检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2024年第6期44卷 901-904页

作者：于晓丽纪超中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院基础医学国家级实验教学示范中心北京100005 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

医学机能学实验是高等医学院校基础医学实验教学的重要组成部分,而健全科学的实验室管理体制又是保障实验教学顺利进行、全面提高教育教学质量的重要前提。本文结合北京协和医学院“小规模精英教育”办学理念,从北京协和医学院临床医学... 详细信息

医学机能学实验是高等医学院校基础医学实验教学的重要组成部分,而健全科学的实验室管理体制又是保障实验教学顺利进行、全面提高教育教学质量的重要前提。本文结合北京协和医学院“小规模精英教育”办学理念,从北京协和医学院临床医学专业(八年制)教学工作实际出发,围绕医学机能学实验教学改革、机能学实验室的建设等方面,多方位阐述了医学机能学实验教学体系建设的进展,并针对教学实验室高质量建设提出思路,为进一步深化实验教学改革、促进教学实验室的可持续发展提供参考。

关键词：实验教学机能学实验实验室建设

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稳定表达Cas9蛋白质、荧光蛋白质和荧光素酶的胰腺癌细胞株的建立及鉴定

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基础医学与临床 2024年第10期44卷 1419-1427页

作者：代娣杨振丽夏雨佳卞晓翠刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、病理学系北京100005

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞... 详细信息

目的构建Cas9蛋白质、绿色荧光蛋白质、红色荧光蛋白质、荧光素酶-红色荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,并验证荧光素酶的活性和Cas9的基因编辑功能,以便利用荧光素酶和CRISPR/Cas9系统开展胰腺癌的研究。方法在人胰腺癌细胞系(AsPC-1、CFPAC-1、HPAC、BxPC-3、HS 766T、MIA PaCa-2、PANC-1和SW 1990)、小鼠胰腺癌细胞系(Pan02)中,感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9m1.1-Puro,挑选单细胞克隆培养扩增,提取总蛋白质后,Western blot验证Cas9的表达水平;感染荧光蛋白质表达质粒pLv-EF1α-EGFP、pLv-EF1α-mCherry、pLv-EF1α-tdTomato、pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取每种细胞Cas9稳定表达的一个克隆感染pLv-EF1α-Luc2-tdT,荧光显微镜下挑选荧光蛋白质稳定表达的单克隆培养扩增;选取其中2个细胞株感染Lv-EF1a-mCherry,流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞,再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA,细胞扩增后,通过荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况;5只BALB/c Nude小鼠皮下接种MIA PaCa-2-Luc2-tdT细胞(1.0×10^(7)个/只),36 d后活体成像。结果筛选到48个Cas9稳定表达的胰腺癌细胞株(其中表达Cas9m1.1的细胞23株,表达Cas9m1.1-Luc2-tdT的细胞25株),筛选到33个荧光蛋白质稳定表达的胰腺癌细胞株(表达EGFP的细胞8株,表达mCherry的7株,表达Luc2-tdT和tdTomato的各9株)。表达mCherry和Cas9的细胞感染mCherry gRNA后,mCherry被敲除。活体成像显示,表达Luc2-tdT的MIA PaCa-2细胞生物发光和荧光发光均存在。结论成功建立了33个荧光蛋白质稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,其中表达Luc2-tdT的细胞株具有荧光素酶活性;成功建立了48个Cas9稳定表达的人和小鼠胰腺癌细胞株,Cas9具有基因编辑活性,基因编辑活性因原始细胞系不同而存在差异。

关键词： Cas9 荧光素酶胰腺癌活体成像基因编辑

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乳腺癌类器官的培养及鉴定

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1223-1228页

作者：夏雨佳杨振丽代娣刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、... 详细信息

目的建立乳腺癌类器官并长期培养,鉴定其相关分子特征及对相关药物的敏感性。方法乳腺癌患者手术标本,胶原酶消化法,获取细胞进行类器官培养,进行形态学观察,免疫荧光检测ER、PR、HER-2、CK表达,对其中3例类器官进行紫杉醇、多柔比星、顺铂药敏测试。结果共培养建立了44例乳腺癌类器官,均呈实性类球状生长。类器官ER、PR、HER-2、CK表达情况与患者临床样品一致。乳腺癌类器官对化疗药紫杉醇、多柔比星、顺铂具有一定敏感性。结论乳腺癌类器官作为新型体外模型,具有一定异质性,再现体内病生理功能特性。

关键词：乳腺癌类器官药敏实验

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器官芯片——更具前景的体外模型

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1202-1207页

作者：杨振丽夏雨佳刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内... 详细信息

传统的体外模型具有不可避免的局限性,与人体试验相比,在评估药物疗效和不良反应方面存在显著差异。器官芯片技术在生理环境和功能芯片上模拟人体器官,具有高保真的生理或病理生理功能,为药物开发提供了巨大的创新前景。本文主要从体内各系统角度介绍器官芯片的研究进展和应用,同时提出目前器官芯片发展过程中存在的局限性和未来的发展方向。

关键词：器官芯片类器官疾病模型

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稳定敲除Mcart⁃1下调RAW264.7巨噬细胞增殖能力和氧化磷酸化水平

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基础医学与临床 2023年第4期43卷 568-575页

作者：赵永晶仇佳星张迪雅郭泓江王钰铖鞠瑞郭磊中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、药理学系北京100005

目的基于CRISPR/Cas9原理构建Mcart-1稳定敲除的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7,检测其细胞增殖能力和能量代谢水平。方法用Cas9慢病毒和sgRNA慢病毒分两步感染RAW264.7巨噬细胞,并挑选单克隆细胞:qPCR和Western blot检测Cas9表... 详细信息

目的基于CRISPR/Cas9原理构建Mcart-1稳定敲除的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7,检测其细胞增殖能力和能量代谢水平。方法用Cas9慢病毒和sgRNA慢病毒分两步感染RAW264.7巨噬细胞,并挑选单克隆细胞:qPCR和Western blot检测Cas9表达水平和Mcart-1敲除效果;单细胞测序分析突变位点;细胞能量代谢分析仪Seahorse检测细胞耗氧速率(OCR)和能量代谢表型;试剂盒测定细胞内总ATP含量;细胞计数仪计数和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色检测细胞增殖。结果成功构建Mcart-1稳定敲除的RAW264.7细胞株(记为Mcart-1^(-/-)-RAW264.7);该细胞株中Mcart-1发生移码突变;与野生型RAW264.7细胞系(记为RAW264.7)相比,Mcart-1^(-/-)-RAW264.7细胞氧气消耗速率(OCR)下降,胞外酸化速率(ECAR)升高;与RAW264.7细胞相比,Mcart-1^(-/-)-RAW264.7细胞内总ATP含量下降(P<0.05),线粒体ATP产生速率下降(P<0.01),而糖酵解ATP产生速率升高(P<0.01);与RAW264.7细胞相比,Mcart-1^(-/-)-RAW264.7细胞增殖能力下降(P<0.001)。结论稳定敲除Mcart-1后RAW264.7细胞增殖能力和氧化磷酸化水平均下降。该细胞株可作为探索肿瘤微环境细胞功能的重要工具。

关键词： CRISPR/Cas9 巨噬细胞 Mcart-1 代谢表型

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Luc2-tdT标记的小鼠肝癌细胞系的建立及鉴定

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基础医学与临床 2025年第3期45卷 317-322页

作者：郝思嘉杨振丽卞晓翠侯昱宏刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系细胞资源中心北京100005

目的建立小鼠肝癌H22瘤株的细胞系及稳定表达tdTomato红色荧光标记和萤火虫荧光素酶的细胞系(H22-luc2-tdT),建立细胞系来源的移植瘤体内成像模型。方法利用小鼠肝癌H22移植瘤,进行原代培养,建立连续传代的细胞系。检测细胞体外增殖,进... 详细信息

目的建立小鼠肝癌H22瘤株的细胞系及稳定表达tdTomato红色荧光标记和萤火虫荧光素酶的细胞系(H22-luc2-tdT),建立细胞系来源的移植瘤体内成像模型。方法利用小鼠肝癌H22移植瘤,进行原代培养,建立连续传代的细胞系。检测细胞体外增殖,进行染色体分析、体内成瘤监测、体内生长、HE梁色和免疫组化检测、aFP、CK7、CK15等标志物表达,并将移植瘤组取材后进行类器官培养。确认建系成功后,通过慢病毒感染的方式使H22细胞稳定表达红色荧光蛋白和萤光素酶融合蛋白Luc2-tdT,后经流式分选获得的Luc2-tdT阳性细胞群,进行体内、体外荧光成像观察。对所建细胞系进行支原体检测、种属检测。结果连续培养的H22细胞系体外已传代至P50。第22代的细胞在C57小鼠皮下和腹腔移植,成瘤率均为100%。皮下移植瘤HE观察形态与原瘤株一致、CK阳性、AFP阳性,表明其为肝癌来源。染色体众数40~44条染色体、端着丝粒。体外细胞生长d0~d3为潜伏期,d3~d5为指数增殖期,d6出现下降趋势。将P22代的H22细胞转染luc2-tdT质粒,筛选后荧光阳性率100%,命名为H22-luc2-tdT细胞,形态与H22细胞一致,荧光显微镜下观察和体内移植瘤活体观察荧光表达强。H22细胞的移植瘤组织可培养形成类器官。细胞培养上清支原体检测阴性,PCR种属鉴定证明来源于小鼠。结论成功建立了双荧光标记的小鼠肝癌细胞系,便于体外、体内肝癌模型及肝癌转移示踪模型的建立和应用,利用活体成像可全周期观察肿瘤生长及转移情况,还可通过荧光定量进行定量研究。已由国家生物医学实验细胞资源库(http://***)收藏、提供共享。

关键词：小鼠肝癌细胞系荧光标记活体成像类器官

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肿瘤类器官临床前转化研究及应用

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基础医学与临床 2024年第9期44卷 1214-1218页

作者：夏雨佳杨振丽刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

越来越深入的肿瘤机制研究和临床精准治疗对肿瘤模型的建立提出了更高的要求,肿瘤类器官应用越来越广泛。该模型被认为可以再现亲代肿瘤的基因组、转录组、蛋白质组等多组学特征,具有细胞系模型所缺乏的异质性。基于这些特征,肿瘤类器... 详细信息

越来越深入的肿瘤机制研究和临床精准治疗对肿瘤模型的建立提出了更高的要求,肿瘤类器官应用越来越广泛。该模型被认为可以再现亲代肿瘤的基因组、转录组、蛋白质组等多组学特征,具有细胞系模型所缺乏的异质性。基于这些特征,肿瘤类器官逐渐成为一个具有代表性的临床前模型,助力于新的研究成果转化以及患者的精准治疗。本文将从肿瘤类器官的研究及应用的角度总结其最新进展,重点关注当前建立肿瘤类器官方法以及应用中所面临的机遇和挑战。

关键词：肿瘤类器官精准治疗类器官生物样本库

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蛋白质翻译重编程在肿瘤中的研究进展

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基础医学与临床 2024年第12期44卷 1736-1740页

作者：范颖刘洋刘雁勇西藏大学医学院西藏拉萨850000 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院药理学系北京100005

蛋白质翻译重编程是细胞在应对各种刺激时做出的重要代偿性改变,使细胞蛋白质组发生快速、特异性的变化。肿瘤细胞通过内部核糖体进入位点(IRES)、非帽依赖性翻译增强子(CITE)及N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰等机制调控蛋白质翻译重编程,这... 详细信息

蛋白质翻译重编程是细胞在应对各种刺激时做出的重要代偿性改变,使细胞蛋白质组发生快速、特异性的变化。肿瘤细胞通过内部核糖体进入位点(IRES)、非帽依赖性翻译增强子(CITE)及N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰等机制调控蛋白质翻译重编程,这在肿瘤的发生、进展与治疗抵抗过程中发挥重要作用。深入研究蛋白质翻译重编程在肿瘤中的作用,有望发掘新的药物靶点,为肿瘤治疗提供新的方向。

关键词：蛋白质翻译翻译重编程上皮-间质转化肿瘤耐药

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慢性阻塞性肺疾病的基因组学研究进展及应用

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中国医学科学院学报 2022年第4期44卷 668-672页

作者：苏琳凡赵红梅肖毅中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院呼吸与危重症医学科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院病理生理学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是呼吸科的常见病和多发病,环境因素和遗传因素共同参与发病。近年来,随着全基因组关联研究等新方法的应用,研究人员发现了大量与肺功能和COPD相关的基因变异,为COPD的发病机制和潜在治疗靶点提供了新视角。本文... 详细信息

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是呼吸科的常见病和多发病,环境因素和遗传因素共同参与发病。近年来,随着全基因组关联研究等新方法的应用,研究人员发现了大量与肺功能和COPD相关的基因变异,为COPD的发病机制和潜在治疗靶点提供了新视角。本文就目前基因组学在COPD的研究现状及应用进展进行综述。

关键词：慢性阻塞性肺疾病全基因组关联研究易感基因

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用药过程三幕微情境课堂教学设计及其在护理药物学教学中的应用

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基础医学与临床 2023年第12期43卷 1905-1910页

作者：鞠瑞王钰铖朱蕾于晓丽董燕郭磊中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院药理学系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院实验教学中心北京100005 北京协和医学院护理学院北京100144

目的探索用药前、用药时及用药后三幕微情境课堂在护理药物学教学中的成效。方法选取护理本科2020级和2021级完成护理药物学课程的学生作为研究对象,分别设为对照组(用药情境教学)和实验组(用药情境细化的三幕微情境教学),研究所选章节... 详细信息

目的探索用药前、用药时及用药后三幕微情境课堂在护理药物学教学中的成效。方法选取护理本科2020级和2021级完成护理药物学课程的学生作为研究对象,分别设为对照组(用药情境教学)和实验组(用药情境细化的三幕微情境教学),研究所选章节知识内容相同。对两组护理药物学课程成绩和试题回答准确率进行分析;设计调查问卷分析学生在三幕微情境课堂上的学习感受。结果实验组护理药物学成绩显著高于对照组(P<0.001);对于三幕微情境课堂知识相关的闭卷考试试题,实验组答题准确率显著高于对照组(P<0.001);对于未进行教学设计调整的课堂知识相关的闭卷考试试题,两组答题准确率之间没有显著差异;调查问卷显示学生认为三幕细化用药情境对于知识学习记忆和素养培养有帮助。结论相比细化前的情境课堂,用药前中后三幕微情境课堂更合理地串联了知识要点,增加了学生知识掌握程度及职业责任意识。

关键词：护理本科护理药物学教学用药三幕微情境知识串联护理沟通

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