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中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会

作者：柯细松陆璐刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

同源异型盒(homeobox,HOX)基因是动物胚胎发育模式最重要的调控者之一,它在脊柱动物中一般是在不同的染色体的四个基因簇(A,B,C,D)的形式存在。HOX基因簇在进化上高度保守,一直以来认为这是因为HOX基因的功能非常关键,基因簇上存在很多... 详细信息

同源异型盒(homeobox,HOX)基因是动物胚胎发育模式最重要的调控者之一,它在脊柱动物中一般是在不同的染色体的四个基因簇(A,B,C,D)的形式存在。HOX基因簇在进化上高度保守,一直以来认为这是因为HOX基因的功能非常关键,基因簇上存在很多重要的调控元件,任何外来的基因或重复序列的插入都将破坏HOX基因簇的精确表达调控。我们通过生物信息学方法首次发现,在人的4个HOX基因簇上,分布有很多Alu重复序列。在A和B簇上,主要处于5’端,在C和D簇上,主要分布在3’端上。Alu序列大部分与HOX基因在同一条链上,少数在反义链上。从与HOX基因的位置关系来看,大部分处于基因间区,比如HOXB9与B13之间,或者在启动子区或内含子区,这些区域包含有许多已知的重要调控元件。HOX基因簇中Alu序列的发现,使我们对于理解HOX基因簇的调控和进化有了新的角度,同时对阐明Alu序列在发育中的功能奠定了基础。

关键词：基因簇 HOX Alu

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一个新的脂肪因子——脂联素的结构与功能的研究进展

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中国动脉硬化杂志 2005年第4期13卷 520-522页

作者：毕楠陈保生中国医学科学院基础医学研究所协和医科大学基础医学院分子生物学国家重点实验室北京市100005

脂联素是脂肪组织特异分泌的一个具有重要功能的细胞因子,在血浆中以多种形式存在,在能量代谢和糖代谢等生理过程中发挥重要的调节作用。本文介绍有关脂联素的分子生物学、结构与功能、特异受体的发现及其与肥胖、胰岛素抵抗和动脉粥样... 详细信息

脂联素是脂肪组织特异分泌的一个具有重要功能的细胞因子,在血浆中以多种形式存在,在能量代谢和糖代谢等生理过程中发挥重要的调节作用。本文介绍有关脂联素的分子生物学、结构与功能、特异受体的发现及其与肥胖、胰岛素抵抗和动脉粥样硬化等关系研究的新进展。

关键词：分子生物学脂联素的结构与功能综述脂肪因子糖脂代谢

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重组人色素上皮衍生因子的原核表达及其对血管内皮细胞增殖的抑制

重组人色素上皮衍生因子的原核表达及其对血管内皮细胞增殖的抑制

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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

作者：文中伟阴彬朱圣韬彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:疾病或意外创伤所造成的神经及神经元损伤很难得到彻底治疗与修复。这是由于在神经损伤中,神经胶质细胞释放的炎性介质及肉芽组织的嵌入影响神经和神经元的正确再生。色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor PEDF)是... 详细信息

目的:疾病或意外创伤所造成的神经及神经元损伤很难得到彻底治疗与修复。这是由于在神经损伤中,神经胶质细胞释放的炎性介质及肉芽组织的嵌入影响神经和神经元的正确再生。色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor PEDF)是本课题组新近克隆到的一种多功能的神经营养因子。近年来的研究表明,PDEF不但具有神经营养作用,还具有对血管生成及神经胶质细胞的抑制作用。上述功能提示:PDET可能与神经及神经元损伤后的再修复有关。为了研究它在神经损伤再修复中的作用及机理,本课题组首先克隆了人PDEF基因,并进行了原核表达、纯化及其活性测定。方法:从GeneBank中搜索到PEDF的全长cDNA序列资料,以胎盘组织RT产物为模板,扩增得到PDEF基因,将PDEF基因构建到原核表达载体pGEX4T-1中,转化BL21(DE3)。经表达条件的优化、一步亲和层析分离纯化及Thrombin柱上酶解后获得PEDF蛋白。Western Blot和质谱分析确证了该重组蛋白为人重组PEDF蛋白。在此基础上,利用:MTT法检测所获得的重组人PEDF蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制活性。结果:扩增到的PEDF经测序确证与GeneBank中的PEDF序列相符。经表达条件的优化,PEDF 蛋白表达量约达菌体总蛋白量的30％。经蛋白的亲和层析纯化、Thrombin酶切,获得的PEDF蛋白进行western-blot检测,结果显示在分子量46kDa左右,有一特异条带;进一步对其经质谱鉴定证明,该重组蛋白为人PEDF蛋白。最后,MTT法测得PEDF蛋白可以显著抑制血管内皮细胞的增殖,Bliss法计算,IC50为18μg／ml。结论:PEDF具有神经营养作用,同时还具有抑制血管生成的功能。但PEDF作用的具体机制还不完全清楚。本实验通过在大肠杆菌中以融合形式表达PEDF蛋白,纯化后用Thrombin酶切获得有活性的非融合型PEDF,该方法具有简单、有效、廉价的特点。PEDF的成功表达为今后PEDF的功能研究打下基础。

关键词：重组蛋白内皮细胞增殖原核表达

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一种同时提取细胞总RNA和总蛋白的方法

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生物技术通讯 2005年第6期16卷 649-650页

作者：董华王军军应天翼李霆王恒樑许彩民中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

应用TRIzol法分步提取总RNA和总蛋白,提取的总RNA亮度强、完整,提取的总蛋白与经常规RIPA裂解液提取的全蛋白的质量相当。验证了从同一批次处理的细胞中同时提取总RNA和总蛋白进行检测分析是可行的,而且确保了实验条件的一致性,缩短了... 详细信息

应用TRIzol法分步提取总RNA和总蛋白,提取的总RNA亮度强、完整,提取的总蛋白与经常规RIPA裂解液提取的全蛋白的质量相当。验证了从同一批次处理的细胞中同时提取总RNA和总蛋白进行检测分析是可行的,而且确保了实验条件的一致性,缩短了实验周期。

关键词： TRIzol法总RNA 总蛋白提取

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一种新发现的血管生成抑制剂:人载脂蛋白(a)kringleⅣt10-kringleⅤ结构域重组蛋白质在毕赤酵母中的表达

一种新发现的血管生成抑制剂:人载脂蛋白(a)kringleⅣt10-kringle...

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中国蛋白质组学第三届学术大会

作者：申乐陈保生中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的:通过对人载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),Apo(a)]kringleIVt10-kringleV结构域在毕赤酵母中的重组表达,探讨人载脂蛋白(a)kringleIVt10-kringleV结构域对血管生成的抑制效应,为开发新的血管生成抑制剂提供理论依据。方法:通过聚合... 详细信息

目的:通过对人载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),Apo(a)]kringleIVt10-kringleV结构域在毕赤酵母中的重组表达,探讨人载脂蛋白(a)kringleIVt10-kringleV结构域对血管生成的抑制效应,为开发新的血管生成抑制剂提供理论依据。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从人肝组织Apo(a)cDNA中扩增12,382-12,977这一596-bp的kringleIVt10-kringleV片段。在设计上下游引物时分别引入EcoRI和XbaI限制性内切酶位点,将分别经过上述两种限制性内切酶酶切后的PCR产物插入

关键词：重组蛋白质毕赤酵母结构域 a)kringle t10-kringle 抑制剂

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红系分化相关基因的鉴别与功能研究

红系分化相关基因的鉴别与功能研究

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中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会

作者：霍晓芳张俊武中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的红系发生指造血干细胞经一系列分化阶段,最终产生成熟红细胞的过程,它的的启动和进行是多个基因有次序地开启和关闭或表达增强和降低的结果,一旦它们的表达次序受到干扰,将可能导致血液病的发生。K562细胞是从红白血病病人血液中分... 详细信息

目的红系发生指造血干细胞经一系列分化阶段,最终产生成熟红细胞的过程,它的的启动和进行是多个基因有次序地开启和关闭或表达增强和降低的结果,一旦它们的表达次序受到干扰,将可能导致血液病的发生。K562细胞是从红白血病病人血液中分离出的细胞株,形似于红系发育阶段中红系祖先细胞。在药物诱导下可模拟正常红系分化的过程,表现红系分化的特征。为了进一步获得分化过程中相关基因的信息,我们选用K562细胞株,应用改良差异RT-PCR(DDRT-PCR),研究药物诱导的K562细胞在红系分化前后的基因表达差异,寻找红系分化相关基因,最终获得红系分化的调控因子,并研究它们的作用机制。方法培养K562细胞并用氯高铁血红素(Hemin)诱导其向红系分化,收集诱导前及诱导36h后的细胞,用Trizol法提取总RNA,用改进的DDRT-PCR技术分析mRNA差异表达。挑取表达有明显差异的片段,PCR再扩增,T载体克隆并测序。经Northern验证,确定真正差异片段后,再用Northern杂交和Western blot检测其在Heroin诱导后其mRNA和蛋白水平的表达情况。从cDNA中扩增出该基因的全长,分别用pCDNA3.1和pAVU6+27构建过表达质粒和表达抑制质粒,用转染K562细胞,经过G4.18筛选得到稳定转化子后用Hemin诱导,联苯胺染色分析红系分化状态,以确定在红系分化中的作用。结果(1)通过DDRT-PCR技术得到200多条差异带。在NCBI进行BLAST比对,发现这些基因多为信号转导分子、分化相关抗原、细胞凋亡相关分子、肿瘤相关分子、染色质结构蛋白等,还有一些已知cDNA而未知功能的基因和几个新基因。(2)Northern验证了一个在Hemin诱导后明显表达上调的基因Annexinl,为钙依赖的磷脂酶结合蛋白,已知其参与调节细胞生长分化,凋亡等生理病理过程。该基因在红系细胞分化中的作用尚无报告。(3)我们用Northern blot和Western blot杂交证实了它在用Hemin诱导后,随着时间延长其mRNA水平和蛋白水平表达逐渐升高,高峰大约在诱导后36-48小时。(4)两种质粒转染K562细胞后获得的稳定转化子,用RT-PCR和Western blot检测确实实现了该基因的过表达和表达抑制。(5)这些转化子再用Hemin诱导,过表达的转化子联苯胺染色阳性细胞百分比随时间逐渐升高,并且比正常的K562诱导后有所增加,说明了该基因的过表达促进红细胞分化;而表达抑制的转化子联苯胺染色阳性细胞百分比明显减少,表明Annexinl的表达抑制几乎完全阻断了K562细胞的红系分化能力。(6)检测了Annexinl的稳定转化子的ERK1/2和P-ERK1/2的水平,发现过表达的转化子中P-ERK的水平升高,而抑制表达的转化子中P-ERK水平降低。这说明了ERK/MAPK通路与该基因的功能相关。具体机制有待进一步研究。结论通过DDRT-PCR获取许多与红细胞分化相关基因的线索,初步证明了Annexinl在红系分化中具有重要作用。并且发现ERK/MAPK通路参与了Annexinl促进红系分化的作用。这些结果有助于进一步揭示红细胞分化的详细机制,并可能对造血细胞分化相关疾病的治疗提供线索。

关键词：红系分化细胞株红细胞分化相关基因功能研究

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造血干细胞作为基因治疗靶细胞的研究进展

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医学分子生物学杂志 2005年第3期2卷 198-201页

作者：马艳妮张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞,以纠正基因的缺陷或发挥治疗作用,从而达到治疗疾病的目的。造血干细胞具有自我更新能力和可移植性,可在体内长期存活,可使治疗基因在患者体内长期稳定地表达... 详细信息

基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞,以纠正基因的缺陷或发挥治疗作用,从而达到治疗疾病的目的。造血干细胞具有自我更新能力和可移植性,可在体内长期存活,可使治疗基因在患者体内长期稳定地表达,因而具有广泛的应用前景。来源于HIV的慢性病毒载体因为可有效转染处于静止状态的造血干细胞而成为研究热点。造血干细胞的基因治疗技术逐渐成熟且已应用于一些疾病的临床治疗。

关键词：基因治疗造血干细胞慢性病毒载体

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载脂蛋白C3基因多态性-482C>T与血浆脂质的关系

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中国动脉硬化杂志 2005年第3期13卷 335-339页

作者：李国平陈保生薛红曾武威吴刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学系医学分子生物学国家重点实验室脂蛋白组北京市100005

目的研究载脂蛋白C3基因上游调控区内-482C>T多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系。方法应用聚合酶链反应—限制片长多态性方法逐个鉴定每个个体的基因型,并测定其血浆脂质和载脂蛋白水平。结果-482T等位基因携带者具有较高... 详细信息

目的研究载脂蛋白C3基因上游调控区内-482C>T多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系。方法应用聚合酶链反应—限制片长多态性方法逐个鉴定每个个体的基因型,并测定其血浆脂质和载脂蛋白水平。结果-482T等位基因携带者具有较高的甘油三酯水平(P=0.044);同时该等位基因的携带者也具有较高的载脂蛋白C2水平(P=0.017)。结论载脂蛋白C3基因-482C>T位点和血浆甘油三酯以及其它几种脂蛋白密切相关。

关键词：分子生物学载脂蛋白C3基因多态性研究聚合酶链反应-限制片长多态性载脂蛋白C3 基因多态性甘油三酯

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脑源性神经营养因子基因196A／G多态性和阿尔茨海默病关联性分析

脑源性神经营养因子基因196A／G多态性和阿尔茨海默病关联性分析

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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

作者：边建涛张俊武张振馨赵华路陈等中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经内科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种涉及中枢神经系统的渐进性退行性疾病,严重威胁老年人身心健康。目前AD的病因尚未完全阐明,一般认为是遗传因素和环境因素相互作用的结果, 遗传因素可能起主要的作用。已经确定了几个与早发性... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种涉及中枢神经系统的渐进性退行性疾病,严重威胁老年人身心健康。目前AD的病因尚未完全阐明,一般认为是遗传因素和环境因素相互作用的结果, 遗传因素可能起主要的作用。已经确定了几个与早发性家族性AD相关的基因,但对于更为常见的散发性AD,载脂蛋白E(apolipoprotein E)ε4等位基因是唯一被确定的遗传风险因子,但它对于AD的发生既不是必需的也不是充分的。其他若干候选基因已被提出,脑源性神经营养因子(BDNF)基因(定位在11p13-p14)就是其中的一个候选基因。

关键词：阿尔茨海默病神经营养因子多态性位点关联性分析

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酪蛋白激酶1在Wnt通路和生物节律中的研究进展

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医学分子生物学杂志 2005年第4期2卷 274-277页

作者：青轶王欣中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京市100005 国家人类基因组北方研究中心

酪蛋白激酶1(casein kinase 1,CK1)属于丝／苏氨酸蛋白激酶,在物种间和组织中分布都很广泛。在Wnt信号通路中,CK1直接或间接参与对Dvl-1、APC、Axin和β-Catenin的磷酸化反应,CK1或其具体亚单位在Wnt通路中发挥的是正调节作用还是负调... 详细信息

酪蛋白激酶1(casein kinase 1,CK1)属于丝／苏氨酸蛋白激酶,在物种间和组织中分布都很广泛。在Wnt信号通路中,CK1直接或间接参与对Dvl-1、APC、Axin和β-Catenin的磷酸化反应,CK1或其具体亚单位在Wnt通路中发挥的是正调节作用还是负调节作用尚存在争议。在生物节律中CK1主要是直接磷酸化作用Per等主要的节律基因蛋白,调节后者的降解,影响其核定位和基因表达,影响生物节律。

关键词：酪蛋白激酶1 Wnt 生物节律

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