检索结果-内蒙古大学图书馆

中国分子心脏病学杂志 2009年第2期9卷 75-78页

作者：温见燕龚燕华王程阴彬潘琳于长安柯元南中日友好医院全国中西医结合心血管病中心北京100029 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京10005 北京大学医学部生理与病理生理学系 100191 中日友好医院临床医学研究所北京100029

目的探讨NADE与MATH-2蛋白之间相互作用及MATH-2对NADE蛋白功能的调控效应。方法用GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)和细胞共定位方法验证NADE与MATH-2蛋白之间的相互作用,用通过流式细胞仪检测蛋白相互作用对凋亡的影响。结果NADE与MRTH... 详细信息

目的探讨NADE与MATH-2蛋白之间相互作用及MATH-2对NADE蛋白功能的调控效应。方法用GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)和细胞共定位方法验证NADE与MATH-2蛋白之间的相互作用,用通过流式细胞仪检测蛋白相互作用对凋亡的影响。结果NADE与MRTH2蛋白存在相互作用,这两个蛋白能共定位于SH-SY5Y细胞的胞浆中。二者之间的相互作用能够降低UV引起的细胞凋亡。结论研究首次证实了NADE与MATH2之间的相互作用,发现该相互作用可能通过干扰NADE对紫外线诱发的细胞凋亡产生影响。

关键词： NADE MATH2 相互作用

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MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达

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中国医学科学院学报 2008年第3期30卷 268-274页

作者：晁腾飞张瑜颜兴起阴彬龚燕华袁建刚强伯勤彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平... 详细信息

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。

关键词： miR-9 CBX7 神经胶质瘤基因表达

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小RNA在心血管相关疾病中的功能研究及应用前景

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中华心血管病杂志 2008年第7期36卷 661-663页

作者：张新波陈保生中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院国家医学分子生物学重点实验室 100005

小RNA（micmRNA，miRNA）是一类长度大约为22nt的非编码单链小RNA，在进化上具有高度的保守性。miRNA通过与靶mRNA3′端非翻译区（3′untrated region，3′-UTR）互补结合，在转录后水平抑制靶基因的表达或直接降解靶mRNA，在生物体的... 详细信息

小RNA（micmRNA，miRNA）是一类长度大约为22nt的非编码单链小RNA，在进化上具有高度的保守性。miRNA通过与靶mRNA3′端非翻译区（3′untrated region，3′-UTR）互补结合，在转录后水平抑制靶基因的表达或直接降解靶mRNA，在生物体的物质代谢、细胞周期调控、细胞分化与凋亡、发育等一系列生命活动中发挥重要作用。迄今为止，大约有5000余种miRNA被发现，其中包括大约500种人类miRNA。

关键词： miRNA 血管相关疾病细胞周期调控非翻译区 mRNA 物质代谢细胞分化生命活动

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Necl1促进原代培养大鼠神经元间神经突触形成

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中国医学科学院学报 2008年第3期30卷 275-279,I0001页

作者：陈涛吴旭东高静郝维阴彬强伯勤袁建刚龚燕华彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生理系北京100005

目的研究神经黏附分子Necl1在神经突触形成过程中的功能。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测在体外神经分化细胞模型(SH-SY5Y,P19)中Necl1表达量的变化;Western blot方法检测原代培养的大鼠海马和皮层神经元在体外培... 详细信息

目的研究神经黏附分子Necl1在神经突触形成过程中的功能。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测在体外神经分化细胞模型(SH-SY5Y,P19)中Necl1表达量的变化;Western blot方法检测原代培养的大鼠海马和皮层神经元在体外培养条件下Necl1的表达量变化和在突触小体中Necl1的表达;细胞免疫荧光法检测神经元和293细胞共培养后293细胞表面突触形成情况,并检测在神经元内过表达Necl1后神经元表面突触密度变化。结果Necl1的表达量可随神经细胞的分化或原代神经元体外培养时间的延长而升高。纯化后的突触小体中存在Necl1的表达。过表达Necl1的293细胞在与原代神经元共培养的情况下可产生突触样结构。直接在原代培养神经元内过表达Necl1可提高神经元间突触密度。结论Necl1可能在中枢神经系统的神经突触形成中发挥功能。

关键词： Necl1 原代神经元突触形成

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人端粒酶逆转录酶单位启动子和存活因子启动子在肿瘤靶向性基因治疗中的作用

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中华医学杂志 2008年第7期88卷 475-479页

作者：张颖马宏刘士廉刘彦信郑德先中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过体内外研究人端粒酶逆转录酶单位（hTERT）启动子和存活因子启动子在实现肿瘤基因治疗靶向性中的作用并探讨其应用前景。方法PCR方法扩增hTERT启动子片段和存活因子启动子片段，并构建包含重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡... 详细信息

目的通过体内外研究人端粒酶逆转录酶单位（hTERT）启动子和存活因子启动子在实现肿瘤基因治疗靶向性中的作用并探讨其应用前景。方法PCR方法扩增hTERT启动子片段和存活因子启动子片段，并构建包含重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（TRAIL）的重组腺相关病毒载体。体外转染四株肝细胞癌细胞株及人原代正常肝细胞（PHH），通过EGFP表达及MTT检测启动子活性。体内建立SMMC-7721皮下移植瘤模型，观察瘤内注射rAAV病毒对肿瘤生长的影响。结果两启动子驱动的外源基因表达具有肿瘤细胞特异性，且它们驱动的TRAIL表达能降低HCC的存活率，而不能降低PHH存活率。以rAAV为载体，hTERT启动子驱动的TRAIL能显著抑制皮下肿瘤生长。结论肿瘤特异启动子是实现以rAAV为载体的肿瘤靶向基因治疗的潜在手段。

关键词：肿瘤启动区(遗传学) 基因治疗

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NECL1对神经胶质瘤细胞系T98G增殖的影响

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中国医学科学院学报 2008年第3期30卷 280-283,I0002页

作者：高静陈涛阴彬龚燕华强伯勤袁建刚彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究神经胶质瘤中表达缺失基因NECL1对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Westernblot方法检测NECL1在1例人正常脑组织和6株人神经胶质瘤细胞系中的表达谱。选取NECL1缺失表达、转染效率相对... 详细信息

目的研究神经胶质瘤中表达缺失基因NECL1对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Westernblot方法检测NECL1在1例人正常脑组织和6株人神经胶质瘤细胞系中的表达谱。选取NECL1缺失表达、转染效率相对较高的T98G细胞作为研究对象,采用细胞生长曲线、流式细胞仪、Hoechst染色等方法观察过表达NECL1对T98G细胞体外增殖能力的影响。结果NECL1在6株人神经胶质瘤细胞系中的表达明显下降或缺失。在T98G细胞中过表达NECL1,细胞生长速度较对照组明显变慢,凋亡细胞数较对照组明显增多。结论NECL1可能通过促进神经胶质瘤细胞系的凋亡而抑制其增殖。

关键词： NECL1 T98G细胞神经胶质瘤增殖凋亡

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脆性X智力低下蛋白的克隆表达与纯化

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基础医学与临床 2008年第7期28卷 692-695页

作者：刘剑邹柯朱宁沈岩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b(+)-FMR1,并将其转入原核表达菌株***21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2+吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与已知的... 详细信息

目的探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b(+)-FMR1,并将其转入原核表达菌株***21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2+吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与已知的RNA片段进行结合反应。结果成功构建了重组表达质粒pET22b(+)-FMR1,在***21(DE)中表达出相对分子质量约79 000的蛋白;该蛋白为FMRP,且可与特定RNA相互作用。结论在原核系统中表达得到了纯度和活性都较为理想的FMRP蛋白,为相关功能性研究奠定了基础。

关键词：脆性X智力低下蛋白(FMRP) pET22b(+) BL21(DE3) RNA结合

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人Polycomb家族成员NSPc1蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备

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基础医学与临床 2008年第11期28卷 1192-1196页

作者：龚燕华王旭吴旭东强伯勤彭小忠袁建刚中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的Polycomb家族成员NSPc1多克隆抗体的制备与检测。方法应用PCR技术扩增人NSPc1编码区全长序列并插入到pET-43.1a(+)载体中,在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白HIS-NSPc1。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和纯化。用所... 详细信息

目的Polycomb家族成员NSPc1多克隆抗体的制备与检测。方法应用PCR技术扩增人NSPc1编码区全长序列并插入到pET-43.1a(+)载体中,在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白HIS-NSPc1。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和纯化。用所获得的纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人NSPc1多克隆抗体。用Western blot检测抗体免疫反应的特异性。结果在大肠杆菌中表达并纯化了人NSPc1重组蛋白,纯度达95%,用其免疫新西兰大白兔,成功制备了相应兔源多克隆抗体,Western blot实验中该抗体可以特异识别内源及外源性NSPc1蛋白。结论原核表达的NSPc1融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应多克隆抗体具有良好的特异性,可以运用于NSPc1基因的功能研究。

关键词：多梳蛋白神经系统多梳蛋白1 蛋白表达纯化多克隆抗体

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Polycomb家族基因Nspc1在斑马鱼早期发育的表达

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中国医学科学院学报 2008年第5期30卷 550-553页

作者：吴旭东张敏龚燕华强伯勤袁建刚孟安明彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 清华大学生物科学与技术系分子发育生物学实验室北京100084

目的探讨Polycomb家族基因Nspc1在模式生物斑马鱼发育早期的表达模式。方法根据GenBank中斑马鱼Nspc1的cDNA序列设计Nspc1原位杂交探针片断,并制备地高辛标记的探针。收取单细胞期、双细胞期、胚芽期及不同时间点的体节期斑马鱼胚胎,用... 详细信息

目的探讨Polycomb家族基因Nspc1在模式生物斑马鱼发育早期的表达模式。方法根据GenBank中斑马鱼Nspc1的cDNA序列设计Nspc1原位杂交探针片断,并制备地高辛标记的探针。收取单细胞期、双细胞期、胚芽期及不同时间点的体节期斑马鱼胚胎,用制备好的探针作原位杂交,显微镜下拍照,获得信号适当的杂交结果。结果在斑马鱼体节期前,Nspc1在全身表达;从体节期开始,其表达逐渐表现出特异性,主要在头部的神经系统中表达。结论Nspc1在模式生物斑马鱼的早期发育、尤其是神经系统发育的过程中可能扮演重要角色。

关键词： Polycomb Nspc1 斑马鱼神经系统发育

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抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达

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中国医学科学院学报 2008年第6期30卷 690-695页

作者：陈凤郭雅彬刘士廉郑德先刘彦信中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所北京肿瘤分子生物学实验室北京100142

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳... 详细信息

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。

关键词：抗死亡受体5嵌合抗体中国仓鼠卵巢细胞人IgG轻链人IgG重链

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