检索结果-内蒙古大学图书馆

齐齐哈尔医学院学报 2012年第16期33卷 2141-2143页

作者：李竹石史可鉴杨洋许彩民中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国生物技术集团公司成都生物制品研究所有限责任公司

目的构建细胞色素c氧化酶亚基IV(COXIV)的表达载体并在NB4细胞进行过表达。方法 RT-PCR扩增COXIV编码序列并克隆到pcDNA6/His A质粒中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序;将鉴定正确的pcDNA6-COXIV表达载体转染到NB4细胞中,Western blot鉴定... 详细信息

目的构建细胞色素c氧化酶亚基IV(COXIV)的表达载体并在NB4细胞进行过表达。方法 RT-PCR扩增COXIV编码序列并克隆到pcDNA6/His A质粒中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序;将鉴定正确的pcDNA6-COXIV表达载体转染到NB4细胞中,Western blot鉴定COXIV蛋白在NB4细胞中的过表达。结果所构建的pcDNA6-COXIV表达载体转染NB4细胞后,COXIV蛋白表达水平显著高于对照细胞。结论 COXIV表达载体构建成功,可介导COXIV蛋白在NB4细胞中的过表达,为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：细胞色素c氧化酶凋亡活性氧

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在超负荷诱导的心脏疾病中心肌细胞自噬

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国际心血管病杂志 2012年第2期39卷 77-78,82页

作者：张岩刘伟孙寒松胡盛寿中国医学科学院阜外心血管病医院心血管外科卫生部心血管疾病再生医学重点实验室北京100037 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100037

由各种原因引起的心室压力超负荷是导致心力衰竭的始动因素,如高血压或心肌梗死后,导致心肌能量代谢和心肌纤维蛋白组成的改变,进而心室扩张、泵功能降低最终发生心力衰竭。研究表明,在某些病理状态下,自噬活动在心肌病中被激活。超负... 详细信息

由各种原因引起的心室压力超负荷是导致心力衰竭的始动因素,如高血压或心肌梗死后,导致心肌能量代谢和心肌纤维蛋白组成的改变,进而心室扩张、泵功能降低最终发生心力衰竭。研究表明,在某些病理状态下,自噬活动在心肌病中被激活。超负荷的压力使细胞自噬活动增加,会使疾病进一步恶化。随着对自噬分子机制的深入研究,自噬活动对于心室重塑及其在心脏疾病中的潜在作用逐渐被认识。

关键词：自噬压力超负荷心肌肥厚心力衰竭

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长期温和的能量限制改善C57BL/6小鼠高脂喂养后的脂代谢紊乱

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中国心血管杂志 2012年第2期17卷 124-127页

作者：李国平唐蔚青李红霞满永黎健陈保生卫生部北京医院卫生部北京老年医学研究所卫生部老年医学重点实验室 100730 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨温和的能量限制对小鼠脂代谢的影响。方法给予3周龄C57BL/6小鼠高脂饮食12周后,按随机数字表法分组,对照组不限制饮食,实验组小鼠喂食对照组小鼠摄食量的85%,喂养12周后,收集小鼠血浆并冻存肝脏。抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质... 详细信息

目的探讨温和的能量限制对小鼠脂代谢的影响。方法给予3周龄C57BL/6小鼠高脂饮食12周后,按随机数字表法分组,对照组不限制饮食,实验组小鼠喂食对照组小鼠摄食量的85%,喂养12周后,收集小鼠血浆并冻存肝脏。抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量,油红O染色观察肝脏的脂质沉积;用实时定量聚合酶链反应法检测肝脏脂肪代谢相关基因的表达;并测定LDL、TG分泌速率和小鼠原代肝细胞脂肪酸氧化速率。结果实验组小鼠与对照组小鼠相比,在限食12周后:(1)体质量:(32.8±1.3)g比(38.9±3.5)g(P=0.007);(2)血浆TG水平:(0.26±0.01)mmol/L比(0.41±0.02)mmol/L(P=0.02),肝脏内TG含量:(435.7±26.3)μg/mg蛋白质比(812.4±38.2)μg/mg蛋白质(P=0.001);(3)实时定量聚合酶链反应结果显示,肝脏内长链脂肪酸和胆固醇合成相关基因mRNA表达水平无变化,但脂肪酸氧化基因mRNA表达水平显著增加(P=0.03)。肝脏原代细胞内脂肪酸的氧化速度增加了53.1%±7.2%(P=0.01),血浆游离脂肪酸水平:(0.41±0.04)mmol/L比(0.62±0.02)mmol/L(P=0.04);(4)肝脏中胆固醇:(85.2±9.8)μg/mg蛋白质比(169.3±13.5)μg/mg蛋白质(P=0.001),但血浆TC水平无显著改变。结论长期温和的能量限制可以有效缓解高脂饮食引起的小鼠肝脏的脂肪变性,这与肝脏中游离脂肪酸的氧化速度升高及摄取量降低密切相关;同时降低了小鼠血浆TG的水平,但没有改变血浆TC水平。

关键词：能量限制脂代谢脂肪酸氧化速率

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甲型H1N1流感病毒感染可导致白介素-17显著上升

甲型H1N1流感病毒感染可导致白介素-17显著上升

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第九届中青年呼吸学者论坛

作者：邹镇郭峰李太生王辰王仲曹斌蒋澄宇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院感染科首都医科大学北京朝阳医院北京市呼吸病研究所中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院急诊科

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树鼩载脂蛋白AV系列突变体的细胞内定位分析

树鼩载脂蛋白AV系列突变体的细胞内定位分析

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第11届全国脂质与脂蛋白学术会议

作者：李国平王艳满永王抒黎健陈保生卫生部北京医院、卫生部北京老年医学研究所、卫生部老年医学重点实验室中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院、医学分子生物学国家重点实验室

目的研究不易感动脉粥样硬化动物-树鼩载脂蛋白AV基因不同结构域对细胞内定位的影响。方法前期我们实验室利用快速扩增cDNA末端技术成功获得了该基因的cDNA全长,该基因有两个转录本,分别为1948 bp和1937 bp,在GenBank中的注册号分别为HQ... 详细信息

目的研究不易感动脉粥样硬化动物-树鼩载脂蛋白AV基因不同结构域对细胞内定位的影响。方法前期我们实验室利用快速扩增cDNA末端技术成功获得了该基因的cDNA全长,该基因有两个转录本,分别为1948 bp和1937 bp,在GenBank中的注册号分别为HQ913636.1和HQ913637.1。我们对该基因cDNA全长在人、小鼠、大鼠中做了比较,并对其推演的编码氨基酸序列进行了蛋白质的一级和二级结构分析;据此,利用常规的内切酶技术和PCR定点突变技术,构建一系列

关键词：细胞内定位细胞质内突变体

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线粒体转录复合物相关蛋白原核表达与纯化

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 638-643页

作者：刘光杨瑞锋石秉炀刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。方法设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDN... 详细信息

目的获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。方法设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDNA片段,通过引入的酶切位点克隆至表达载体pET42a,构建重组表达载体,并导入***21宿主菌中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组的GST融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化表达产物,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果获得pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M表达质粒,测序结果与GenBank的基因序列一致。SDS-PAGE分析结果显示,重组GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白分别在相对分子质量56 000、67 000、69 000处出现特异性蛋白条带,经GST亲和层析纯化后,得到高纯度的融合蛋白。结论成功构建了基因重组体pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,制备了GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。

关键词：线粒体转录因子A 线粒体转录因子B1 线粒体转录因子B2 融合蛋白纯化

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DNA转座子在小鼠基因功能研究中的应用

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遗传 2011年第5期33卷 485-493页

作者：刘琳张美丽黄粤中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

近年来,转座子介导的插入突变在哺乳动物的分子遗传学研究中得到了广泛的应用。转座子作为一种简便高效的遗传学操作工具,在构建转基因动物模型、基因治疗、细胞水平和动物整体水平的基因功能研究等方面发挥了重要的作用。文章重点介绍... 详细信息

近年来,转座子介导的插入突变在哺乳动物的分子遗传学研究中得到了广泛的应用。转座子作为一种简便高效的遗传学操作工具,在构建转基因动物模型、基因治疗、细胞水平和动物整体水平的基因功能研究等方面发挥了重要的作用。文章重点介绍DNA转座子的结构、功能及其应用于小鼠分子遗传学领域的最新研究进展。

关键词：转座子插入突变转基因 Sleeping Beauty piggyBac

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胰岛素样生长因子结合蛋白-3与甲状腺激素受体α1的相互作用及其对甲状腺激素应答性基因转录的调节

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中国医学科学院学报 2011年第2期33卷 156-161,222页

作者：裘佳马晓骊王欣陈虹黄秉仁中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节。方法采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之... 详细信息

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节。方法采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之间的相互作用;激光共聚焦显微镜观察两种蛋白在细胞中的分布;采用双萤光素酶实验检测过表达IGFBP-3对甲状腺素T3激活的生长激素启动子的影响。结果谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验结果证明IGFBP-3与TRα1在体内和体外都可以相互作用,激光共聚焦显微镜观察IGFBP-3和TRα1可以共定位于HEK-293细胞的细胞核。通过双萤光素酶实验检测到过表达IGFBP-3可以抑制甲状腺激素对生长激素启动子的激活作用(P<0.01)。结论 IGFBP-3通过与TRα1相互作用抑制甲状腺激素应答性基因的转录,为IG-FBP-3在核内发挥胰岛素样生长因子非依赖的作用提供了新的实验依据。

关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白-3 甲状腺激素受体α1 三碘甲状腺原氨酸生长激素启动子

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小鼠睾丸曲细精管生精上皮的分离及形态观察

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 629-631,I0011-I0013页

作者：付俊缪时英中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的寻找一种简单可行的研究精子发生过程中蛋白质定位的方法。方法将新鲜的小鼠睾丸去除白膜,通过胶原酶Ⅰ及DNA酶Ⅰ的作用分离各种细胞。细胞经简单处理后以合适的浓度铺片,进行荧光染色,并于共聚焦荧光显微镜下观察。结果通过分析特... 详细信息

目的寻找一种简单可行的研究精子发生过程中蛋白质定位的方法。方法将新鲜的小鼠睾丸去除白膜,通过胶原酶Ⅰ及DNA酶Ⅰ的作用分离各种细胞。细胞经简单处理后以合适的浓度铺片,进行荧光染色,并于共聚焦荧光显微镜下观察。结果通过分析特异的染料对顶体和细胞核染色的结果,可以分辨出各个阶段的生精细胞。结论建立了一种研究精子发生过程中蛋白质定位的简单、可靠的方法。

关键词：精子发生顶体形成细胞核

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蛋白激酶Nemo样激酶基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 632-637,I0014页

作者：程筱雯梁俊波缪时英王琳芳中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建含有蛋白激酶Nemo样激酶(NLK)的重组腺病毒载体。方法采用RT-PCR方法在人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增NLK基因及其突变体K155M、T286V和C425Y,同时在目的基因的C端添加便于蛋白表达检测的FLAG tag,经与载体pAdTrack-CMV连接、... 详细信息

目的构建含有蛋白激酶Nemo样激酶(NLK)的重组腺病毒载体。方法采用RT-PCR方法在人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增NLK基因及其突变体K155M、T286V和C425Y,同时在目的基因的C端添加便于蛋白表达检测的FLAG tag,经与载体pAdTrack-CMV连接、转化、筛选、鉴定后,将Western blot检测表达正确的重组过渡质粒pAdTrack-CMV-NLK及其突变体再经酶切、电转入BJ5183感受态细胞(已包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1)同源重组,并筛选、鉴定、扩增。通过PacI酶切后,以快速简便的乙醇沉淀法替代传统的酚-氯仿-异戊醇法回收酶切产物,用高效低毒高稳定性的FuGENE HD转染试剂替代传统的lipofectamin 2000转染低代数的HEK293A包装细胞,进行病毒包装。包装后的重组腺病毒感染结直肠癌细胞HCT116,Western blot检测以确认NLK及其突变体蛋白的表达。结果经PCR、测序及Western blot检测证实,成功构建了携带NLK基因及其突变体的腺病毒载体,PCR及限制性内切酶酶切鉴定重组过渡质粒pAdTrack-CMV-NLK及其突变体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组成功,重组表达克隆转染HEK293A细胞获得病毒原液,扩增后感染结直肠癌细胞HCT116能正确表达NLK蛋白及其突变体蛋白。结论成功制备NLK基因及其突变体重组腺病毒,可进一步用于NLK生理功能的研究。

关键词：蛋白激酶Nemo样激酶重组腺病毒载体同源重组

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