检索结果-内蒙古大学图书馆

应用酵母单杂交体系筛选与大鼠谷胱甘肽S-转移酶P增强子GPEⅠ相互作用的转录激活因子

中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 317-321页

作者：廖名湘左瑾刘东远方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法　采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测... 详细信息

目的　探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法　采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测定及计算机分析等手段对所测的 DNA序列进行分析。结果　共获得两个阳性克隆 p YGPE1和 p YGPE2。 DNA测序分析表明 :p YGPE1的插入片段与大鼠原癌基因 c- jun c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠 c- Jun蛋白具有 10 0 %的同源性。 p YGPE2的插入片段与大鼠线粒体腺苷酸转位酶 c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠腺苷酸转位酶具有 10 0 %的同源性。结论　大鼠 c- Jun蛋白和线粒体腺苷酸转位酶在酵母细胞内与大鼠 GST- P增强子 GPE 核心序列结合 ,可能是作用于 GPE 的反式作用因子。

关键词：酵母单杂交体系谷胱甘肽S-转移酶增强子GPE Ⅰ

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维生素D_3、9-顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因表达的调控

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 322-326页

作者：张洪美吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 J... 详细信息

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 Jurkat细胞 ,并用 VD3和 9- cis- RA分别或同时刺激细胞 ,或将质粒 β1.11及野生型维生素D3受体 (VDR)或 /和维甲酸 X受体 α(RXRα)真核表达质粒共转染 Jurkat细胞 ,检测细胞裂解液中荧光素酶活性 ;用 Western印迹分析方法检测经 VDR真核表达质粒转染或用 VD3和 9- cis- RA刺激的 Jurkat细胞中内源性Hsp90β蛋白的改变 ;通过电泳迁移率变更分析 (EMSA)实验 ,检测 VDR和 RXR能否与含有 hsp90β基因第一内含子中维生素 D3应答元件 (i VDRE)的双链寡核苷酸片段发生特异结合。结果　 VD3和 9- cis- RA可分别低水平诱导hsp90β基因表达 ,而两种配体同时加入有协同作用。 VDR或 RXRα分别转染只能较弱地抑制 hsp90β基因表达 ,二者共转染能增强其抑制作用。 EMSA实验证实 ,VDR和 RXR都可特异结合于 i VDRE上。结论　 VD3和 9- cis- RA这两条信号途径共同参与 hsp90β基因的启动子活性调节。

关键词：维生素D3 9-顺式维甲酸维生素D3受体基因表达

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早老蛋白氨基端与羧基端结构域的相互作用

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 536-539页

作者：梅品超楼蓉李兰英周义贡金英陈雨亭吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究早老蛋白分子相互作用及相互作用结构域。方法利用 RT- PCR扩增人早老蛋白- 1和早老蛋白- 2全长 cDNA。在此基础上构建多种缺失体，采用酵母双杂交体系分析它们之间的相互作用。结果 (1）早老蛋白- 1的氨基端多肽与羧基端多肽... 详细信息

目的研究早老蛋白分子相互作用及相互作用结构域。方法利用 RT- PCR扩增人早老蛋白- 1和早老蛋白- 2全长 cDNA。在此基础上构建多种缺失体，采用酵母双杂交体系分析它们之间的相互作用。结果 (1）早老蛋白- 1的氨基端多肽与羧基端多肽之间存在直接的相互作用，能形成同源二（多）聚体。早老蛋白- 1羧基端相互作用位点定位于第 361～ 447位氨基酸。这一相互作用不依赖于其旁侧亲水环结构功能域的存在，也无需其它配体参与；（ 2）早老蛋白- 1氨基端片段或羧基端片段自身之间均不能形成同源二（多）聚体；（ 3）早老蛋白- 2氨基端多肽与羧基端多肽之间也存在上述相互作用，能形成同源二（多）聚体；（ 4）早老蛋白- 1的羧基端片段与早老蛋白- 2的氨基端片段、早老蛋白- 2的羧基端片段与早老蛋白- 1的氨基端片段不发生相互作用。结论早老蛋白氨基端多肽与羧基端多肽之间直接的相互作用可能参与、并有助于早老蛋白的装配和成熟，是其功能的结构基础。

关键词：早老蛋白相互作用羧基端结构域早老性痴呆

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人乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立

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中国医学科学院学报 2000年第3期22卷 263-265页

作者：屠亚军琦祖和杨鹏潘燕于树玉杜淼李光三中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　建立人乙型肝炎病毒 x(HBx)基因转基因小鼠模型。方法　用显微注射法制备转基因小鼠 ,用分子杂交法鉴定转基因小鼠 HBx的整合与表达。结果　建立了人 HBx基因转基因小鼠模型。经 Southern杂交鉴定得到 17只转基因首建鼠。自肝脏... 详细信息

目的　建立人乙型肝炎病毒 x(HBx)基因转基因小鼠模型。方法　用显微注射法制备转基因小鼠 ,用分子杂交法鉴定转基因小鼠 HBx的整合与表达。结果　建立了人 HBx基因转基因小鼠模型。经 Southern杂交鉴定得到 17只转基因首建鼠。自肝脏提取总 RNA进行 Northern杂交 ,结果显示 17只首建鼠肝脏中均有 HBx表达。结论　为从整体水平研究慢性乙型肝炎患者诱发肝癌的作用机制及 HBx的反式激活作用机制提供了理想的动物模型。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠模型

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酵母单杂交体系——一种研究DNA-蛋白质相互作用的有效方法

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 388-391页

作者：廖名湘方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的... 详细信息

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的局限性。目前酵母单杂交体系已被广泛应用于寻找与目的 DNA片段相互作用的蛋白质分子 ,该体系是一种用于研究 DNA-蛋白质之间的相互作用的有效方法。本文就酵母单杂交体系的原理、具体实现方法、在研究 DNA结合蛋白质中的应用及其优缺点等方面作一简要介绍。

关键词：酵母单杂交体系 DNA-蛋白质相互作用

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异丁酰胺选择性活化人γ-珠蛋白基因的转录

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中国医学科学院学报 2000年第5期22卷 444-448页

作者：张雪青陈平黄小东张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究本室合成的异丁酰胺对于μ LCRAγψβδβ MEL稳定转化子中珠蛋白基因表达的影响作用。方法转化子细胞在含不同浓度异丁酰胺的细胞培养基中生长 4 d后，用 RNase保护分析法测定人 Aγ－、β－及鼠α－珠蛋白基因的表达水平... 详细信息

目的研究本室合成的异丁酰胺对于μ LCRAγψβδβ MEL稳定转化子中珠蛋白基因表达的影响作用。方法转化子细胞在含不同浓度异丁酰胺的细胞培养基中生长 4 d后，用 RNase保护分析法测定人 Aγ－、β－及鼠α－珠蛋白基因的表达水平。结果异丁酰胺可诱导人γ－、β－、及鼠α－珠蛋白基因的表达，且有一定的剂量相关性，对人γ－基因的诱导能力显著强于对人β－基因的诱导，在一定的异丁酰胺浓度范围 (2.5～ 5 mmol/L)内，对人γ－基因的诱导作用对比鼠α－珠蛋白基因更为有效。结论异丁酰胺在一定程度上可以选择性诱导人γ－珠蛋白基因转录，这一作用以及异丁酰胺的无毒性和血浆半衰期较长的优点，显示出其在β－地中海贫血和镰刀型贫血的治疗中具有潜在的应用前景。

关键词：异丁酰胺 γ-珠蛋白基因 β-地中海贫血

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应用差异显示法研究低密度脂蛋白诱导内皮细胞差异表达基因

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中华医学杂志 2000年第10期80卷 784-786页

作者：张可满陈保生吴纲薛红曾武威中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　克隆、分离血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因素作用下差异表达的基因 ,了解动脉粥样硬化发生的分子机制。方法　培养血管内皮细胞系 (ECV30 4)在低密度脂蛋白 (LDL)的诱导下 ,用改进的差异显示聚合酶链反应 (PCR)技术分析表达水... 详细信息

目的　克隆、分离血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因素作用下差异表达的基因 ,了解动脉粥样硬化发生的分子机制。方法　培养血管内皮细胞系 (ECV30 4)在低密度脂蛋白 (LDL)的诱导下 ,用改进的差异显示聚合酶链反应 (PCR)技术分析表达水平明显差异的cDNA。对差异显示基因进行序列测定和同源比较。用NorthernBlot证实差异显示基因片段。结果　LDL诱导ECV30 4细胞出现一些上调和下调表达的cDNA。已知的上调表达基因包括 10 0 0 0蛋白、FGFR1原癌基因伴随蛋白、rTSβ蛋白、FK5 0 6结合蛋白、细胞间粘附分子 1;下调表达的基因有fb19、Apobec 1结合蛋白 1、RBP2。不同的上调或下调基因表达水平变化在 70 %～ 2 0 0 %之间不等。结论　用差异显示 PCR方法证实LDL可诱导ECV30 4细胞许多基因表达水平的变化。高水平LDL作用于内皮细胞可引起炎性反应 ,影响动脉粥样硬化的早期发生。

关键词：基因表达 LDL 内皮细胞差异显示动脉粥样硬化

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人泛素结合酶cDNA的分离与克隆

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 306-311页

作者：吕鸿雁李光涛周严金鉴蒋科艺彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　分离、克隆人泛素结合酶基因 ,并初步研究其组织表达谱。方法　根据与鼠泛素结合酶有较高一致性的人表达序列标签 (EST)设计筛库引物 ,筛选人胎脑 c DNA文库 ,采用生物信息学方法分析筛选到的阳性克隆 ;设计探针 ,应用人多组织杂... 详细信息

目的　分离、克隆人泛素结合酶基因 ,并初步研究其组织表达谱。方法　根据与鼠泛素结合酶有较高一致性的人表达序列标签 (EST)设计筛库引物 ,筛选人胎脑 c DNA文库 ,采用生物信息学方法分析筛选到的阳性克隆 ;设计探针 ,应用人多组织杂交膜分析该基因的组织表达谱。结果　从文库中筛选到两个互为剪接异构体的长度分别为 1471和 1315 bp的 c DNA克隆 ,其开放读码框分别编码 147和 10 9个氨基酸 ,与鼠、果蝇、线虫等生物的泛素结合酶均高度同源 ,含泛素结合结构域 ,Gen Bank登录号分别为 AF12 5 0 44和 AF12 5 0 45。Northern杂交显示 ,该基因在成人心脏、胎盘、胰腺等组织中呈特异表达 ,而在脑、肝、肺、肾和骨胳肌中基本不表达。结论　泛素结合酶基因在人体中的表达受到时间和空间的双重调控。

关键词：泛素泛素结合酶 cDNA 分离克隆

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我国人类疾病基因控制工程基础研究的近期进展

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中国医学科学院学报 2000年第3期22卷 205-207页

作者：方福德 *** 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

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嗜水气单胞菌hec毒素溶血试验诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症

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中华血液学杂志 2000年第10期21卷 517-520页

作者：刘海丽许彩民吕照江陆承平潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院南京农业大学

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素... 详细信息

目的　研究嗜水气单胞菌hec毒素对红细胞的作用 ,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的临床诊断提供一种新方法。方法　从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌 ,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素 ,经DEAE纤维素层析得提纯毒素。粗提毒素作用于PNH和其他贫血患者及正常人的红细胞 ,采用 96孔板在波长 6 30nm酶标仪比色 ;同时用CD59单抗和FITC标记的羊抗鼠IgG标记红细胞 ,以流式细胞仪分析毒素作用前后CD59标记率。结果　对 15例PNH患者、15名正常人、15例非PNH贫血患者的红细胞 ,进行hec毒素试验 ,发现毒素在 0 .12 5g/L、37℃作用 2 0min后 ,正常人和非PNH贫血患者的红细胞完全溶解 ,而PNH患者存留红细胞的百分率与CD59标记率成反比。毒素作用前后流式细胞仪检测结果表明 ,毒素可以特异地作用于CD59阳性细胞。结论　PNH患者的红细胞比其他非PNH贫血患者及正常人的红细胞有明显的抗毒素溶破作用 ,且毒素作用后存留细胞的百分数反映CD59标记率 ,故可作为PNH诊断的敏感、特异、简便可行的新诊断方法。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿嗜水气单胞菌 hec毒素

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