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基础医学与临床 2017年第7期37卷 929-934页

作者：陆必超沈青丽李文利李娟陈慧代玉梅何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家分子生物学重点实验室北京100005 广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心临床检验部/妇产科广东广州510623 广州医科大学附属肿瘤医院检验科广东广州510000

目的构建人Mut S同源蛋白2(h MSH2)过表达的肺癌细胞模型,探究h MSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增h MSH2编码序列,同源重组法构建h MSH2-EGFP融合蛋白过表达载体;转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建h MSH2分子过... 详细信息

目的构建人Mut S同源蛋白2(h MSH2)过表达的肺癌细胞模型,探究h MSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增h MSH2编码序列,同源重组法构建h MSH2-EGFP融合蛋白过表达载体;转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建h MSH2分子过表达的NCI-H520细胞模型;Western blot检测细胞中h MSH2分子表达,流式细胞计量术检测细胞膜上h MSH2分子表达,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞,乳酸脱氢酶释放法检测γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率。结果获得h MSH2编码序列(2 805 bp),构建Fugw-h MSH2重组载体,酶切鉴定结果与预期目的条带大小相符;h MSH2-EGFP融合蛋白在NCI-H520细胞中得到表达,过表达h MSH2的NCI-H520细胞表面的h MSH2分子水平显著升高(P<0.001);γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率较野生型NCI-H520细胞显著升高(P<0.05)。结论成功构建h MSH2分子过表达的肺癌细胞模型;细胞膜上表达水平上调的h MSH2分子增强了γδT细胞对肺癌细胞的细胞毒作用。

关键词：人Mut S同源蛋白2 γδT细胞 NCI-H520细胞

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优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系的初步建立和实际应用

优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系的初步建立和实...

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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛

作者：张德礼李衍达黄高升朱关福方福德清华大学信息科学技术学院生物信息学教育部重点实验室北京100084 第四军医大学基础部中国癌症研究基金会肿瘤学研究所西安 710032 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京 100005

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产犬五联和猫三联病毒活疫苗所用7种动物肾细胞系(F-81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)在700余只裸鼠进行了致癌(瘤)试验,并完成染色体变异率、克隆形成率、... 详细信息

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞种子库与工作库基础上,对研制生产犬五联和猫三联病毒活疫苗所用7种动物肾细胞系(F-81,CRFK,MDCK,Vero,Vero-2,MA-104,BHK-21)在700余只裸鼠进行了致癌(瘤)试验,并完成染色体变异率、克隆形成率、细胞凝集性与肿瘤形成相关性研究。试验结果证明,水貂肠炎病毒(MEV)S18和L12株为制苗用毒株,L12株为检验用强毒株。建立了MEV组织培养的方法及高效价无血清MEV抗原大批量生产和检验的新工艺。成功研制了安全有效的水貂病毒性肠炎(MVE)细胞培养灭活矿油苗和铝胶苗,并大批量常年生产应用,特制高效苗免疫产生期为3～5d,免疫期与保存期均在9个月以上,免疫保护率高达100％。制定了MEV疫苗制造及检验规程。实验证明F-81和CRFK猫肾细胞系为亚二倍体核型,不具有致癌性,可安全用于疫苗生产。该疫苗既可用于发生疫情时假定健康貂的紧急预防接种,又可接种隐性感染貂和发病水貂。同时,应用敏感细胞系与钝感细胞系交替培育的方法,大幅度提高MEV增殖滴度,获得最佳制苗毒株。筛选出高变异率上皮细胞系移植于裸鼠皮下,在体内环境下快速选育出更高突变率细胞系,进而发育成MRT,确立了异类肿瘤的在体实验转化现象。提出优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系。

关键词：细小病毒疫苗交替选育生物循环

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多巴胺代谢通路上的SNP型组合与偏执型精神分裂症的系统关联分析——一种研究复杂疾病的新策略

多巴胺代谢通路上的SNP型组合与偏执型精神分裂症的系统关联分析...

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第二届全国分子流行病学学术会议

作者：许琪计宏凯黄颖孙向青季梁李衍达原岩波舒良于欣沈渔邨于雅琴贾彦斌鞠桂芝刘树铮史杰萍张伯玉邹柯陶玉斌王艳萍强伯勤吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室清华大学生物信息学研究所北京大学精神卫生研究所吉林大学基因组医学研究中心

目的：以偏执型精神分裂症为模板，提出一种研究复杂疾病易感基因的新策略．方法：分析步骤：在80例散发偏执型精神分裂症患者和108例对照中，共筛检了多巴胺代谢通路上的18个代谢酶基因的52个SNPs，所得SNPs数据均分别经过传统的... 详细信息

目的：以偏执型精神分裂症为模板，提出一种研究复杂疾病易感基因的新策略．方法：分析步骤：在80例散发偏执型精神分裂症患者和108例对照中，共筛检了多巴胺代谢通路上的18个代谢酶基因的52个SNPs，所得SNPs数据均分别经过传统的统计学方法和自创的多位点联合作用分析方法(PESCP和PEDE)的处理．验证步骤：对分析步骤中所得到的阳性SNPs位点，在95个偏执型精神分裂症的核心家系中进行了重复筛检，并用上述两种方法对数据进行了再次处理分析．结果：在分析步骤中，共筛检到4个主要与疾病的易感性相关的SNPs型，共涉及7个阳性SNPs位点。在验证步骤中，使用传统统计学分析方法没有检出阳性位点，而使用多位点联合作用分析方法除一种组合外，其余阳性结果均再次被检出，其中COMT和ALDH基因的组合最具显著性。同时我们提出并建立了研究复杂疾病的系统研究策略．结论：对于多基因疾病的易感基因研究，多位点联合作用分析比单位点分析更加灵敏和特异。在不同人群中对结果进行验证，对于复杂疾病的研究是必要的．

关键词：精神分裂症易感基因多巴胺复杂疾病

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优劣环境交替性生物循环选育的理论与技术体系和应用

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科技导报 2003年第11期21卷 11-17,10页

作者：张德礼李衍达黄高升朱关福方福德清华大学信息科学技术学院自动化系智能技术与系统国家重点实验室清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室北京100084 第四军医大学基础部病理学教研室中国癌症研究基金会肿瘤学研究所西安710032 中国医学科学院基础医学研究所/中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京710032

不同环境条件下的交替选育作用[1-6]虽已有成功的应用,但在恶劣环境下筛选后再回归到同类优越环境下培育,并反复循环选育的优良生物品种,特别是选育强毒高免疫原性的超高增殖病毒株,经体内外环境交替培育获得高变异率肿瘤细胞系并实现... 详细信息

不同环境条件下的交替选育作用[1-6]虽已有成功的应用,但在恶劣环境下筛选后再回归到同类优越环境下培育,并反复循环选育的优良生物品种,特别是选育强毒高免疫原性的超高增殖病毒株,经体内外环境交替培育获得高变异率肿瘤细胞系并实现异类肿瘤在体实验转化的现象,尚未见报道.

关键词：病毒疫苗交替选育恶性横纹肌样瘤制备水貂细小病毒致癌安全性

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值得关注的线粒体12SrRNA C1494T突变--药物敏感致聋靶点

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听力学及言语疾病杂志 2008年第6期16卷 446-450页

作者：王秋菊韩明鲲刘晓雯鲍晓林赵亚丽王大勇兰兰赵翠韩东一解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853 国家人类基因组北方研究中心兰州大学第二医院耳鼻咽喉-头颈外科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨线粒体12SrRNA C1494T突变与氨基糖苷类药物致聋的临床表型特征的相关性，警示临床值得关注的又一药物致聋敏感靶点。方法对遗传性聋资源库中两个具有母系遗传特征的耳聋大家系成员进行病史、体检、纯音测听及听性脑干反应检查... 详细信息

目的探讨线粒体12SrRNA C1494T突变与氨基糖苷类药物致聋的临床表型特征的相关性，警示临床值得关注的又一药物致聋敏感靶点。方法对遗传性聋资源库中两个具有母系遗传特征的耳聋大家系成员进行病史、体检、纯音测听及听性脑干反应检查并绘制系谱图。提取耳聋患者的外周血基因组DNA，运用聚合酶链扩增反应（polymerase chain reaction。PCR）方法对耳聋患者线粒体12SrRNA基因1228～1984位序列（涵盖12SrRNA 1494及1555位点）进行扩增，扩增产物纯化后进行限制性酶切鉴定或测序，运用DNAStar软件对测序结果进行比对分析。结果两个家系分别为一个四代相传的母系遗传家系（196家系）和一个三代相传的母系遗传性耳聋家系（1802家系）。196家系发现8名12SrRNA C1494T携带者，其中3名在接触氨基糖苷类药物后出现重度耳聋，成为聋哑人（Ⅱ：2、Ⅱ：5、Ⅲ：2）；2名无耳毒性药物用药史者（Ⅱ：9、Ⅱ：7），表现为高频听力损失，言语发育正常；1名患者25岁时应用链霉素后致重度耳聋，现交流困难（Ⅱ：3）；1名突变者现为2岁幼儿，目前对声音反应正常（Ⅳ：1）；1名为听力正常人（Ⅲ：3），现年28岁。1802家系发现12名耳聋患者，其中7名患者为母系后代，全部为聋哑，配偶聋哑人5名。1802家系中母系后代成员10名（3名男性，7名女性），其中7名为聋哑患者（2名男性，5名女性），3名为听力正常人（1名男性，2名女性）。7名母系后代患者中有4名有明确的耳毒性药物用药史（奎宁、链霉素或庆大霉素），3名用药史不详。2名母系患者进行基因检测发现线粒体12SrRNA C1494T突变。结论本研究通过两个线粒体12SrRNA C1494T突变家系警示线粒体12SrRNA C1494T突变又是一个值得非常关注的药物敏感作用靶点。具有此突变的患者接触氨基糖苷类药物会产生重度耳聋，而未接触该药物者可以是正常听力或是高频听力下降者。临床要高度警示线粒体12SrRNA C1494T突变患者，早发现、早预警可避免聋哑患者的出现。

关键词：线粒体12SrRNA C1494T突变线粒体DNA 氨基糖苷类抗生素母系遗传

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95例前庭水管扩大核心家系SLC26A4基因特异突变图谱

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听力学及言语疾病杂志 2008年第3期16卷 171-177页

作者：赵亚丽王秋菊李庆忠兰兰袁虎纵亮韩明鲲王大勇翟所强解放军总医院耳鼻咽喉一头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室国家人类基因组北方中心复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻咽喉科

目的探讨中国人群中前庭水管扩大(enlarged vestibular aqueduct,EVA)患者SLC26A4基因突变图谱,为相关基因的筛查及临床应用奠定基础。方法采集95例EVA核心家系,募集84名听力正常者及46名内耳结构正常的听力损失患者作为对照。提取基因... 详细信息

目的探讨中国人群中前庭水管扩大(enlarged vestibular aqueduct,EVA)患者SLC26A4基因突变图谱,为相关基因的筛查及临床应用奠定基础。方法采集95例EVA核心家系,募集84名听力正常者及46名内耳结构正常的听力损失患者作为对照。提取基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增SLC26A4基因的21个外显子,纯化PCR产物后直接测序,使用DNAStar及BioEdit序列比对软件分析SLC26A4基因的突变位点,利用Clustal软件进行同源氨基酸序列比对分析。结果在95例EVA核心家系中,93例发生了SLC26A4基因突变,约占97.9%(93/95)。其中双等位基因突变占88.4%(84/95),单等位基因和未发现突变的家系分别占9.5%和2.1%。93个家系中共发现38种突变,包括23种国际上尚未报道的突变,15种已报突变(5种仅报道于中国家系)。IVS7-2A>G是所有突变中最常见的突变,其在所有突变体中约占57.63%(102/177),75(75/95)个家系发生了此种突变。结论95例中国EVA核心家系的SLC26A4基因调查中,发现了一个中国特异性的SLC26A4基因突变谱:97.9%的中国EVA患者均可检测到SLC26A4基因的突变,双等位基因突变率约为88.4%;23种新的突变和5种仅报道于中国家系的突变在其他人群未曾检测到;IVS7-2A>G为中国人群前庭水管扩大患者最常见的突变。

关键词：前庭水管扩大 SLC26A4 基因突变

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细菌人工染色体(BAC)及其分析和修饰方法简介

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 309-313页

作者：黄粤刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

细菌人工染色体是一种新发展起来的DNA载体系统 ,它具有容量大、遗传特性稳定、易于操作等优点 .在基因文库构建和基因功能分析等方面有广泛的应用 .综述了近年来发展起来的对BAC进行分析和修饰的一些方法 .

关键词：细菌人工染色体定位修饰同源重组 BAC

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白细胞介素体α基因负调控元件相关结合蛋白的筛选与克隆

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中国医学科学院学报 2002年第2期24卷

作者：陆瑜李宏帆莫志成吴宁华沈？琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京 100005

白细胞介素2受体（IL-2R）α亚基的胞内末端较短，可能不直接参与IL-2的信号传递，但它在激活淋巴细胞中的调控。本组曾报道IL-2Rα基因5'端顺式调控元件NRE不仅与其3'端下游NRE反向重复序列9NIRS）共同参与对IL-2Rα基因表达... 详细信息

白细胞介素2受体（IL-2R）α亚基的胞内末端较短，可能不直接参与IL-2的信号传递，但它在激活淋巴细胞中的调控。本组曾报道IL-2Rα基因5'端顺式调控元件NRE不仅与其3'端下游NRE反向重复序列9NIRS）共同参与对IL-2Rα基因表达的调控，同时反式作用因子可能通过NRE和/或NIRS以及单链或双链DNA的选择性影响该基因的启动子活性。为研究IL-2Rα基因NRE的作用机制，本组对其特异的结合蛋白进行了研究。

关键词：白细胞介素体α 基因负调控元件相关结合蛋白筛选克隆

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人类基因组研究的主题:基因组医学与公共卫生——2004年亚太人类基因组与遗传学大会简介

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中国医学科学院学报 2004年第6期26卷 709-714页

作者：方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

概述两年一次的亚太地区人类基因组与遗传学大会于2004年11月17～20日在新加坡召开.来自亚太地区数十个国家千余名科学家与会,我国有数十人赴会,笔者也在其中.

关键词：人类基因组研究基因组医学公共卫生 2004年亚太人类基因组与遗传学大会

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从病毒细胞遗传进化的生物循环选育到新基因识别与验证

从病毒细胞遗传进化的生物循环选育到新基因识别与验证

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2003年中国科协“生物信息学与进化计算”青年科学家论坛

作者：张德礼李衍达黄高升方福德季梁朱关福北京大学医学部公共卫生学院营养与食品卫生学系，北京大学人类疾病基因研究中心，北京，100083 清华大学信息科学与技术国家实验室生物信息学研究部，清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室，清清华大学信息科学与技术国家实验室生物信息学研究部，清华大学生物信息学研究所生物信息学教育部重点实验室，清华大学信息科学技术学院自动化系智能技术与系统国家重点实验室，北京，100084 第四军医大学基础部病理学教研室，西京医院病理科，中国癌症研究基金会肿瘤研究所，西安，710032 中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室，北京，710032

初步建立了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系并得到实际应用。发现细小病毒超高增殖的交替选育规律又在不同实验体系基因与染色体水平分别得到验证，从而发现了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物... 详细信息

初步建立了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环选育作用的理论与技术体系并得到实际应用。发现细小病毒超高增殖的交替选育规律又在不同实验体系基因与染色体水平分别得到验证，从而发现了病毒细胞遗传进化的优劣环境交替性生物循环的选育规律，提出了相关选育机制与方法，初步建立了这种选育作用的理论与技术体系并得到实际应用，它正是联系高效水貂细小病毒疫苗研制、痘苗病毒重组质粒转染技术创新、细胞系致癌毒理学安全性评价、异类肿瘤在体实验转化现象确立与横纹肌样瘤起源之谜初步揭示的纽带与桥梁，具有广泛的科学指导和实用意义。实际应用：(1)安全高效的水貂肠炎病毒细胞培养灭活疫苗的首次研制成功和长期广泛应用;(2)在对痘苗病毒重组质粒转染技术的探索性研究中首次简化了基因转染技术;(3)恶性横纹肌样瘤(MRT)在模型动物体内的首次发现和成功复制，为阐明其起源之谜提供了机会。从染色体遗传变异角度初步阐明了MRT的发生、发展规律，从比较医学角度揭示了MRT的组织细胞起源;(4)解了传代细胞(CCL)致癌毒理实验的难题，揭示了遗传变异率与致癌(瘤)的关系。在基因识别新方法与功能基因分离方面取得重要进展。建立了从计算机软件分析、人工干预分析及与实验生物学相结合角度来发现人类新基因的方法，并证明它是加速基因克隆和鉴定的一条有效途径。电子克隆百余人类新基因(还用合作开发的软件计算机识别800个人类新基因候选对象)，部分基因编码序列已被实验证实和引用，其中几个新克隆基因已在动物实验中显示出明显的生物学功能活性。发现了美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因组注释项目公布的人类基因模式参考序列(REFSEQ)存在各种类型的多种/处错误，这一结果提示应慎重使用NCBI的REFSEQ数据库。

关键词：病毒细胞生物循环基因识别遗传进化

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