检索结果-内蒙古大学图书馆

实验生物学报 1999年第4期32卷 335-347页

作者：臧梦维汪青沈琦刘景生彭学贤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国科学院微生物研究所北京100080

本文用重组iNOS基因真核表达载体转染NG108-15神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交细胞株,获得G418抗性克隆。在稳定表达iNOS基因2~#克隆中,胞浆相酶活性增加,伴有NO_2^-含量和胞内cGMP水平增高,提示iNOS基因表达参与NO-cGMP信号转导通路,且可... 详细信息

本文用重组iNOS基因真核表达载体转染NG108-15神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交细胞株,获得G418抗性克隆。在稳定表达iNOS基因2~#克隆中,胞浆相酶活性增加,伴有NO_2^-含量和胞内cGMP水平增高,提示iNOS基因表达参与NO-cGMP信号转导通路,且可被L-NNA和MB所阻断。蛋白表达产物的亚细胞定位分析显示功能性iNOS主要位于细胞胞浆中。对转染细胞做外源基因整合、转录和翻译水平鉴定,证实均有较高水平iNOS mR-NA转录和特异性蛋白表达,成功地建立了稳定表达iNOS基因的工程细胞。

关键词： iNOS NG108-15 基因表达基因转移抑制剂

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HLA-DRB1及HLA-DQA1单倍型与乙型肝炎病毒感染结局的关联研究

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中华医学遗传学杂志 2006年第4期23卷 427-430页

作者：卢亮平李兴旺刘英孙国常陈志海朱席琳胡全有李辉中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院流行病学与卫生统计学系北京100005 北京地坛医院内科协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室北京顺义区医院检验科

目的探讨中国北方汉族人群HLA-DRB1、DQA1单倍型与乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染不同结局的关系。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(sequencespecificprimerspolymerasechainreaction,PCR-SSP)技术检测HLA-DRB1、DQA1等位基因,并比较207例慢性乙型肝炎患者,212名无症状HBV慢性携带者(HBV携带者),148例自限性HBV感染者的单倍型频率。结果自限性HBV感染组单倍型DRB1*04-DQA1*0301的频率为10.03%,显著高于慢性乙肝组的3.66%(P=0.0005);DRB1*15/*16-DQA1*0102的频率为6.80%,显著高于慢性乙肝组的1.94%(P=0.0012)和无症状HBV慢性携带者组的1.65%(P=0.004);DRB1*04-DQA1*0302单倍型在慢性乙型肝炎组的频率为3.10%,明显高于自限性HBV感染组的0.39%(P=0.0077)。结论HLA-DRB1、DQA1单倍型与个体感染HBV后的不同结局存在显著关联。

关键词：乙型肝炎人类白细胞抗原-DRB1 人类白细胞抗原-DQA1 单倍型

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应用mRNA差异显示技术研究精子发生中阶段特异性基因表达

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基础医学与临床 2000年第3期20卷 38-42页

作者：赵明刘辉贤刘德瑜缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家计划生育委员会科研所

为进行精子发生过程中具有阶段特异性表达特征的基因研究，本文应用mRNA差异显示与曲细精管透光分期技术相结合的方法，对大鼠IX～XII期和XIII～Ⅰ期曲细精管的基因表达指纹图谱进行了比较。通过27组不同引物组合的差异PCR反应，共得到5... 详细信息

为进行精子发生过程中具有阶段特异性表达特征的基因研究，本文应用mRNA差异显示与曲细精管透光分期技术相结合的方法，对大鼠IX～XII期和XIII～Ⅰ期曲细精管的基因表达指纹图谱进行了比较。通过27组不同引物组合的差异PCR反应，共得到56个具有阶段特异性表达特征的cDNA片段。通过对它们中的12个进行序列测定和序列同源性分析，其中8个为代表未知基因的新的EST，另有一个与小鼠quaking基因具有高度的同源性，提示这一基因同样存在于大鼠曲轴精管中并呈阶段特异性表达。将所得序列送至GenBank，均获得新的序列编号。

关键词：差异显示精子发生阶段特异性基因 mRNA

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混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

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中华医学检验杂志 1998年第2期21卷 92-95页

作者：许琪韩富天范钰林秉承沈岩吴冠芸中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国科学院化学物理研究所

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结... 详细信息

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结果毛细管电泳可检测到２０ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于３～４个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／６００，琼脂糖凝胶电泳可检测到７４ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于１３个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／３。毛细管电泳检测微量目的基因扩增产物的综合灵敏度是琼脂糖凝胶电泳的７５０倍。结论毛细管电泳灵敏度高、重现性好，与ＰＣＲ技术结合可广泛用于各种混合样品中微量核酸分子的检测。

关键词：聚合酶链反庆 SRY基因毛细管电泳基因诊断

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神经元GPI锚定蛋白结构与功能研究进展

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生物工程进展 2001年第5期21卷 52-55页

作者：李光涛隋玮刘炳岩袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院国家人类基因组北方研究中心医学分子生物学国家重点实验室北京100005

神经系统中的IgSF蛋白是一类重要的神经细胞表面分子 ,种类繁多 ,功能多样 ,其中一类分子缺乏跨膜区 ,通过GPI锚结合在细胞膜上 ,表现出结构和功能的特异性。本文对该类神经元GPI锚定蛋白分子作一系统介绍。根据结构特点 ,神经元GPI锚... 详细信息

神经系统中的IgSF蛋白是一类重要的神经细胞表面分子 ,种类繁多 ,功能多样 ,其中一类分子缺乏跨膜区 ,通过GPI锚结合在细胞膜上 ,表现出结构和功能的特异性。本文对该类神经元GPI锚定蛋白分子作一系统介绍。根据结构特点 ,神经元GPI锚定蛋白分子可分为三类 ,各类分子通过Ig结构域与其自身或其它蛋白分子进行顺式或反式结合 ,调节神经细胞活动。

关键词：神经元免疫球蛋白超家族 GPI锚定蛋白结构功能

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rhM-CSFsR在大肠杆菌中的表达及其配基结合活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 1999年第5期15卷 709-713页

作者：罗寿青郑德先饶青刘彦信马正宇吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外具有结合活性区域的cDNA,经平端连接将其克隆到原核表达载体pET-28a的His-Tag下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,重组的人可溶型M-CSFR(rhM-CSFsR... 详细信息

从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外具有结合活性区域的cDNA,经平端连接将其克隆到原核表达载体pET-28a的His-Tag下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,重组的人可溶型M-CSFR(rhM-CSFsR)在宿主菌中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的38%.重组蛋白经Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,获得了纯化的rhM-CSFsR,经SDS-PAGE显示为单一区带,其表观分子量为34kD.用酶联免疫吸附分析(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)证明rhM-CSFsR有明显的M-CSF专一结合活性,Kd值为7.8nmol/L,只有一个M-CSF结合位点.本实验结果显示原核表达的rhM-CSFsR具有明显的配基结合活性,提示M-CSFR的糖基化程度对于其配基结合活性不是必不可少的。

关键词：基因表达重组巨噬细胞集落刺激因子受体

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外源性野生型p53基因对人喉癌等肿瘤细胞生长抑制的实验研究

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高技术通讯 1995年第10期5卷 51-54页

作者：陈晓巍刘德培王直中刘庆辉梁植权中国医学科学院北京协和医院耳鼻咽喉科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

以反转录病毒Ｎ２Ａ为载体，使携带自身正调控序列的野生型ｐ５３基因反向插入Ｎ２Ａ两端ＬＴＲ间的ＸｈｏＩ位点，获得了野生型ｐ５３基因反转录病毒重组体，建立了产病毒的ＰＡ３１７细胞系。用该细胞系产生的新鲜病毒颗粒感染有ｐ５... 详细信息

以反转录病毒Ｎ２Ａ为载体，使携带自身正调控序列的野生型ｐ５３基因反向插入Ｎ２Ａ两端ＬＴＲ间的ＸｈｏＩ位点，获得了野生型ｐ５３基因反转录病毒重组体，建立了产病毒的ＰＡ３１７细胞系。用该细胞系产生的新鲜病毒颗粒感染有ｐ５３基因异常的人喉癌细胞系（Ｈｅｐ２）和纤维肉瘤细胞系（ＭＤＡＨ０４１），Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析证实野生型ｐ５３基因反转录病毒前病毒能稳定整合在受体细胞染色体基因组上并有表达。感染病毒后的肿瘤细胞恶性表型发生了逆转，在裸鼠体内形成生长缓慢的移植瘤或不形成移植瘤。

关键词： p53基因喉癌肿瘤细胞生长抑制

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srhM-CSFR在昆虫细胞中的表达及其配基结合活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 2000年第4期16卷 443-447页

作者：罗寿青郑德先刘彦信李董饶青吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

从人胎盘中提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体 ( M-CSFR)胞外区的、具有全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域的 DNA,将其克隆到杆状病毒载体 pbluebac4.5中 ,与杆状病毒 DNA一同转导昆虫细胞 Sf9... 详细信息

从人胎盘中提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体 ( M-CSFR)胞外区的、具有全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域的 DNA,将其克隆到杆状病毒载体 pbluebac4.5中 ,与杆状病毒 DNA一同转导昆虫细胞 Sf9.经过 2轮筛选 ,获得了纯化的重组病毒 ,再用重组病毒感染昆虫细胞 ,Western印迹检测证明 srh M- CSFR得到了表达 ,它是分泌到上清液中的糖基化蛋白 .Western印迹分析了不同时间点的 srh M- CSFR表达情况 ,结果表明 srh M- CSFR的表达在 96～ 1 2 0 h时达到最大 .srh M- CSFR的产量约为 1 mg/L,EIA法进行配基结合活性分析表明 ,srh M- CSFR与 M- CSF结合的解离常数为 5nmol/L.

关键词： srhM-CSFR 杆状病毒表达系统配基综合活性

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中国人遗传性B型短指(趾)家系中ROR2基因突变的鉴定

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中华医学遗传学杂志 2004年第1期21卷 61-63页

作者：杨威谭凤钦孙淼曾瑄刘杰刘国仰罗会元张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 河北省计划生育研究所

目的　确定一个中国人 B型短指 (趾 )家系中是否存在 ROR2基因突变。方法　从一个中国人B型短指 (趾 )家系的患者外周血中提取基因组 DNA,PCR扩增 ROR2基因外显子 8和部分外显子 9,PCR产物直接测序 ;同时进行 PCR产物 TA克隆和插入片段... 详细信息

目的　确定一个中国人 B型短指 (趾 )家系中是否存在 ROR2基因突变。方法　从一个中国人B型短指 (趾 )家系的患者外周血中提取基因组 DNA,PCR扩增 ROR2基因外显子 8和部分外显子 9,PCR产物直接测序 ;同时进行 PCR产物 TA克隆和插入片段测序。结果　在患者中发现 ROR2基因第 9外显子1398～ 1399ins A杂合突变 ,与国外发现的致病性突变一致。结论　本文首次报告中国人 B型短指 (趾 )中的 ROR2基因突变。

关键词：中国人遗传性B型短指(趾) 家系 ROR2基因突变鉴定

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一种与Calpastatin具有部分同源结构的人精子膜蛋白的发现与研究

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生物化学杂志 1994年第2期10卷 242-246页

作者：魏曙光缪时英张梅林王琳芳宗书东医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院国家计划生育委员会科学技术研究所

在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白，命名为ＢＳ－１７。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λｇｔ１１ｃＤＮＡ表达库中克隆了编码ＢＳ－１７的ｃＤＮＡ片段。序列分析表明ＢＳ－１７ｃＤＮＡ片段长７９１ｂｐ，... 详细信息

在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白，命名为ＢＳ－１７。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λｇｔ１１ｃＤＮＡ表达库中克隆了编码ＢＳ－１７的ｃＤＮＡ片段。序列分析表明ＢＳ－１７ｃＤＮＡ片段长７９１ｂｐ，开放阅读框架５５８ｂｐ，可编码１８６个氨基酸。经数据库检索，该ｃＤＮＡ片段与人Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ（Ｃａ￣（２＋）依赖的半胱氨酸蛋白酶ｃａｌｐａｉｎ抑制剂）基因３’端顺序具有９９．７％的同源，与Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ蛋白质羧基末端同源性为９９．５％。用ｃＲＮＡ进行组织原位杂交结果表明，ＢＳ－１７基因表达于人精子减数分裂后期单倍精细胞阶段。

关键词：人精子膜蛋白原位杂交精液

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