检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：邓敏捷彭瀚张俊武中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

大量研究已证明锌指蛋白在细胞分化和发育过程中扮演着重要角色。先前我们课题组从人骨髓 cDNA 文库中筛选到一个新的锌指蛋白基因 HZF1,并已证明其在红系和巨核系分化中具有重要作用(Leukemia,20:1109-1116,2006)。为了鉴定 HZF1

关键词：锌指蛋白 HZF1 萤光素酶转录激活

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载脂蛋白A-Ⅰ不同部位半胱氨酸突变对受体结合能力的影响

载脂蛋白A-Ⅰ不同部位半胱氨酸突变对受体结合能力的影响

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第四届全国血脂分析与临床学术研讨会暨第九届全国脂蛋白学术会议

作者：张新波陈保生中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院国家医学分子生物学重点实验室

目的探讨载脂蛋白 A-I(apoA-I)不同部位半胱氨酸突变对其受体结合能力的影响, 选择合适的载脂蛋白 AI 半胱氨酸突变体作为药物载体。方法根据 apoA-I 的结构特点以及天然半胱氨酸突变体 apoA-IBMilanoB(A-IBMB)、apoA-IBParisB 发生突... 详细信息

目的探讨载脂蛋白 A-I(apoA-I)不同部位半胱氨酸突变对其受体结合能力的影响, 选择合适的载脂蛋白 AI 半胱氨酸突变体作为药物载体。方法根据 apoA-I 的结构特点以及天然半胱氨酸突变体 apoA-IBMilanoB(A-IBMB)、apoA-IBParisB 发生突变的特殊位置,本课题组自行设计并构建了7个 apoA-I 的半胱氨酸突变体:A-I(S52C)、A-I(N74C)、A-I(K107C)、A-I (G129C)、A-IM(R173C)、A-I(K195C)及 A-I(S228C)。FITC 标记野生型载脂蛋白 AI 及其半胱氨酸突变体,并检测标记蛋白的标记率。流式细胞仪(FACS)检测野生型载脂蛋白 AI 及其半胱氨酸突变体与 HepG2细胞的结合能力。结果野生型载脂蛋白 AI 及其半胱氨酸突变体蛋白的标记率均≥98%。与野生型 apoA-I 相比,载脂蛋白 A-IBBMB 的受体结合力显著升高,A-I(S52C)、A-I (K107C)及 A-I(G129C)突变蛋白的受体结合能力显著降低,A-I(N74C)、A-I(K195C)及 A -I(S228C)蛋白的受体结合能力与野生型 apoA-I 基本相同。结论载脂蛋白 AI 不同部位半胱氨酸突变对受体结合能力具有不同的影响,A-IM(R173C)可能更适合于作为药物载体。

关键词：受体结合不同部位半胱氨酸

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睾丸表达新基因HSD-28的克隆及其编码蛋白质的研究

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医学研究杂志 2008年第12期37卷 28-31,F0003页

作者：张宁王勇陈迎春吴宁缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室/北京协和医学院(清华大学医学部)基础学院北京100005

目的研究从人初级精母细胞特异EST文库中克隆的新基因HSD-28及编码蛋白质在精子发生过程中的表达及可能发挥的功能。方法利用根据本实验室构建的人初级精母细胞特异EST文库,通过电子克隆方法,从网络数据库资源获取基因HSD-28。纯化原核... 详细信息

目的研究从人初级精母细胞特异EST文库中克隆的新基因HSD-28及编码蛋白质在精子发生过程中的表达及可能发挥的功能。方法利用根据本实验室构建的人初级精母细胞特异EST文库,通过电子克隆方法,从网络数据库资源获取基因HSD-28。纯化原核表达系统表达的HSD-28蛋白,以此免疫新西兰白兔制备针对HSD-28的特异性多克隆抗体。采用免疫组化的方法研究HSD-28在人睾丸组织中的表达定位。最后,利用酵母双杂交系统筛选与HSD-28相互作用的蛋白质。结果克隆得到了的HSD-28基因,提交GenBank获得登陆号为AY251533,全长为641个碱基,其中开放阅读框为504碱基,编码一个由168个氨基酸构成的蛋白质,命名为HSD-28蛋白。将构建的pET-30a-HSD-28重组质粒转化到BL21(DE3)宿主菌,表达并纯化了HSD-28蛋白,大小约为28kDa。免疫组织化学结果显示,HSD-28蛋白特异的定位于人精原细胞和早期初级精母细胞。筛选得到与HSD-28相互作用的两个阳性克隆45#和106#。结论从人睾丸cDNA文库中成功克隆得到HSD-28基因,其编码蛋白质表达定位于人精原细胞和初级精母细胞中,可能参与精子发生过程中减数分裂的调节。

关键词： HSD-28 精原细胞初级精母细胞减数分裂

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人工耳蜗植入者线粒体12SrRNA基因突变的分析

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中国医药生物技术 2008年第3期3卷 169-172页

作者：陈东野陈晓巍田永胜左瑾曹克利方福德中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院耳鼻喉科 100730 基础医学研究所/医学分子生物学国家重点实验室

目的研究接受人工耳蜗植入的耳聋患者中,线粒体12SrRNA基因突变的类型和发生概率。方法选取100例接受人工耳蜗植入的非综合征性耳聋患者(语前聋96例,语后聋4例;氨基糖苷类药物使用史者16例),取外周血提取基因组DNA,以PCR方法扩增线粒体1... 详细信息

目的研究接受人工耳蜗植入的耳聋患者中,线粒体12SrRNA基因突变的类型和发生概率。方法选取100例接受人工耳蜗植入的非综合征性耳聋患者(语前聋96例,语后聋4例;氨基糖苷类药物使用史者16例),取外周血提取基因组DNA,以PCR方法扩增线粒体12SrRNA基因,扩增产物纯化后直接测序分析突变。结果100例患者中有2例检测到线粒体12SrRNA基因1555A>G纯合突变,1例检测到delT961Cn杂合突变,致病基因突变总检出率为3%。结论在所研究的人工耳蜗植入群体中,线粒体12SrRNA基因突变不是主要的致聋病因。

关键词：突变线粒体基因 rRNA 听觉丧失耳蜗植入术

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NeuroD在神经细胞分化中的调控作用

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医学分子生物学杂志 2008年第3期5卷 278-282页

作者：方洪波张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游... 详细信息

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游基因表达,进而调控细胞周期和神经细胞分化进程。这些研究为NeuroD参与细胞分化进程,糖尿病和其他神经性疾病的发生提供了依据。

关键词： NeuroD 胰腺全反式维甲酸

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人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定

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免疫学杂志 2008年第6期24卷 684-687页

作者：刘惠荣吴刚周冰申乐薛红陈保生内蒙古农业大学生物工程学院生物科学教研室呼和浩特010018 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京市药品不良反应监测中心北京100024

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合。结论成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具。

关键词：磷脂转移蛋白原核表达抗体

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特洛伊肽运载核酸的研究进展

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医学研究杂志 2008年第2期37卷 92-95页

作者：楼秀芹周骋北京协和医学院基础学院/中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 100005 国家人类基因组北方研究中心北京100176

特洛伊肽(trojan peptides),又称细胞穿透肽(cell-penetrating peptides,CPP)或蛋白转导域(protein transduction do-mains,PTD),是一类少于30个氨基酸的小肽片段,它们一般含有多个碱性氨基酸,能够高效跨越细胞膜并将多种不同类型的大... 详细信息

特洛伊肽(trojan peptides),又称细胞穿透肽(cell-penetrating peptides,CPP)或蛋白转导域(protein transduction do-mains,PTD),是一类少于30个氨基酸的小肽片段,它们一般含有多个碱性氨基酸,能够高效跨越细胞膜并将多种不同类型的大分子物质(如多肽,蛋白质,核酸等)运送至细胞内。本综述主要阐述了利用特洛伊肽将质粒DNA和siRNA运送至培养的哺乳动物细胞以及动物体内的研究进展,并阐明了这一运载系统在基因功能研究和临床应用上的巨大潜力和意义。

关键词：闻特洛伊肽细胞穿透肽蛋白转导域质粒DNA siRNA

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载脂蛋白AI及其半胱氨酸突变体结合脂质状态下对内毒素血症小鼠作用的研究

载脂蛋白AI及其半胱氨酸突变体结合脂质状态下对内毒素血症小鼠作...

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中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议

作者：王云龙中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的利用内毒素血症小鼠模型来检测我们构建的八种重组高密度脂蛋白(野生型载脂蛋白AI及其7种半胱氨酸突变体结合脂质构成)的治疗效果。方法我们实验室构建了7种AI的半胱氨酸突变体:A-I(s52C),A-I(N74C),A-I(K107C),A-I(G129C),A-I(K19... 详细信息

目的利用内毒素血症小鼠模型来检测我们构建的八种重组高密度脂蛋白(野生型载脂蛋白AI及其7种半胱氨酸突变体结合脂质构成)的治疗效果。方法我们实验室构建了7种AI的半胱氨酸突变体:A-I(s52C),A-I(N74C),A-I(K107C),A-I(G129C),A-I(K195C)和A-I(S228C)。将这7种突变体及野生型AI与脂质结合构成八种重组的HDL:rHDL52,rHDL74,rHDL107,rHDL129,rHDL173.

关键词：内毒素血症野生型炎症因子半胱氨酸突变体小鼠模型

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Angelman Syndrome患儿的基因诊断

Angelman Syndrome患儿的基因诊断

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中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会

作者：齐展刘彦山邹丽萍赵秀丽中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室解放军总医院儿科

【目的】天使综合征(Angelman Syndrome,AS)是一种神经系统发育异常的遗传病, 主要临床表现为智力低下、运动或平衡障碍、特征性的反常行为以及严重的语言障碍。85% 的 AS 患者父母,携带染色体15q11-q13区域的结构异常。在 AS 患者中,70... 详细信息

【目的】天使综合征(Angelman Syndrome,AS)是一种神经系统发育异常的遗传病, 主要临床表现为智力低下、运动或平衡障碍、特征性的反常行为以及严重的语言障碍。85% 的 AS 患者父母,携带染色体15q11-q13区域的结构异常。在 AS 患者中,70%存在15q11-q13 的母源性缺失,3～5%为父源性15q11-q13单亲二体。相反,父源性15q11-q13的缺失。则往往表现为另一种症状与 AS 完全不同的疾病—Prader-Willi Syndrome(PWS)。为进一步对 AS 和 PWD 患儿进行准确的致病基因鉴别,我们建立了以多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)和微卫星标记连锁分析为基础的基因诊断技术平台.本文我们对1名 AS 疑似患儿进行基因诊断,并初步确定致病基因来源。【材料和方法】本文研究对象为1名1岁9个月女婴。患儿无发声和站立能力,爱笑,多动,双手双足挛缩。临床疑似 AS。获得知情同意后,我们采集患儿及其父母外周血各5ml;常规酚-氯仿法提取基因组 DNA;利用 SALSA MLPA KIT P064B MR1探针,通过 MLPA 进行患儿染色体 15q11-q13区域基因拷贝数的检测;进一步在该染色体区域选择6个微卫星标记(D15S1506、 D155122、D15S133、D15S1002、D15S165和 D15S1360),通过 PCR 扩增和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对缺失染色体片段的来源进行鉴别.【结果】MLPA 检测表明:患儿存在15q11.2-q12 之间至少包括 UBE3A,***,GABRB3 4个基因在内的大片段杂合缺失;连锁分析显示: 8个遗传标记中有4个(D15S1506、D15S122、D15S133和 D15S1002)存在母源性缺失,所以可以肯定患儿 NDN 基因至 D15S1002区段缺失,但 D15S165以远无缺失。【结论】首先应用 MLPA 方法在中国人 AS 患者中检测到15q11-13区域内大片段缺失,并通过微卫星标记连锁分析的方法进行了缺失区段的初步限定。该研究表明 MLPA 联合微卫星标记连锁分析是进行 AS 患者基因诊断的有效手段,该技术也适合于 PWS 患者基因缺失突变的检测。

关键词：基因诊断微卫星标记 Angelman Syndrome 染色体

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神经营养因子高亲和力受体(TrkA)与翻译起始因子eIF4A结合的分子机制及其功能研究

神经营养因子高亲和力受体(TrkA)与翻译起始因子eIF4A结合的分子...

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第二届中国生物产业大会

作者：崔迎彬苑玉和陈虹王欣黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所清华大学医学部北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京 100005

神经生长因子(神经营养素)家族包括神经生长因子(NGF)、脑衍生神经营养因子(BDNF)、神经营养素-3(NT-3)、神经营养素-4/5(NT4/5)等。它们通过结合高亲和力受体(Trk)和/或低亲和力受体(p75NTR)转导胞外信号到细胞内,导致神经元细胞的增... 详细信息

神经生长因子(神经营养素)家族包括神经生长因子(NGF)、脑衍生神经营养因子(BDNF)、神经营养素-3(NT-3)、神经营养素-4/5(NT4/5)等。它们通过结合高亲和力受体(Trk)和/或低亲和力受体(p75NTR)转导胞外信号到细胞内,导致神经元细胞的增殖、存活、树突轴突的生长、突触的释放、功能的维持,乃至细胞的凋亡。本研究前期工作工作中证实了p75NTR/TrkA均能与RanBPM相互作用，而使用TrkA抗体对真核细胞裂解液的免疫沉淀复合物的电泳分离和质谱分析发现了TrkA膜内区能与eIF4AI相互作用，随后通过酵母双杂交、体外GST-pull down试验、共转染和免疫杂交实验进一步证实了这一相互作用。在上述工作基础上，深入研究TrkA与eIF4A的相互作用的结构基础及其功能，将为体外信号分子可以通过受体直接影响蛋白翻译的假说提供证据，有重要的理论研究意义。

关键词：神经营养因子亲和力受体翻译起始因子分子机制

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