检索结果-内蒙古大学图书馆

遗传 2006年第4期28卷 403-406页

作者：李俊宁许琪沈岩季梁清华大学生物信息学教育部重点实验室清华大学自动化系北京100084 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

精神分裂症是由多基因相互作用导致的复杂疾病。对其易感基因,儿茶酚氧位甲基转移酶基因(COMT)的众多报道充满了矛盾。在对偏执型精神分裂症研究中,我们用多基因座关联分析法研究了4个涉及神经递质多巴胺代谢的基因之间的相互作用。分... 详细信息

精神分裂症是由多基因相互作用导致的复杂疾病。对其易感基因,儿茶酚氧位甲基转移酶基因(COMT)的众多报道充满了矛盾。在对偏执型精神分裂症研究中,我们用多基因座关联分析法研究了4个涉及神经递质多巴胺代谢的基因之间的相互作用。分析结果支持如下假说:COMT-136-BclⅠ对Val108/158Met有调控作用。当前者的基因型是CC时,后者的易感等位基因型是Met(A);而当前者的基因型是GG时,后者的易感等位基因型是Val(G)。这一新的假说可以解释此前单基因座分析对Val108/158Met(COMT)的截然相反的报道,同时也显示了多基因座分析对复杂疾病研究的必要性。

关键词：偏执型精神分裂症儿茶酚氧位甲基转移酶基因多基因座关联分析

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单染色体靶向富集方法的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第9期32卷 1060-1066页

作者：谢德健张田甜师明磊张彦沈文龙叶丙雨李平何超张香媛赵志虎军事医学科学院生物工程研究所北京100071 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 聊城大学生命科学学院聊城25200

靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍... 详细信息

靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法。具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体。(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库。(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率。荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍。结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立。该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义。

关键词：多重退火环形扩增高通量测序靶向富集单染色体流式分选

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嗜水气单胞菌毒素溶血试验比色法诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症

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中国实验血液学杂志 2002年第6期10卷 577-579页

作者：杨洋许彩民王健陈岚潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院血液科北京100730

本研究建立嗜水气单胞菌 (HEC)毒素溶血试验比色法诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)。方法为取正常人、贫血病人和PNH病人 (各 1 0例 )外周血标本 ,用HEC毒素处理外周血红细胞并于 630nm测定吸光度 ,以定量溶血程度。所测结果与流式... 详细信息

本研究建立嗜水气单胞菌 (HEC)毒素溶血试验比色法诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)。方法为取正常人、贫血病人和PNH病人 (各 1 0例 )外周血标本 ,用HEC毒素处理外周血红细胞并于 630nm测定吸光度 ,以定量溶血程度。所测结果与流式细胞术检测CD59- 细胞进行验证。结果表明 ,PNH病人的红细胞对HEC毒素溶血试验有抗性 ,而正常人和非PNH病人的红细胞几乎全部溶解。结论 :HEC毒素溶血试验比色法对PNH是一种简便、快速。

关键词：嗜水气单胞菌毒素溶血试验比色法诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症

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脊椎动物中枢神经系统发育相关基因的级联调控

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基础医学与临床 1998年第5期18卷 77-80页

作者：金虎林袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

脊椎动物的中枢神经系统是一系列在组成上高度复杂的细胞构成的。它的形成经历了一个极其复杂的发育分化过程。这一过程受到了多种基因的级联调控（ＣａｓｃａｄｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ）。参与这一级联调控网络的基因不仅包括了同源... 详细信息

脊椎动物的中枢神经系统是一系列在组成上高度复杂的细胞构成的。它的形成经历了一个极其复杂的发育分化过程。这一过程受到了多种基因的级联调控（ＣａｓｃａｄｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ）。参与这一级联调控网络的基因不仅包括了同源盒基因等编码转录因子的基因，其它一...

关键词：脊椎动物中枢神经系统发育相关基因级联调控

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AIDS患者γδ T细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4^+ T细胞

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基础医学与临床 2012年第7期32卷 778-782页

作者：李珍焦艳梅崔莲仙吴昊何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学附属北京佑安医院感染科北京100069

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+... 详细信息

目的建立自体人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的CD4+T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者γδT细胞对自体HIV感染的CD4+T细胞的杀伤作用。方法分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞(PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4+T细胞,加入植物血凝素(PHA)和白细胞介素-2(IL-2)共同培养,建立自体HIV感染的CD4+T细胞模型。流式细胞术检测HIV-P24+CD4+T细胞的比例。乳酸脱氢酶(LDH)法测定γδT细胞的细胞毒作用。结果培养到第10天时,HIV-P24+CD4+T细胞的比例达到最高值。AIDS患者的γδT细胞不仅能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞(细胞溶解率为71.1±97),而且对HIV也有一定的杀伤作用(细胞溶解率为24.2±18.2)。而健康志愿者γδT细胞对自体CD4+T细胞没有杀伤作用(细胞溶解率为4.3±10.1)。结论 AIDS患者γδT细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4+T细胞,为采用γδT细胞过继免疫治疗AIDS提供了依据。

关键词： γδT细胞人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征

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cDNA3′端代表差异显示分析

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生物工程进展 1997年第3期17卷 52-55,43页

作者：潘美辉金虎林袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理，可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ，或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用，均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端... 详细信息

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理，可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ，或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用，均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端代表扩增子。比较不同条件下的ｃＤ－ＮＡ３′端代表扩增子，可以获得两种或多种细胞中ｍＲＮＡ的表达差异谱，并分离。

关键词： DNA cDNA3'端代表扩增子差异显示分析

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人PHF8蛋白的原核表达、纯化与结晶

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基础医学与临床 2010年第7期30卷 721-725页

作者：黄硕余琳汪洋刘音陈忠周中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

目的探讨人PHF8蛋白的原核表达、纯化与结晶条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒PHF8/pet28b,测序鉴定正确后将其转入Rosetta 2(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白。对融合蛋白进行分离纯化结晶,衍射分析,并用计算机软件解析其晶体结构。... 详细信息

目的探讨人PHF8蛋白的原核表达、纯化与结晶条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒PHF8/pet28b,测序鉴定正确后将其转入Rosetta 2(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白。对融合蛋白进行分离纯化结晶,衍射分析,并用计算机软件解析其晶体结构。结果经过诱导,含有PHF8/pet28b的Rosetta 2在原核表达系统中表达出了相对分子质量为40 ku的c-PHF8融合蛋白,c-PHF8在合适的悬滴条件下得到六方柱晶体。结论利用原核表达体系成功地表达了人PHF8催化活性中心结构域并获得结晶,为进一步的三维结构解析和PHF8功能研究奠定了基础。

关键词： PHF8 原核表达纯化结晶

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人类基因组计划研究进展

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生物工程进展 1996年第5期16卷 51-54页

作者：袁建刚杜光伟强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

本文简要介绍了人类基因组计划的研究目标、内容、策略和人类基因组计划研究的新进展，如遗传图谱、转录图谱的构建、序列分析、疾病基因的鉴定等。同时还介绍了可能力。快基因组全序列分析的新策略和基因组后研究的几种方法。

关键词：人类基因组计划遗传图谱基因组

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人白细胞介素-15 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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基础医学与临床 1997年第5期17卷 29-32,28页

作者：沈永泉崔莲仙何维赵庆胡愉刘庆丰巴德年中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥ... 详细信息

从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥＧ法回收其片段并将其连接到ｐＢＳＳＫ载体的ＳｍａⅠ位点上进行序列分析，结果表明其序列与文献报道一致。然后再将其片段亚克隆插入到ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＢａｍＨＩ位点。筛选插入方向正确的克隆，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，以１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ收集菌体直接进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，与阴性对照相比，ＭＷ４４ＫＤ处多出一条带，紫外扫描显示此带占菌体蛋白总量的８．８％。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证实此带能够特异地与兔抗人ＩＬ－１５的抗体发生反应。证明ＲＴ－ＰＣＲ所得的人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得了表达，为进一步探讨人ＩＬ－１５的生物学作用打下基础。

关键词：白细胞介素-15 基因克隆基因表达大肠杆菌

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一种从琼脂糠凝胶中分离DNA的快速方法

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基础医学与临床 1997年第2期17卷 154-155页

作者：潘美辉杨文华袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

本文介绍一种冷冻挤压离心法从琼脂糖凝胶中分离ＤＮＡ片段，适合从０．５％～１．８％的凝胶中分离几十到几万ｂｐ的不同ＤＮＡ，ＤＮＡ回收率与凝胶浓度、ＤＮＡ大小有关，介于２５％～８０％。本方法快速、简单、经济、重复性好，值... 详细信息

本文介绍一种冷冻挤压离心法从琼脂糖凝胶中分离ＤＮＡ片段，适合从０．５％～１．８％的凝胶中分离几十到几万ｂｐ的不同ＤＮＡ，ＤＮＡ回收率与凝胶浓度、ＤＮＡ大小有关，介于２５％～８０％。本方法快速、简单、经济、重复性好，值得推广应用。

关键词：琼脂凝胶电泳冷冻挤压离心 DNA分离分离技术

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