检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2016年第1期33卷 34-37页

作者：刘彦山黄颖之高劲松李闪赵秀丽张学中国医学科学院基础医学研究所一北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院妇产科

目的对一个遗传性乳光牙本质（dentinogenesis imperfecta shieldstype Ⅱ ，DGI-Ⅱ）家系进行DSPP基因的突变分析。方法采集家系成员外周血或胎儿绒毛组织，用酚氯仿法提取基因组DNA。应用聚合酶链反应（polymerasechain reaction，PCR... 详细信息

目的对一个遗传性乳光牙本质（dentinogenesis imperfecta shieldstype Ⅱ ，DGI-Ⅱ）家系进行DSPP基因的突变分析。方法采集家系成员外周血或胎儿绒毛组织，用酚氯仿法提取基因组DNA。应用聚合酶链反应（polymerasechain reaction，PCR）-Sanger测序方法鉴定先证者DSPP基因第2～5外显子及外显子／内含子衔接区序列，并进行突变分析；针对突变位点设计错配引物引入AluI酶切位点，通过限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳方法在该家系正常人及60名无关正常个体中进行致病突变验证；构建含微型DSPP基因的pcDNA3．1基因表达载体，在体外培养细胞中验证突变致病性。结果该家系3例患者和一名胎儿均携带DSPP基因内C．52—1G〉A的杂合突变，突变造成该基因第3外显子5’端剪接点变异；60名对照者和家系正常个体均未携带该突变；微小基因（Minigene）体外表达显示e．52—1G〉A导致DSPP基因转录产物第3外显子的跳跃剪接。结论本研究在一个DGI-Ⅱ家系中发现了DSPP基因内一个新的致病剪接突变（c．52—1G〉A），并在此基础上为先证者提供了产前基因诊断。

关键词：乳光牙 DSPP基因剪接点突变微小基因

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成骨不全症家系C0L1A1／2基因的大片段缺失突变分析

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中华医学遗传学杂志 2016年第4期33卷 431-434页

作者：汪涵赵秀丽任秀智肖继芳张学中国医学科学院基础医学研究所一北京协和医学院基础学院医学遗传学系、医学分子生物学国家重点实验室北京100005 天津市武清区人民医院 301700

目的在成骨不全症（osteogenesisimperfecta，OI）家系中进行COLlAl／e基因内大片段缺失突变的鉴定。方法应用多重连接探针扩增（multiplexligation-dependentprobeamplification，MLPA）方法对46例PCR-测序未见COLIAl／e基因突变的0I患者进行COL1A1／2基因大片段缺失突变检测，进一步应用荧光定量PCR或Gap—PCR-测序法对MLPA方法检测到的缺失突变进行验证。结果通过MLPA分析，在46例0I患者中检测到2例杂合性大片段缺失突变，先证者A为整个COL1A1基因的杂合缺失，先证者B为COL1A2基因第20外显子的杂合缺失；荧光定量PCR结果证实先证者A携带整个COLIAl基因的杂合缺失突变；Gap—PCR、DNA测序和凝胶电泳分析结果证实先证者B存在COLl4e基因内第17～23外显子的杂合缺失，断裂点区域有一个来自于5号染色体、长度637bp的DNA插入片段；先证者B家系成员突变验证显示其母亲为同一突变的杂合子。结论在中国人0I患者中发现了COL1A1和COL1A2基因的大片段缺失突变。本研究结果丰富了中国人群I型胶原相关OI致病基因突变谱，也为患病家系的产前基因诊断奠定了基础。

关键词：成骨不全症 COL1A1基因 COL1A2基因多重连接探针扩增大片段缺失

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应用Affymetrix全基因组芯片检测染色体7q36区域的DNA拷贝数突变

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中华医学遗传学杂志 2009年第3期26卷 336-339页

作者：马芬吴凤霞李宁柳青杨威张学孙森中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学遗传学系McKusick-张孝骞医学遗传中心医学分子生物学国家重点实验室北京100005 辽宁省锦州医学院第一附属医院中国医科大学

目的应用Affymetrix全基因组芯片结合荧光定量PCR（quantitative real-timePCR，qPCR）技术，进行致病性DNA拷贝数变异的精细定位研究。方法以一个定位于染色体7q36的中国人遗传性三节拇指多并指综合征伴随Ⅳ型并指家系中的一例患者为... 详细信息

目的应用Affymetrix全基因组芯片结合荧光定量PCR（quantitative real-timePCR，qPCR）技术，进行致病性DNA拷贝数变异的精细定位研究。方法以一个定位于染色体7q36的中国人遗传性三节拇指多并指综合征伴随Ⅳ型并指家系中的一例患者为研究对象。收集外周血标本，常规提取基因组DNA。应用Affymetrix Genome-Wide Human SNP Array6．0芯片，将基因组DNA纯化，经过酶切、连接、扩增、标记、杂交、染色和扫描等步骤后得到原始数据，应用Affymetrix Genotyping Console3．0软件进行拷贝数分析。在经芯片分析所确定的重复范围内设计引物，采用qPCR方法进行验证，并进一步缩小断端范周、精确重复区域范围。结果将患者重复区域两断端范围由原来的113kb和33kb分别缩小到5．4kb和1．8kb，致病性DNA重复范围由原来的291～437kb精确至379～387kb。结论应用Affymetrix全基因组芯片联合qPCR技术可以实现对DNA拷贝数突变的精确、可靠的检测。

关键词： Affymetrix SNP芯片荧光定量PCR DNA重复

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两个三指节拇指轴前多指家系的ZRS突变分析

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中华医学遗传学杂志 2016年第3期33卷 281-285页

作者：赵熙萌杨威孙淼张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 首都医科大学附属北京儿童医院北京100045 苏州大学附属第一医院胎儿医学研究所 215006

目的明确两个中国汉族具有三指节拇指特征的轴前多指家系的致病突变。方法知情同意下采集家系1的9名家系成员（患者2例）、家系2的14名家系成员（患者7例）的外周血，提取基因组DNA；应用实时定量PCR与PCR-Sanger测序，对SHH基因的调控... 详细信息

目的明确两个中国汉族具有三指节拇指特征的轴前多指家系的致病突变。方法知情同意下采集家系1的9名家系成员（患者2例）、家系2的14名家系成员（患者7例）的外周血，提取基因组DNA；应用实时定量PCR与PCR-Sanger测序，对SHH基因的调控元件“极化活性区调控序列”（zone of polarizing activity regulatory sequence，ZRS）分别进行拷贝数与序列突变检测；应用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测家系1ZRS附近短串联重复序列的基因型，结合Sanger测序发现的点突变，进行单倍型分析。结果定量PCR显示两家系患者在ZRS区域均不存在拷贝数改变。Sanger测序结果显示，家系1的2例患者均存在ZRS406A〉G杂合突变、家系2的7例患者均存在ZRS105C〉G杂合突变，且突变在各自家系中均与多指表型共分离，在200名正常对照中均未检测到上述突变。已有报道ZRS的105C〉G杂合突变可引起典型的三指节拇指轴前多指；而ZRS的406A〉G杂合突变仅见于1个胫骨发育不良伴多指（趾）家系中。单倍型分析及测序结果提示，家系1中第1例出现肢端畸形的患者为ZRS406A〉G杂合突变的体细胞及生殖细胞嵌合体。结论SHH基因调控元件ZRs的406A〉G与105C〉G杂合突变分别为两个中国汉族三指节拇指轴前多指家系的致病突变。

关键词：三指节拇指轴前多指极化活性区调控序列点突变胫骨发育不良伴多指(趾)

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高分辨熔解曲线技术在Wilson病致病基因突变鉴定中的应用

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基础医学与临床 2016年第2期36卷 218-221页

作者：张静刘彦山赵秀丽张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在一个肝豆状核变性(WD)家系中进行致病突变鉴定和产前基因诊断。方法酚-氯仿法提取外周全血或妊娠13周胎儿绒毛组织基因组DNA;利用PCR-Sanger测序技术对先证者ATP7B基因外显子及外显子/内含子衔接区序列进行突变分析;针对先证者携... 详细信息

目的在一个肝豆状核变性(WD)家系中进行致病突变鉴定和产前基因诊断。方法酚-氯仿法提取外周全血或妊娠13周胎儿绒毛组织基因组DNA;利用PCR-Sanger测序技术对先证者ATP7B基因外显子及外显子/内含子衔接区序列进行突变分析;针对先证者携带的突变位点,应用聚合酶链反应(PCR)-高分辨熔解曲线(HRM)方法对先证者家系4名成员进行突变鉴定,并在此基础上为患儿母亲提供产前基因诊断。结果先证者ATP7B基因第8外显子存在纯合致病突变c.2333G>T(p.R778L);该家系5名成员和4名群体正常样本分属于3种不同熔解曲线。HRM分析结果与测序结果一致,即:患儿本人为R778L的纯合子,其父母、姐姐和母亲产前诊断的胎儿均为突变杂合子,4名群体正常对照为纯合野生型。结论在一个WD家系中检测到ATP7B基因热点突变c.2333G>T(p.R778L),并针对该突变建立了一种基于PCR-HRM技术的快速突变鉴定方法,成功为家系提供产前基因诊断。

关键词：肝豆状核变性 ATP7B基因聚合酶链反应高分辨熔解曲线分析产前基因诊断

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基因组学与人类疾病

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遗传 2011年第8期33卷 807-808页

作者：周钢桥张学中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室基因组学与蛋白质组学研究室北京100850 中国医学科学院基础医学研究所&北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室医学遗传学系北京100730

近年来,以高密度基因芯片和高通量测序为核心的基因组学技术迅速发展,已广泛应用到生物医学的各个领域并取得突出进展,使我们对于疾病的分子与遗传学基础的认识达到了一个新的水平。

关键词：基因组学技术人类疾病高密度基因芯片遗传学基础生物医学高通量领域并测序

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应用Ion Torrent PGM测序平台进行遗传病panel测序研究

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国际遗传学杂志 2016年第6期39卷 295-299+305页

作者：周剑柳青刘芳卢超霞司锘王蓉蓉张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室

目的使用Ion AmliSeq多重PCR定制序列捕获系统及Ion Torrent PGM高通量测序平台对散发肌张力障碍患者进行肌张力障碍致病基因变异检测,以优化检测流程,探讨应用靶序列捕获结合高通量测序进行遗传病遗传诊断辅助临床干预的可能性。方法... 详细信息

目的使用Ion AmliSeq多重PCR定制序列捕获系统及Ion Torrent PGM高通量测序平台对散发肌张力障碍患者进行肌张力障碍致病基因变异检测,以优化检测流程,探讨应用靶序列捕获结合高通量测序进行遗传病遗传诊断辅助临床干预的可能性。方法对95例确诊的肌张力障碍患者的外周血白细胞DNA使用Ion AmliSeq多重PCR进行靶序列捕获,Ion Torrent PGM平台进行高通量测序,并对所得结果进行Sanger测序验证。结果本研究使用芯片12张,测序深度为134±44,覆盖度96.12%±0.71%。单张芯片测序周期为6小时(上机测序),单张芯片最高通量可达到900bib以上。在95例肌张力患者中检出罕见变异71个,经Sanger验证准确率为41.04%,假阳性率58.96%。影响测序筛查质量主要原因在于DNA特殊序列如序列中存在同聚物。结论 Ion Torrent PGM高通量测序平台的使用,具有测序通量高,操作简便,速度快,成本低的优点,可以提高基因突变筛查水平,在合理范围内扩增基因筛选数目,可以协助临床对肌张力障碍的鉴别诊断提供指导作用。

关键词：高通量测序 PGM测序平台 panel测序

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四倍体滋养层干细胞的分离培养与鉴定

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基础医学与临床 2021年第7期41卷 975-981页

作者：王海豫肖翼黄粤中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立可在体外培养的小鼠四倍体滋养层干细胞(TTSCs)系,为研究胎盘发育提供新的细胞模型。方法用电融合的方法获得四倍体胚胎并进行体外培养,挑取克隆并传代后获得细胞系。通过中期染色体计数检测染色体数目;RT-qPCR、Western blot... 详细信息

目的建立可在体外培养的小鼠四倍体滋养层干细胞(TTSCs)系,为研究胎盘发育提供新的细胞模型。方法用电融合的方法获得四倍体胚胎并进行体外培养,挑取克隆并传代后获得细胞系。通过中期染色体计数检测染色体数目;RT-qPCR、Western blot、免疫荧光检测标志基因表达;显微注射检测细胞的体内发育潜能。结果建立了可以传代培养并且可在体内发育的TTSCs。分化条件下,TTSCs分化基因的表达量与二倍体滋养层干细胞(TSCs)存在差异(P<0.001)。结论可传代的TTSCs系可以在体外建立,但其维持自我更新及分化的机制与二倍体TSCs有所不同。

关键词：四倍体滋养层干细胞胚胎发育胎盘发育分化

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通过定向内胚层的高效分化提高多能干细胞体外生成肝细胞样细胞的效率

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基础医学与临床 2023年第7期43卷 1045-1052页

作者：闫煜聪杨淑春贾玉艳黄粤中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的优化多能干细胞(PSCs)体外定向分化为肝细胞样细胞(HLCs)的方法,提高得到HLCs的效率。方法根据体内肝细胞发育的规律,优化多能干细胞逐级诱导分化成HLCs过程中使用的细胞因子,制定出更高效率的肝细胞定向分化体系,并在人胚胎干细胞(... 详细信息

目的优化多能干细胞(PSCs)体外定向分化为肝细胞样细胞(HLCs)的方法,提高得到HLCs的效率。方法根据体内肝细胞发育的规律,优化多能干细胞逐级诱导分化成HLCs过程中使用的细胞因子,制定出更高效率的肝细胞定向分化体系,并在人胚胎干细胞(hESCs)系H9上进行分化实验。通过对分化不同阶段的细胞进行形态学观察、标志基因表达水平的RT-qPCR检测以及流式细胞术测量分析,综合评估得到HLCs的效率。结果在hESCs向定向内胚层(DE)分化阶段的培养基中同时添加细胞因子激活素A、骨形态发生蛋白4(BMP4)和成纤维细胞因子2(FGF2),能显著提高该阶段标志基因的表达量,荧光示踪和流式分选也表明最终得到的HLCs的比例明显增加。结论DE的高效分化能提高PSCs向HLCs的分化效率。

关键词：分化多能干细胞定向内胚层肝细胞样细胞

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2C型肢带型肌营养不良相关SGCG基因致病新突变鉴定

2C型肢带型肌营养不良相关SGCG基因致病新突变鉴定

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中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：肖继芳赵秀丽刘雅萍张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室

肢带型肌营养不良症(limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)为一类常染色体遗传性肌营养不良。其遗传模式和临床表现具有高度异质性。遗传模式有常染色体显性和隐性之分,显性遗传的LGMD用LGMD1表示,隐性遗传的LGMD则用LGMD2表示。根据... 详细信息

肢带型肌营养不良症(limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)为一类常染色体遗传性肌营养不良。其遗传模式和临床表现具有高度异质性。遗传模式有常染色体显性和隐性之分,显性遗传的LGMD用LGMD1表示,隐性遗传的LGMD则用LGMD2表示。根据临床表现LGMD1和LGMD2又可分为若干亚型,其中LGMD2C(limb-girdle muscular dystrophytype 2C;MIM 253700)为重型的LGMD,其致病基因为gamma-sarcoglycan gene(SGCG)。SGCG定位于13q12,含有7个外显子,编码γ肌聚糖(γ-sarcoglycan,γ-SG),为肌聚糖复合物的亚单位之一,是构成抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物的重要成分。本研究室收集LGMD-2C型患儿1例,采集患儿及其父母和外婆的外周血(5mL/人份),常规蛋白酶K-SDS-酚/氯仿法提取基因组DNA。针对SGCG基因的7个外显子、5′UTR、3′UTR及外显子-内含子交界处设计引物。通过PCR扩增患儿SGCG基因并测序;将SGCG基因测序结果中的SNP作为遗传标记(rs4769246和rs17078517),对家系成员进行单倍型分析,确定致病突变的来源;并通过群体样本对相关突变进行验证。SGCG基因测序结果表明,患儿为SGCG基因外显子3内点突变c.320C>T的纯合子。该突变导致SGCG编码蛋白第107为氨基酸由丝氨酸变为亮氨酸(p.S107L)。对HGMD数据库检索,确认该突变为新突变。对患者父母及外婆相应位点进行测序,发现患儿父亲为该突变的杂合子,在患儿母亲,外婆及群体样本均未发现该突变。SNP单倍型分析显示患儿致病基因来源于其父,并为该突变的单亲二体。总之,我们在SGCG基因中发现了一个LGMD-2C的致病新突变,丰富了LGMD-2C致病突变谱;并通过SNP单倍型分析明确患儿致病突变来源,为该家系的遗传咨询和产前基因诊断奠定了基础。

关键词：肢带型肌营养不良症 LGMD-2C,SGCG,基因突变,SNP,单亲二体

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