中的表达,并探讨其对大鼠骨骼肌细胞L6葡萄糖吸收的影响。方法利用real-time PCR方法检测miR-29家族,miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中的表达特征。L6骨骼肌... 详细信息

目的研究microRNA-29(miR-29)在糖尿病模型大鼠(GK)骨骼肌组织中的表达,并探讨其对大鼠骨骼肌细胞L6葡萄糖吸收的影响。方法利用real-time PCR方法检测miR-29家族,miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中的表达特征。L6骨骼肌细胞诱导分化为肌管细胞,经葡萄糖与胰岛素处理后,利用real-time PCR与Northern blot分析miR-29家族的表达情况。选择腺病毒表达系统在L6分化的肌管细胞中过表达或抑制内源miR-29的功能,利用葡萄糖吸收实验检测胰岛素刺激的葡萄糖吸收情况。结果 miR-29a、miR-29b及miR-29c在GK大鼠骨骼肌组织中表达上调。L6分化的肌管细胞经葡萄糖与胰岛素处理,miR-29b和miR-29c的表达上调,而miR-29a表达无明显变化。在L6分化的肌管细胞中过表达miR-29可以明显抑制胰岛素刺激的葡萄糖吸收。结论miR-29参与了GK大鼠骨骼肌细胞葡萄糖耐受及胰岛素抵抗的产生,抑制其表达可能是治疗Ⅱ型糖尿病的一种新策略。

关键词： microRNA-29 Ⅱ型糖尿病葡萄糖耐受胰岛素抵抗

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人血管生成素-1的天然反义RNA,Gna-1的克隆及鉴定

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中国科学（C辑） 2001年第2期31卷 125-130页

作者：张可满陈保生吴刚薛红曾武威张坚白玲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

用差异显示－ＰＣＲ方法，从血管内皮细胞中获得一新的ｃＤＮＡ片段，以该片段为探针，从人主动脉ｃＤＮＡ文库中筛选到一个长２１９８ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆，经ＤＮＡ测序及同源性分析，发现该序列中含有与血管生成素－１ＦＤ编码区及３... 详细信息

用差异显示－ＰＣＲ方法，从血管内皮细胞中获得一新的ｃＤＮＡ片段，以该片段为探针，从人主动脉ｃＤＮＡ文库中筛选到一个长２１９８ｂｐ的ＣＤＮＡ克隆，经ＤＮＡ测序及同源性分析，发现该序列中含有与血管生成素－１ＦＤ编码区及３’端部分非翻译区完全互补的碱基，推测该克隆为体内血管生成素－１的天然反义ＲＮＡ，命名为Ｇｎａ－１，它不编码蛋白质．ＲＴ－ＰＣＲ方法证实，Ｇｎａ－１在人脐静脉内皮细胞及ＥＣＶ３０４中有转录，推测Ｇｎａ－１可能具有调控血管生成素－１的作用，参与血管再造过程．

关键词：差异显示-PCR 血管生成素-1 反义RNA cDNA文库 Gna-1 克隆内皮细胞鉴定

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热休克基因mRNA定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

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科学通报 1999年第18期44卷 1928-1933页

作者：王艳林沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用... 详细信息

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用DNA重组技术及体外转录体系制备了一种能用作测定hsp70 ,hsp90α及hsp90 βmRNA的复合内参照RNA ;然后 ,通过对反应条件的优化、选择 ,建立了一种特异检测 3种主要的人HSP基因mRNA水平的定量RT PCR体系 .应用此体系测定了hsp70 ,hsp90α及hsp90 β在Jurkat细胞中的组成性及热诱导表达规律 .

关键词：热休克基因 mRNA 定量RT-PCR检测热休克白质

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ApoB基因多态性与北京房山地区汉族人群脑卒中相关性分析

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基础医学与临床 2010年第7期30卷 683-688页

作者：陈廓肖占森窦会东侯淑琴刘岳峰陶晓明李峰邱长春中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京房山区第一医院检验科北京102400

目的探讨ApoB基因多态性与北京房山地区汉族人群脑卒中的关系。方法采取横断面病例-对照相关分析方法。用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及直接测序技术检测ApoB基因第26外显子C7673T位点和第1外显子5′端信号肽区9 bp... 详细信息

目的探讨ApoB基因多态性与北京房山地区汉族人群脑卒中的关系。方法采取横断面病例-对照相关分析方法。用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及直接测序技术检测ApoB基因第26外显子C7673T位点和第1外显子5′端信号肽区9 bp插入/缺失的基因型。汉族脑卒中患者547例(脑栓塞446例,脑出血81例);正常对照者886例。结果 ApoB基因C7673T位点和5′端信号肽区插入/缺失位点基因型均符合Hardy-Weinberg平衡定律,P值分别为0.6293和0.5359。ApoB基因C7673T位点的CC基因型和C等位基因频率在女性中栓塞组较对照组明显降低(P<0.01),而与男性脑卒中无关。5′端信号肽区插入/缺失位点,Ⅱ基因型频率在男性中脑出血组较对照组明显降低(P<0.01)。Ⅱ基因型和Ⅰ等位基因频率在男性中栓塞组较对照组明显降低(P<0.01);Ⅱ基因型和Ⅰ等位基因频率在女性中也有同样的趋势(P<0.01,P<0.05)。结论 ApoB基因C7673T位点多态性与房山地区汉族人群女性脑卒中相关,5′端信号肽区9 bp插入/缺失多态性与房山地区汉族人群中脑卒中易感相关。

关键词： ApoB基因脑卒中脑出血脑栓塞多态性

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串联亲和纯化技术:一种极具潜力的分离、鉴定蛋白复合体的工具

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基础医学与临床 2006年第3期26卷 246-251页

作者：狄文娜花芳彭小忠中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

大多数细胞的生物学功能都是由蛋白复合体而非单一蛋白来完成的,所以识别和分析蛋白复合体的组分是研究蛋白功能所必需的。串联亲和纯化技术(TAP)能在生理条件下有效地分离、鉴定蛋白复合体,而无需知道复合体的组成或功能,目前已成功地... 详细信息

大多数细胞的生物学功能都是由蛋白复合体而非单一蛋白来完成的,所以识别和分析蛋白复合体的组分是研究蛋白功能所必需的。串联亲和纯化技术(TAP)能在生理条件下有效地分离、鉴定蛋白复合体,而无需知道复合体的组成或功能,目前已成功地应用于酵母及其他生物体中的蛋白复合体的成分分析。与质谱技术联合应用可以识别与目的蛋白相互作用的蛋白,进而揭示蛋白质相互作用网络及其功能。

关键词：串联亲和纯化(TAP) 蛋白复合体

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人泛素结合酶cDNA的分离与克隆

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 306-311页

作者：吕鸿雁李光涛周严金鉴蒋科艺彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　分离、克隆人泛素结合酶基因 ,并初步研究其组织表达谱。方法　根据与鼠泛素结合酶有较高一致性的人表达序列标签 (EST)设计筛库引物 ,筛选人胎脑 c DNA文库 ,采用生物信息学方法分析筛选到的阳性克隆 ;设计探针 ,应用人多组织杂... 详细信息

目的　分离、克隆人泛素结合酶基因 ,并初步研究其组织表达谱。方法　根据与鼠泛素结合酶有较高一致性的人表达序列标签 (EST)设计筛库引物 ,筛选人胎脑 c DNA文库 ,采用生物信息学方法分析筛选到的阳性克隆 ;设计探针 ,应用人多组织杂交膜分析该基因的组织表达谱。结果　从文库中筛选到两个互为剪接异构体的长度分别为 1471和 1315 bp的 c DNA克隆 ,其开放读码框分别编码 147和 10 9个氨基酸 ,与鼠、果蝇、线虫等生物的泛素结合酶均高度同源 ,含泛素结合结构域 ,Gen Bank登录号分别为 AF12 5 0 44和 AF12 5 0 45。Northern杂交显示 ,该基因在成人心脏、胎盘、胰腺等组织中呈特异表达 ,而在脑、肝、肺、肾和骨胳肌中基本不表达。结论　泛素结合酶基因在人体中的表达受到时间和空间的双重调控。

关键词：泛素泛素结合酶 cDNA 分离克隆

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NSPc1相互作用蛋白的筛查及其与组蛋白乙酰化酶HBO1相互作用的验证

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基础医学与临床 2008年第6期28卷 529-534页

作者：龚燕华石磊吴旭东强伯勤彭小忠袁建刚中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1... 详细信息

目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1蛋白的全长、N端和C端作为诱饵筛查人3月胎脑cDNA文库,发现N端诱饵可以与组蛋白乙酰化转移酶HBO1相互作用,该相互作用在体内外实验中都得到了验证。结论组蛋白乙酰化酶HBO1是NSPc1的相互作用蛋白之一,该相互作用可能参与NSPc1对靶基因转录的表观抑制活性的发挥。

关键词：多梳家族神经系统多梳蛋白1 酵母双杂交蛋白质相互作用组蛋白乙酰化酶

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