检索结果-内蒙古大学图书馆

利用PCR构建多拷贝HIV-1 TAR序列的串联体

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基础医学与临床 2001年第1期21卷 85-87页

作者：阴彬白龙川袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

建立“自身引物—模板”PCR方法 ,并应用此方法成功地扩增了多拷贝HIV 1TAR片段的同向串联体。此方法简便 ,省力 ,可用于多拷贝基因探针、多拷贝反义基因片段、多拷贝抗原表位的扩增和克隆。

关键词：自身引物-模板串联板聚合梅链反应 HIV-1TAR 多拷贝基因探针

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Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡

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中国免疫学杂志 2005年第1期21卷 17-21页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK... 详细信息

目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK、TJK和T3JK细胞 ,诱导细胞凋亡 ,用MTS比色法检测细胞死亡率 ,用Westernblot检测Bid的表达和活化。用脂质体的方法转染细胞。结果 :CD3ε特异的单克隆抗体和 5 FU分别单独处理TJK细胞 ,都能诱导其凋亡并伴随Bid的活化 ,二者联合使用能显著增加TJK细胞凋亡和Bid的活化。Bcl 2过表达可明显降低TJK细胞对 5 FU的敏感性。结论 :Bcl 2家族成员参与CD3ε和 5 FU诱导的T淋巴细胞凋亡的调节 ,Bcl 2过表达能显著抑制T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。

关键词： CD3ε 5-FU Bid Bcl-2 细胞凋亡

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氯化钠密度梯度离心法制备用于显微注射的外源DNA片段

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遗传 2003年第5期25卷 587-590页

作者：刘立仁赵华路张俊武中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

DNA显微注射是生产转基因动物最可靠和最常使用的一种方法,外源DNA的纯度对显微注射的成功起着至关重要的作用。本文介绍用氯化钠密度梯度离心的方法制备用于显微注射的外源DNA片段。与传统的琼脂糖凝胶回收的方法相比较,用此方法制备... 详细信息

DNA显微注射是生产转基因动物最可靠和最常使用的一种方法,外源DNA的纯度对显微注射的成功起着至关重要的作用。本文介绍用氯化钠密度梯度离心的方法制备用于显微注射的外源DNA片段。与传统的琼脂糖凝胶回收的方法相比较,用此方法制备的外源DNA片段对小鼠受精卵进行显微注射后,受卵体母鼠的胚胎存活率,以及子代小鼠的外源基因整合率均有明显的提高。这一方法可为进一步提高转基因动物的成功率,提供方法学上的参考。

关键词：显微注射氯化钠密度梯度离心胚胎存活率外源基因整合率

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人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗

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解剖学报 2004年第3期35卷 282-286页

作者：孟雁苏牧中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗效果。　方法　将构建的 7.1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入人Wilson病动物模型LEC(long EvansCinnamon)大鼠受精卵 ,建立转基因功能... 详细信息

目的　探讨人ATP7B基因对Wilson病动物模型LEC大鼠暴发性肝炎的治疗效果。　方法　将构建的 7.1kb含有鸡 β肌动蛋白启动子的人正常ATP7BcDNA ,经显微注射法导入人Wilson病动物模型LEC(long EvansCinnamon)大鼠受精卵 ,建立转基因功能恢复大鼠模型。以Westernbolt检测人ATP7B在转基因大鼠肝内的表达 ,用同窝无转基因大鼠及正常野生型LEA大鼠作对照 ,对 6～ 16周龄的转基因大鼠的血清AST、ALT和总胆红素水平进行连续测定 ,同时取 13周龄转基因大鼠的肝组织进行病理学和组织化学分析。　结果　人ATP7B基因在转基因大鼠的肝组织中获得正确和完整的表达 :12周龄前后 ,与同窝无转基因大鼠相比 ,转基因大鼠的血清AST、ALT和总胆红素水平明显降低 ,肝组织的炎性病变显著减轻 ,肝细胞内铜的蓄积减少 ;至 16周龄 ,转基因大鼠的临床表型未见异常 ,存活率达 10 0 %。说明人ATP7B的导入 ,成功地抑制了Wilson病动物模型LEC大鼠的暴发性肝炎的发生。结论　Wilson病肝炎的发生与ATP7B基因功能缺陷引起的铜蓄积有直接关系。基因转移有可能是一种有效的治疗Wilson病的方法。

关键词：人ATP7B基因基因治疗暴发性肝炎 LEC大鼠

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全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

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癌症 2002年第5期21卷 473-479页

作者：张雪峰任祖渊方福德左瑾苏长保王任直马文斌中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科北京100730 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

背景与目的:细胞间缝隙连接通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplixvirusthymidinekinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinoticacid,ATRA)可能通过上调胶质瘤细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法:分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果:经3种浓度的ATRA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/LATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可以明显增强旁观者效应。

关键词：全反式维甲酸单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷胶质瘤基因治疗

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一个新的人类硫氧化还原蛋白基因的克隆

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科学通报 1999年第12期44卷 1307-1310页

作者：周彦潘美辉袁建刚杜光伟强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

根据不同发育阶段 ( 1 3,33周 )的人胎脑组织mRNA差异显示分析 (又称DDRT PCR)所得到的具有差异表达的EST的序列 ,设计引物筛选点阵排列的人胎脑cDNA文库 ,得到一个新的全长cDNA克隆 .这个克隆全长 1 2 0 8bp ,包含一个 889bp的开放阅读... 详细信息

根据不同发育阶段 ( 1 3,33周 )的人胎脑组织mRNA差异显示分析 (又称DDRT PCR)所得到的具有差异表达的EST的序列 ,设计引物筛选点阵排列的人胎脑cDNA文库 ,得到一个新的全长cDNA克隆 .这个克隆全长 1 2 0 8bp ,包含一个 889bp的开放阅读框 ,一个 1 32bp的 5′非翻译序列和一个 2 0 9bp的 3′非翻译序列以及典型的polyA加尾信号 .其推断的氨基酸序列与人硫氧化还原蛋白同源 ,而且含有硫氧化还原蛋白的保守的活性位点序列 .将它命名为人的类硫氧化还原蛋白基因 (humanthioredoxinlikegene ,hTRXL) .

关键词：差异显示硫氧化还原蛋白胎脑基因克隆

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人突变载脂蛋白E(apoE4,apoE7)转基因小鼠模型

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中国科学（C辑） 2001年第1期31卷 1-6页

作者：孙明增琦祖和中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学室医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为揭示人突变apoE基因表达在整体引起的异常反应并得到人类相关疾病的小鼠模型，用显微注射法制备了人apoE4与apoE7转基因小鼠, 用Southern印迹杂交及ELISA证明人apoE基因在首建鼠及其子代体内整合与表达良好, 具有遗传稳定性. 血清脂... 详细信息

为揭示人突变apoE基因表达在整体引起的异常反应并得到人类相关疾病的小鼠模型，用显微注射法制备了人apoE4与apoE7转基因小鼠, 用Southern印迹杂交及ELISA证明人apoE基因在首建鼠及其子代体内整合与表达良好, 具有遗传稳定性. 血清脂质与行为测定表明, 人apoE表达使小鼠患高脂血症并出现大脑学习与记忆功能衰退和寿命缩短, 高脂食物对正常鼠与转基鼠均可诱发高血脂, 但机制不同. 同时还证明, 氨基端与羧基端突变的apoE具有相同的致病作用.

关键词：转基因鼠人APOE7/E4 高脂血症学习记忆寿命载脂蛋白E

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FMR1基因在人胚胎组织中的选择剪接表达

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中国医学科学院学报 1997年第4期19卷 242-246页

作者：丁剑涛黄涛李兰英范钰沈岩吴冠芸中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 天津医科大学内分泌研究所

本实验分析了6月龄胚胎心、肝、肾、脾4种组织中FMR1基因的选择剪接表达。在所分析的胚胎组织中，FMR1mRNA主要异构体与该胚胎大脑皮层的主要异构体相同，与成人大脑皮层的主要异构体完全不同。这一差异提示FMR1基因的选择剪接表达存在... 详细信息

本实验分析了6月龄胚胎心、肝、肾、脾4种组织中FMR1基因的选择剪接表达。在所分析的胚胎组织中，FMR1mRNA主要异构体与该胚胎大脑皮层的主要异构体相同，与成人大脑皮层的主要异构体完全不同。这一差异提示FMR1基因的选择剪接表达存在发育转换。FMR1基因的选择剪接表达在胚胎和成人组织中的主要差别表现在外显子12和外显子17编码多肽的去留上，对这两段多肽功能的研究将具有重要意义。

关键词： FMR1基因选择剪接脆性X综合征

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皮下移植心钠素基因表达细胞胶囊对高血压大鼠的降血压效应

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中华医学杂志 2002年第16期82卷 1086-1089页

作者：李涛梁红雁卢果史瑞文卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所中国医学科学院中国协和医科大学

目的　研究微孔胶囊介导的心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。方法　借助于逆转录病毒载体及其包装细胞系的作用 ,将人心钠素基因的逆转录病毒表达重组体和未携带目的基因的逆转录病毒空载体pLNCX分... 详细信息

目的　研究微孔胶囊介导的心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。方法　借助于逆转录病毒载体及其包装细胞系的作用 ,将人心钠素基因的逆转录病毒表达重组体和未携带目的基因的逆转录病毒空载体pLNCX分别导入SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中 ,制备可从孔中排出心钠素多肽的微孔胶囊 ,并将表达和不表达人心钠素的新生鼠皮肤成纤维细胞分别装入不同的胶囊中 ,封闭后分别植于实验组和对照组幼龄SHR(各 1 0只 )的皮下。移植后每周测定大鼠血浆心钠素水平、血压、尿量、尿液钾、钠浓度和体重 ,连续 7周。结果　在逆转录病毒载体的介导下 ,人心钠素基因既可在逆转录病毒载体的包装细胞系中表达 [(5 84± 0 0 7)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ] ,也可在SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中表达 [(1 3 37± 2 36)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ]。皮下移植胶囊后第 1周 ,实验组大鼠血浆中的心钠素浓度 (1 31pg/ml± 8pg/ml)明显高于对照组 (1 0 4pg/ml± 7pg/ml,t=8 62 ,P <0 0 1 )。 7周观察期间 ,两组大鼠的血压均随个体发育而逐渐升高 ,但实验组血压[(1 2 9± 9)～ (1 69± 9)mmHg]却始终明显低于对照组 [(1 4 5± 1 0 )～ (1 81± 9)mmHg ,P <0 0 5～0 0 1 ) ] ,其中第

关键词：皮下移植心钠素基因表达细胞降血压效应高血压心钠素基因治疗微孔胶囊

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嗜水气单胞菌hec毒素溶血试验诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症

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中华血液学杂志 2000年第10期21卷 517-520页

作者：刘海丽许彩民吕照江陆承平潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院南京农业大学

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素... 详细信息

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素。粗提毒素作用于PNH和其他贫血患者及正常人的红细胞 ,采用 96孔板在波长 6 30nm酶标仪比色 ;同时用CD59单抗和FITC标记的羊抗鼠IgG标记红细胞 ,以流式细胞仪分析毒素作用前后CD59标记率。结果　对 15例PNH患者、15名正常人、15例非PNH贫血患者的红细胞 ,进行hec毒素试验 ,发现毒素在 0 .12 5g/L、37℃作用 2 0min后 ,正常人和非PNH贫血患者的红细胞完全溶解 ,而PNH患者存留红细胞的百分率与CD59标记率成反比。毒素作用前后流式细胞仪检测结果表明 ,毒素可以特异地作用于CD59阳性细胞。结论　PNH患者的红细胞比其他非PNH贫血患者及正常人的红细胞有明显的抗毒素溶破作用 ,且毒素作用后存留细胞的百分数反映CD59标记率 ,故可作为PNH诊断的敏感、特异、简便可行的新诊断方法。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿嗜水气单胞菌 hec毒素

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