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腺相关病毒介导基因组来源的基因转移与整合

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生物化学与生物物理进展 2000年第2期27卷 189-192页

作者：李斌刘德培王晶董文吉郭志晨夏薇梁植权中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

构建一个带 β 珠蛋白基因组序列的腺相关病毒载体AV5 3HS2Δβ2Neo .经包装成重组腺相关病毒后 ,转导红系细胞 .DNA印迹证实包含红系增强子、β 珠蛋白基因和筛选标志基因的前病毒基因组完整整合于红系细胞基因组中 .

关键词：腺相关病毒载体基因组基因转移整因整合

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阿司匹林对内皮细胞与中性粒细胞及单核细胞粘附的影响

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药学学报 2000年第5期35卷 312-325页

作者：林勇高存记孙颂三汪钟首都医科大学药理教研室北京100054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的　研究阿司匹林对TNFα 诱导的内皮细胞与中性粒细胞及单核细胞粘附的抑制作用及作用机制。方法　用髓过氧化酶法测定白细胞与内皮细胞的粘附 ,ELISA法测定内皮细胞粘附分子的表达。结果　阿司匹林(6 0 0～ 90 0mg·L-1)可抑制... 详细信息

目的　研究阿司匹林对TNFα 诱导的内皮细胞与中性粒细胞及单核细胞粘附的抑制作用及作用机制。方法　用髓过氧化酶法测定白细胞与内皮细胞的粘附 ,ELISA法测定内皮细胞粘附分子的表达。结果　阿司匹林(6 0 0～ 90 0mg·L-1)可抑制中性粒细胞及单核细胞与TNFα激活 6h的内皮细胞粘附 ;而TNFα 激活内皮细胞后 2 4h ,阿司匹林对单核细胞与其粘附的抑制作用增强但却不抑制中性粒细胞与其粘附。结论　阿司匹林通过抑制E selectin的表达而降低TNFα诱导的内皮细胞与中性粒细胞的粘附 ,并通过抑制VCAM 1的表达降低TNFα诱导的内皮细胞与单核细胞的粘附。

关键词：阿司匹林内皮细胞中性粒细胞单核细胞

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小鼠红细胞分化-去核因子的发育期相关性表达与鉴定

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中国科学（C辑） 2001年第1期31卷 52-58页

作者：章正琰薛社普中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院细胞生物室

以质粒pBS-SK-MEDDF上的小鼠 MEDDF cDNA片段为模板, 通过PCR方法删除该片段的非编码序列, 将编码序列克隆到pGEM-T-Easy质粒中, 经DNA序列测定后, 证明其克隆序列正确, 再将MEDDF编码序列定向克隆到表达载体pET-30α(+)的BamHⅠ和Hind... 详细信息

以质粒pBS-SK-MEDDF上的小鼠 MEDDF cDNA片段为模板, 通过PCR方法删除该片段的非编码序列, 将编码序列克隆到pGEM-T-Easy质粒中, 经DNA序列测定后, 证明其克隆序列正确, 再将MEDDF编码序列定向克隆到表达载体pET-30α(+)的BamHⅠ和HindⅢ位点之间, 构建了原核表达载体, 在获高效表达菌株中, 特异表达蛋白质的量占细菌总蛋白的40%. 以纯化的该蛋白质为抗原, 免疫新西兰纯种大耳兔, 获得高效价的抗血清. 经免疫细胞化学验证, MEDDF在红细胞的表达具有发育阶段特异性, 推测与小鼠红细胞终末分化的启动及细胞核浓缩相关. 另外, MEDDF还在小鼠骨髓中的粒细胞系及巨核细胞系表达, 说明该蛋白质与小鼠骨髓髓系细胞的分化有渊源关系.

关键词：发育期红细胞分化相关因子原核表达 MEDDF 造血因子发育期

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一个异染性脑白质营养不良家系ARSA基因突变分析

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中华医学遗传学杂志 2006年第4期23卷 378-382页

作者：王静敏姜玉武施惠平张为民潘虹包新华吴晔秦炯吴希如北京大学第一医院儿科 100034 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传室

目的分析并确定一个异染性脑白质营养不良(metachromaticleukodystrophy,MLD)家系芳基硫酸酯酶A(arylsulftaseA,ARSA)的基因(ARSA)突变及遗传特征。方法收集先证者及其家系成员临床资料,采用聚合酶链反应和DNA直接测序方法进行ARSA突变... 详细信息

目的分析并确定一个异染性脑白质营养不良(metachromaticleukodystrophy,MLD)家系芳基硫酸酯酶A(arylsulftaseA,ARSA)的基因(ARSA)突变及遗传特征。方法收集先证者及其家系成员临床资料,采用聚合酶链反应和DNA直接测序方法进行ARSA突变检测,确定基因突变的位点,分析基因型与表型的关系。结果该家系先证者的ARSA基因同时存在第2外显子G251A(R84Q)与G296T(G99V)两个杂合突变,具有相似表型的胞弟与先证者的测序结果完全一致,先证者之父母分别携带ARSA基因第2外显子G251A(R84Q)与G296T(G99V)的杂合突变,表型正常的先证者之姐未发现这些突变。结论该家系中两位患儿均为ARSA基因复合杂合突变致病,其G251A(R84Q)突变来自父亲,G296T(G99V)突变来自母亲,其父母均为表型正常的基因突变携带者。

关键词：异染性脑白质营养不良芳基硫酸酯酶A ARSA突变

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外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠过继免疫治疗中的作用

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中华外科杂志 2005年第11期43卷 726-729页

作者：戴梦华何维赵玉沛许春萍中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科 100730 中国医学科学院基础医学研究所免疫教研室

目的探讨外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠种植瘤体内过继免疫治疗中的作用。方法用胰腺癌细胞株Cap1注入BALB/c裸鼠皮下建立胰腺癌裸鼠种植瘤模型。裸鼠随机分为3组,每组10只。A组为γδT细胞治疗,B组为αβT细胞治疗,C组给以无血清RPMI164... 详细信息

目的探讨外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠种植瘤体内过继免疫治疗中的作用。方法用胰腺癌细胞株Cap1注入BALB/c裸鼠皮下建立胰腺癌裸鼠种植瘤模型。裸鼠随机分为3组,每组10只。A组为γδT细胞治疗,B组为αβT细胞治疗,C组给以无血清RPMI1640作为对照。从胰腺癌患者外周血中提取淋巴细胞,体外特异性扩增γδT细胞后注入裸鼠腹腔内,观察种植瘤裸鼠生存时间、肿瘤体积和肿瘤病灶坏死程度。结果A组成瘤率9/10,B、C组均为8/10(P>0.05)。当肿瘤生长到16、37和52d时,A组与B、C组肿瘤体积差别具有统计学意义(P值分别为0.019和0.022)。120d时C组8只种植瘤裸鼠全部死亡,B组有5只死亡,A组有3只死亡,3组之间死亡率差异具有统计学意义(P=0.023);KruskalWallis检验生存时间存在统计学差异(P=0.036)。γδT细胞治疗组中有4只肿瘤病灶出现坏死脱落,B和C组中各有1只肿瘤出现坏死;肿瘤生长到1个月后,B组和C组中裸鼠发生头部、眼眶、尾部、会阴部和对侧腹股沟区转移,A组仅1例发生对侧腹股沟部转移;A组中有1例裸鼠种植瘤脱落消失,而B组和C组均无肿瘤脱落、坏死消失发生。结论外周血γδT细胞对胰腺癌裸鼠种植瘤具有显著的抑瘤作用。

关键词： γδT细胞过继免疫治疗外周血 Kruskal-Wallis检验 BALB/c裸鼠胰腺癌细胞株细胞治疗生存时间肿瘤病灶肿瘤体积肿瘤生长种植瘤胰腺癌患者统计学差异淋巴细胞腹股沟区腹股沟部抑瘤作用 C组 B组坏死瘤体内

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强啡肽A（1－17）对大鼠脊髓组织钙调蛋白含量和磷酸二酯酶活性的影响

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中国药理学通报 1995年第6期11卷 455-459页

作者：张志媛李富春强文安刘捷王艳红刘景生中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院药理室成都华西医科大学药理系

观察强啡肽Ａ（１－１７）经大鼠蛛网膜下腔注射后对胞内Ｃａ２＋受体钙调蛋白（ＣａＭ）含量及其依赖于Ｃａ２＋／ＣａＭ的磷酸二酯酶（ＰＤＥ）活性的影响。结果表明：强啡肽Ａ（１－１７）１０、２０ｎｍｏｌ给药１０ｍｉｎ可使脊髓... 详细信息

观察强啡肽Ａ（１－１７）经大鼠蛛网膜下腔注射后对胞内Ｃａ２＋受体钙调蛋白（ＣａＭ）含量及其依赖于Ｃａ２＋／ＣａＭ的磷酸二酯酶（ＰＤＥ）活性的影响。结果表明：强啡肽Ａ（１－１７）１０、２０ｎｍｏｌ给药１０ｍｉｎ可使脊髓组织ＣａＭ含量和ＰＤＥ活性明显下降，呈量效依赖关系，２ｈ后均有不同程度的恢复。选择性ｋ型阿片受体拮抗剂ｎｏｒ－ＢＮＩ３０ｎｍｏｌ、兴奋性氨基酸ＮＭＤＡ受体特异性拮抗剂ＡＰＶ１０ｎｍｏｌ可显著对抗强啡肽Ａ（１－１７）２０ｎｍｏｌ降低脊髓组织ＣａＭ含量的作用并完全阻断强啡肽Ａ（１－１７）对ＰＤＥ活性的抑制；Ｌ型Ｃａ２＋通道阻断剂异搏定１００ｎｍｏｌ亦可部分阻断强啡肽Ａ（１－１７）２０ｎｍｏｌ对脊髓组织ＣａＭ含量和ＰＤＥ活性的影响。

关键词：强非肽A 脊髓组织钙调蛋白磷酸二酯酶大鼠

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医学发展的未来:从基因组学到整合医学

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中华医学杂志 2007年第27期87卷 1873-1875页

作者：叶建伟张勇徐苓朱大海中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院协和医院妇产科北京100005

综观20世纪生命科学发展，从宏观向微观、由表型到机制的探求是其重要特征。以还原论为基础的经典结构生物学、分子生物学与细胞生物学的研究极大地增进了人们对生命本质的理解。人类基因组计划（HGP）完成后，生命科学研究进入到“功... 详细信息

综观20世纪生命科学发展，从宏观向微观、由表型到机制的探求是其重要特征。以还原论为基础的经典结构生物学、分子生物学与细胞生物学的研究极大地增进了人们对生命本质的理解。人类基因组计划（HGP）完成后，生命科学研究进入到“功能基因组学”研究时代，转录组学、蛋白质组学、代谢组学开始迅速发展，生命科学的研究方法不再局限于以还原论为指导的微观拆分，

关键词：功能基因组学整合医学医学发展人类基因组计划生命科学结构生物学细胞生物学分子生物学

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一个新的锌指蛋白基因ZNF333 cDNA的分离及表达谱分析

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基础医学与临床 2002年第3期22卷 232-235页

作者：田勇赵红珊陈冀榛刘雅萍李明月杨涛罗会元黄尚志中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室北京100005

本研究通过生物信息学和分子生物学相结合的方法成功克隆了一个新的锌指蛋白基因ZNF333cDNA。ZNF333基因包含 14个外显子 ,编码 6 6 5个氨基酸。蛋白质N端包含 2个保守的KRAB A盒 ,2个多态的KRAB B盒 ,而C端包含 10个重复的C2 H2 型锌... 详细信息

本研究通过生物信息学和分子生物学相结合的方法成功克隆了一个新的锌指蛋白基因ZNF333cDNA。ZNF333基因包含 14个外显子 ,编码 6 6 5个氨基酸。蛋白质N端包含 2个保守的KRAB A盒 ,2个多态的KRAB B盒 ,而C端包含 10个重复的C2 H2 型锌指基序。ZNF333的表达在心脏组织中最高 ,在其他组织中也可检测到表达。同时还发现该基因存在选择性剪切形式。通过与人类基因组框架图的比较将ZNF333定位在 19p13 1。

关键词：锌指蛋白 ZNF333 cDNA 分离表达谱分析

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红细胞分化相关蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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解剖学报 1997年第2期28卷 187-192页

作者：王鑫陈实平薛社普中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室

应用杂交瘤技术和电泳迁移超滞留技术筛选和制备红细胞分化相关蛋白单克隆抗体，以阐明此类蛋白的生物学功能。用杂交瘤技术制备了５８０株针对终末分化期红细胞，包括人胚肝中、晚幼红细胞和氯高铁血红素（ｈｅｍｉｎ）诱导分化的人红... 详细信息

应用杂交瘤技术和电泳迁移超滞留技术筛选和制备红细胞分化相关蛋白单克隆抗体，以阐明此类蛋白的生物学功能。用杂交瘤技术制备了５８０株针对终末分化期红细胞，包括人胚肝中、晚幼红细胞和氯高铁血红素（ｈｅｍｉｎ）诱导分化的人红白血病（Ｋ５６２）细胞核蛋白的单克隆抗体。根据单抗以及核蛋白与ＨＳ２ＤＮＡ序列结合形成单抗－蛋白－ＨＳ２复合物的电泳迁移超滞留实验（ｓｕｐｅｒｓｈｉｆｔｅｘｐｅｒｉ－ｍｅｎｔ），从上述单抗中筛选出４种针对ＨＳ２结合蛋白的单抗，并用它们分别与ｈｅｍｉｎ诱导前、后的Ｋ５６２细胞核蛋白、ＨＳ２作同样的超滞留实验。发现这４种单抗对应的蛋白组分在分化前后的细胞中存在差异，利用差异筛选原理从诱导的ＨＳ２－蛋白复合物中筛选出特异于两种分化相关蛋白的单抗ａ和ｂ。Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹分析进一步证明，与单抗ａ和ｂ对应的ＨＳ２结合蛋白为红细胞分化相关蛋白，其分子量分别为７５ｋＤ和２２ｋＤ。

关键词： HS2结合蛋白红细胞分化单克隆抗体制备鉴定

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非编码的mRNA

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生物化学与生物物理进展 1998年第5期25卷 387-389页

作者：罗文琴袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

非编码的ｍＲＮＡ是近年发现的一类不含典型ＯＲＦ的ｍＲＮＡ．目前已发现或克隆的这类基因主要有：Ｈ１９基因，ＸＩＳＴ基因，ＸＬＳＩＲＴ基因，Ｈｉｓ１基因，ｂｉｃ基因，ｒｏｘ１和ｒｏｘ２基因等．它们与胚胎发育，肿瘤发生及... 详细信息

非编码的ｍＲＮＡ是近年发现的一类不含典型ＯＲＦ的ｍＲＮＡ．目前已发现或克隆的这类基因主要有：Ｈ１９基因，ＸＩＳＴ基因，ＸＬＳＩＲＴ基因，Ｈｉｓ１基因，ｂｉｃ基因，ｒｏｘ１和ｒｏｘ２基因等．它们与胚胎发育，肿瘤发生及Ｘ染色体失活密切相关．

关键词：非编码 mRNA H19基因 XIST基因 His-1基因

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