检索结果-内蒙古大学图书馆

生命科学 2020年第2期32卷 139-142页

作者：田国帅董文吉汪伟张业北京协和医学院/中国医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100730 中吉智药(北京)生物技术有限公司北京100176 中日友好医院神经内科北京100029

Twinkle基因编码蛋白TWINKLE可进入线粒体内参与复制体的组成,维持线粒体DNA数目的稳定。Perrault综合征作为一种罕见的常染色体隐性遗传病,可由Twinkle突变导致,目前该疾病暂无全面的诊断方法和有效的治疗手段。现简要概述了Twinkle突... 详细信息

Twinkle基因编码蛋白TWINKLE可进入线粒体内参与复制体的组成,维持线粒体DNA数目的稳定。Perrault综合征作为一种罕见的常染色体隐性遗传病,可由Twinkle突变导致,目前该疾病暂无全面的诊断方法和有效的治疗手段。现简要概述了Twinkle突变导致Perrault综合征的研究进展。

关键词： Twinkle Perrault综合征线粒体DNA

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MicroRNA-205对人皮肤上皮细胞迁移能力的调控

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 613-618页

作者：余佳付红艺汪晓艳刘倩王芳冯涛张俊武中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学系重庆400016

目的观察microRNA-205(miR-205)在人皮肤上皮细胞中的表达抑制和过量表达对于该类细胞迁移能力的影响。方法使用体外合成的miR-205抑制剂(antagomir-205)处理人皮肤上皮细胞并检测抑制效果,观察其对皮肤上皮细胞迁移的影响。在293TN细... 详细信息

目的观察microRNA-205(miR-205)在人皮肤上皮细胞中的表达抑制和过量表达对于该类细胞迁移能力的影响。方法使用体外合成的miR-205抑制剂(antagomir-205)处理人皮肤上皮细胞并检测抑制效果,观察其对皮肤上皮细胞迁移的影响。在293TN细胞中包装并收获能过表达成熟miR-205的重组慢病毒颗粒,感染人皮肤上皮细胞并检测过表达效果,进一步观察其对皮肤细胞迁移的影响。结果成功使用miR-205抑制剂实现对人皮肤上皮细胞内源性miR-205的抑制,证实其抑制了皮肤上皮细胞的迁移。成功获得过表达miR-205的重组慢病毒颗粒,证明miR-205可促进皮肤上皮细胞的迁移。结论 miR-205可以促进皮肤细胞的迁移。

关键词： microRNA 上皮细胞细胞迁移

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利用CRISPR／Cas9技术敲除HeLa细胞中YAF2基因

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医学研究杂志 2016年第11期45卷 22-27页

作者：丛晓杰马晓骊陈虹黄秉仁陈等中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的利用CRISPR/Cas9技术建立YAF2(YY1 associated factor 2)基因敲除的宫颈癌He La细胞株,用于YAF2基因在宫颈癌细胞中分子功能的研究。方法首先利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计两对靶向YAF2基因第2外显子不同位点的向导RNA(single-g... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9技术建立YAF2(YY1 associated factor 2)基因敲除的宫颈癌He La细胞株,用于YAF2基因在宫颈癌细胞中分子功能的研究。方法首先利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计两对靶向YAF2基因第2外显子不同位点的向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,分别克隆至质粒p X335中,测序确认插入片段正确的克隆。先用一对重组载体转染He La细胞,7天后,再用另一对转染He La细胞,第2对转染3天后,取培养细胞的2/3提取基因组DNA,对敲除位点附近的片段进行PCR扩增后通过DNA测序对敲除效率进行分析,剩余细胞在96孔平板上通过有限稀释法筛选YAF2敲除的细胞株。用蛋白质免疫印迹实验初步鉴定YAF2蛋白质表达缺失的细胞克隆,提取其基因组DNA,对敲除位点附近的序列进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p GEM-T easy载体,通过DNA测序确认YAF2基因纯合敲除的细胞株。结果成功构建两对针对人YAF2基因第二外显子的p X335-sgRNA质粒;PCR产物测序证明两对重组载体均有YAF2基因敲除活性;得到2株YAF2敲除的He La细胞株。结论利用CRISPR/Cas9技术在He La细胞中成功敲除YAF2基因,为在He La细胞中研究YAF2的分子功能奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 YAF2 HeLa

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IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响

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医学研究杂志 2014年第10期43卷 53-58页

作者：杨霞张俊文黄秉仁陈虹中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-... 详细信息

目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位。用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用。用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响。结果成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上。细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在。细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达。结论证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据。

关键词： IFN-λR1 TRAF6 NF-κB ISRE 相互作用

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米诺环素增加情绪有关脑区ΔFosB的表达来减轻LPS诱导的小鼠神经炎性反应

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基础医学与临床 2019年第7期39卷 943-948页

作者：李岚岚修建波沈岩许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的探究转录因子ΔFosB在米诺环素减轻脂多糖(LPS)诱导的神经炎性反应中的作用。方法成年C57BL/6小鼠连续3 d经腹膜内注射0.9%氯化钠溶液或米诺环素(50mg/kg),第3天再分别注射0.9%氯化钠溶液或LPS(0.83 mg/kg),注射后6或24 h取样。用... 详细信息

目的探究转录因子ΔFosB在米诺环素减轻脂多糖(LPS)诱导的神经炎性反应中的作用。方法成年C57BL/6小鼠连续3 d经腹膜内注射0.9%氯化钠溶液或米诺环素(50mg/kg),第3天再分别注射0.9%氯化钠溶液或LPS(0.83 mg/kg),注射后6或24 h取样。用免疫组化实验观察特定脑区小胶质细胞形态和ΔFosB的表达,以分析米诺环素对LPS导致神经炎性反应的抑制作用和ΔFosB的表达分布。用Image-Pro Premier 3D分析图像,用GraphPad Prism进行统计学分析。结果米诺环素可以有效减少蓝斑(LC)中LPS导致的小胶质细胞胞体面积的增加(P<0.05),减少中枢的炎性反应。同时,米诺环素增加了抑郁症相关脑区LC(P<0.001),臂旁核(LPB,P<0.05)和下丘脑室旁核(PVN,P<0.05)中ΔFosB的表达。结论米诺环素可能通过增加情绪有关脑区LC,LPB,PVN中ΔFosB的表达来减轻脂多糖诱导的神经炎性反应。

关键词：抑郁症 ΔFosB 米诺环素小胶质细胞

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去泛素化酶OTUB1参与细胞铜缺乏的应答

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基础医学与临床 2022年第7期42卷 1020-1025页

作者：张宇飞朱基彦瞿思遥张祝琴刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的通过构建铜缺乏的细胞模型探究是否存在铜依赖的酶参与铜缺乏导致的心肌肥厚的发生。方法使用CRISPR/Cas9技术,构建Ctr1基因敲除的大鼠心肌细胞株H9c2(Ctr1^(-/-));收集野生型(WT)、Ctr1^(-/-)、铜螯合剂TTM处理的H9c2细胞中的蛋白... 详细信息

目的通过构建铜缺乏的细胞模型探究是否存在铜依赖的酶参与铜缺乏导致的心肌肥厚的发生。方法使用CRISPR/Cas9技术,构建Ctr1基因敲除的大鼠心肌细胞株H9c2(Ctr1^(-/-));收集野生型(WT)、Ctr1^(-/-)、铜螯合剂TTM处理的H9c2细胞中的蛋白质,通过铜亲和树脂蛋白质结合实验联合质谱分析筛选铜依赖的酶;通过Western blot检测缺铜细胞中该酶的下游信号通路。结果成功构建Ctr1基因敲除的H9c2细胞株,该细胞株中铜含量显著降低(P<0.05);质谱分析筛选出能与铜相互作用的去泛素化酶OTUB1;铜缺乏的H9c2细胞中泛素化水平升高;铜缺乏条件下H9c2细胞中OTUB1靶蛋白DEPTOR水平下降;mTOR信号通路激活。结论去泛素化酶OTUB1参与铜缺乏的细胞应答,提示其可能参与铜缺乏引起的心肌肥厚的发生。

关键词：铜心肌肥厚 OTUB1

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基因Cdca2敲除对小鼠精子发生和生育力无明显影响

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基础医学与临床 2023年第5期43卷 717-723页

作者：柳俊邹定峰缪时英宋伟李凯中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探究睾丸高表达细胞分裂周期相关蛋白2基因(Cdca2)在小鼠精子发生和生育力中的生理功能。方法通过Q-PCR和Western blot检测Cdca2在小鼠不同组织部位的表达情况;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre-loxP介导的重组系统构建Cdca2组织... 详细信息

目的探究睾丸高表达细胞分裂周期相关蛋白2基因(Cdca2)在小鼠精子发生和生育力中的生理功能。方法通过Q-PCR和Western blot检测Cdca2在小鼠不同组织部位的表达情况;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre-loxP介导的重组系统构建Cdca2组织特异性敲除的小鼠品系;通过苏木精-伊红(HE)染色和形态学分析了解小鼠CDCA2缺失对精子发生的各个阶段生精细胞形态的影响;通过精子全自动检测分析系统检测小鼠CDCA2缺失对精子活率及运动参数的影响;通过生育力测试实验检测CDCA2缺失对雄性小鼠生育能力的影响。结果Cdca2是一个睾丸高表达的基因;利用CRISPR/Cas9技术和生殖系统特异性Cre的工具鼠,成功获得了Cdca2生殖细胞特异性敲除的小鼠;小鼠CDCA2缺失对精子发生中各阶段生精细胞、精子运动参数及雄性生育能力的影响改变无统计学意义。结论基因Cdca2对于小鼠精子发生和雄性生育力的维持可能是非必需的。

关键词：细胞分裂周期相关蛋白2(CDCA2) RNA结合蛋白生殖细胞生育力精子发生

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PARP14在3种抑郁症模型小鼠海马区的表达升高及其与神经炎性反应的关系

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 641-647页

作者：李辰修建波许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探究ADP核糖聚合酶14(PARP14)与抑郁症是否相关及其是否影响小胶质细胞的炎性反应。方法构建抑郁症小鼠模型,通过实时定量PCR和Western blot对比了慢性束缚(CRS)模型、慢性不可预知压力(CUMS)模型和脂多糖(LPS)模型,3种抑郁症模型... 详细信息

目的探究ADP核糖聚合酶14(PARP14)与抑郁症是否相关及其是否影响小胶质细胞的炎性反应。方法构建抑郁症小鼠模型,通过实时定量PCR和Western blot对比了慢性束缚(CRS)模型、慢性不可预知压力(CUMS)模型和脂多糖(LPS)模型,3种抑郁症模型小鼠抑郁症相关脑区中相比于对照组PARP14的蛋白及mRNA表达水平变化。而后在永生化小胶质细胞系BV2中检测其敲低及过表达Parp14后对炎性反应的影响。结果在3种抑郁症模型小鼠海马区均观察到了PARP 4表达水平相较于对照组的升高(P<0.05),且在CRS模型组中观察到PARP14表达水平与组织中炎性反应因子的表达水平相关(P<0.05)。LPS刺激小鼠永生化小胶质细胞系BV2后PARP14表达水平也随之升高(P<0.05);同时过表达PARP14后的BV2细胞响应LPS刺激表达更多促炎性细胞因子(P<0.01),而敲低Parp14或使用PARP14抑制剂处理后表现与其相反(P<0.05)。结论抑郁模型小鼠海马区PARP14表达水平升高,这可能加剧小胶质细胞响应LPS的炎性反应,从而促使神经炎性反应水平升高。

关键词：重度抑郁症 ADP核糖聚合酶14(PARP14) 神经炎性反应小胶质细胞

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RNA结合蛋白KSRP在急性髓系白血病(AML)M5型细胞中的功能

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基础医学与临床 2018年第6期38卷 821-826页

作者：王小爽于姗何金蓉余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨RNA结合蛋白KSRP在不同类型急性髓系白血病(AML)中的表达,并研究KSRP对AML细胞增殖的调控功能。方法利用基因表达汇编(GEO)数据集和癌基因组图谱(TCGA)的数据分析KSRP在AML中的表达水平;在人外周血的单核细胞系(THP-1)中利用慢... 详细信息

目的探讨RNA结合蛋白KSRP在不同类型急性髓系白血病(AML)中的表达,并研究KSRP对AML细胞增殖的调控功能。方法利用基因表达汇编(GEO)数据集和癌基因组图谱(TCGA)的数据分析KSRP在AML中的表达水平;在人外周血的单核细胞系(THP-1)中利用慢病毒传导分别抑制KSRP的内源表达或者过表达miR-129,检测细胞的增殖和凋亡。结果 KSRP在t(15;17)型急性早幼粒细胞白血病中低表达,而在混合谱系白血病(MLL)易位的急性单核细胞白血病或急性粒-单核细胞白血病中高表达。抑制内源KSRP的表达后显著抑制了THP-1细胞的增殖(P<0.01)而促进细胞凋亡(P<0.01)。过表达miR-129后促进THP-1细胞的增殖(P<0.05)。结论KSRP通过促进miR-129的加工调控AML-M5型细胞的增殖。

关键词： KSRP RNA结合蛋白 miR-129 细胞增殖急性髓系白血病

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胶质瘤中PTB调控长非编码RNA选择性剪接的筛选

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基础医学与临床 2018年第6期38卷 787-792页

作者：卫群芳朱丽媛韩为彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的探究在神经胶质瘤发生发展过程中PTB调控选择性剪接的长非编码RNA。方法全转录组芯片分析筛选受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA。提取胶质瘤和正常细胞系及临床病例组织样品和敲低PTB的神经胶质瘤细胞总RNA,实时荧光定量PC... 详细信息

目的探究在神经胶质瘤发生发展过程中PTB调控选择性剪接的长非编码RNA。方法全转录组芯片分析筛选受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA。提取胶质瘤和正常细胞系及临床病例组织样品和敲低PTB的神经胶质瘤细胞总RNA,实时荧光定量PCR验证候选基因不同剪接异构体的表达及比值变化。核质分离实验鉴定长非编码RNA细胞定位。结果筛选出16条受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA,其中linc00882的不同剪接异构体的表达模式受PTB调控所产生的差异最明显。检测到linc00882定位于细胞质。结论神经胶质瘤中PTB蛋白参与长非编码RNA linc00882的选择性剪接。

关键词：选择性剪接长非编码RNA PTB 神经胶质瘤

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