检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 1999年第1期19卷 43-48页

作者：李旌军黄秉仁蔡良琬中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

利用啤酒酵母α－因子启动子和前导肽区与中国人ＧＭ－ＣＳＦ基因编码区正确融合后能产生具有正确Ｎ－端的分泌型表达载体，ＧＭ－ＣＳＦ基因在啤酒酵母细胞中得到表达和分泌。Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交和染糖结果表明酵母细胞能识别ｈＧＭ... 详细信息

利用啤酒酵母α－因子启动子和前导肽区与中国人ＧＭ－ＣＳＦ基因编码区正确融合后能产生具有正确Ｎ－端的分泌型表达载体，ＧＭ－ＣＳＦ基因在啤酒酵母细胞中得到表达和分泌。Ｗｅｓｔｅｍ印迹杂交和染糖结果表明酵母细胞能识别ｈＧＭ－ＣＳＦ中潜在的糖化位点。表达的ｈＧＭ－ＣＳＦ以不同程度的糖化形式存在。体外生物学活性测定表明，培养上肩能刺激骨髓干细胞的增殖，形成集落，其生物学活性为１．２５ｘ１０４Ｕ／ｍＬ。

关键词： GM-CSF 啤酒酵母表达分泌糖化

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维持细胞内铜离子浓度稳定的分子机制

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生物工程进展 1999年第6期19卷 22-27,31页

作者：罗文琴陈建和袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

对生命而言，铜是一种必须的微量元素，它以辅基的形式参与细胞内多种重要的代谢途径。赖氨酸氧化酶参与结缔组织的形成和胶原交联，超氧化物歧化酶清除胞内自由基，细胞色素氧化酶是呼吸链电子传送蛋白，酪氨酸酶参与色素形成途径，多... 详细信息

对生命而言，铜是一种必须的微量元素，它以辅基的形式参与细胞内多种重要的代谢途径。赖氨酸氧化酶参与结缔组织的形成和胶原交联，超氧化物歧化酶清除胞内自由基，细胞色素氧化酶是呼吸链电子传送蛋白，酪氨酸酶参与色素形成途径，多巴胺β羟化酶则与神经传导有关。细胞内铜离子浓度过低会影响这些酶的活性及相应的生理代谢途径，影响细胞的生存。但细胞内铜离子浓度超过生理需求也会引起严重的问题。铜离子能氧化蛋白，脂类和ＤＮＡ，同时促进形成自由基，引起细胞死亡［１］。人体很多疾病都是由于铜离子代谢异常引起的，其中最著名的就是Ｗｉｌｓｏｎ［２］和Ｍｅｎｋｓ［３］病，它们分别是由过多铜离子在细胞内堆积和细胞内铜离子浓度过低导致的。另外，铜离子缺乏还会引起心脏疾病［４］。所以，将细胞内铜离子浓度维持在一稳定水平对细胞生存至关重要。生理性铜离子浓度的维持主要在于四个环节：铜离子进入胞内（ｕｐｔａｋｅ）、胞内运送（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）、合成金属蛋白（ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）及清除过多铜离子（ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）［５］。对于过高或过低的铜离子浓度，细胞主要是通过改变流入量（ｉｎｆｌｕｘ）和流出量（ｅｆｆｌｕｘ）来应答。另外，金属硫蛋白可?

关键词：细胞铜离子浓度细菌酵母调控铜离子代谢

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一种与不育有关的人精子蛋白质的组织特异性及表达

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中国医学科学院学报 1999年第3期21卷 166-169页

作者：张梅林周雪峰曹登峰缪时英吴燕婉邢志军宗书东王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室国家计划生育委员会科学技术研究所

目的通过对已被ＧｅｎＢａｎｋ接受、编码与不育有关的人精子蛋白质的ｃＤＮＡ片段（ＢＳＤ－２．４）的组织特异性及表达阶段的研究，进一步了解其特性。方法采用Ｄｏｔｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和组织原位杂交技术。结果该... 详细信息

目的通过对已被ＧｅｎＢａｎｋ接受、编码与不育有关的人精子蛋白质的ｃＤＮＡ片段（ＢＳＤ－２．４）的组织特异性及表达阶段的研究，进一步了解其特性。方法采用Ｄｏｔｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和组织原位杂交技术。结果该ｃＤＮＡ只在人和大鼠睾丸组织中表达；在人睾丸曲细精管的精原细胞、精母细胞和精子细胞中均有转录。结论ＢＳＤ－２．４ｃＤＮＡ编码蛋白具有睾丸组织特异性，并在精子发生的各个阶段均有不同程度的表达。

关键词：人精子蛋白质组织特异性组织原位杂交

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人胰岛素样生长因子Ⅱ在甲醇营养型酵母***中的表达、分泌和性质研究

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中国生物化学与分子生物学报 1999年第6期15卷 893-898页

作者：李旌军黄秉仁中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为获得ＩＧＦ－Ⅱ的高效表达，构建了其多拷贝、分泌型表达载体：含有５个串联的ＩＧＦ－Ⅱ表达单元；由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达；利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌．线形化表达载体转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ蛋白酶缺陷... 详细信息

为获得ＩＧＦ－Ⅱ的高效表达，构建了其多拷贝、分泌型表达载体：含有５个串联的ＩＧＦ－Ⅱ表达单元；由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达；利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌．线形化表达载体转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ蛋白酶缺陷型菌株后，筛选到有ＩＧＦ－Ⅱ表达和分泌的阳性转化子；进一步优化表达、培养条件后，ＩＧＦ－Ⅱ在高密度发酵上清中的产量可达６０ｍｇ／Ｌ．对Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ产生的ｒｈＩＧＦ－Ⅱ的性质分析表明，其具有正确的分子量，Ｎ端和较好的生物活性．

关键词：甲醇营养型酵母分泌 IGF-Ⅱ 表达性质

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Yunnanese(~Aγδβ)~0-地贫缺失桥片段的克隆及缺失连接区的序列测定

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中国生物化学与分子生物学报 1999年第1期15卷 118-122页

作者：张俊武张雪青赵艳君中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

为研究导致Ｙｕｎｎａｎｅｓｅ（Ａγδβ）０－地贫缺失事件的分子机制，并从３′并入序列中搜寻增强子类序列，使用ＥＭＢＬ３为载体构建了一例缺失杂合子的基因组文库，筛选到来源于异常染色体１１并包含Ｇγ珠蛋白基因区６．７ｋｂ... 详细信息

为研究导致Ｙｕｎｎａｎｅｓｅ（Ａγδβ）０－地贫缺失事件的分子机制，并从３′并入序列中搜寻增强子类序列，使用ＥＭＢＬ３为载体构建了一例缺失杂合子的基因组文库，筛选到来源于异常染色体１１并包含Ｇγ珠蛋白基因区６．７ｋｂ序列以及１１．５ｋｂ３′并入序列（即缺失桥片段）的克隆．此１１．５ｋｂ序列在正常染色体中位于β珠蛋白基因约下游６６～７８ｋｂ区域．详细分析了这一区域的限制性内切酶图谱．分析了围绕缺失连接区的ＤＮＡ序列，精确定位缺失的５′端点发生在Ａγ珠蛋白基因上游－１１６～－１１７碱基之间．确定缺失的３′端点处于一个Ｌ１序列内，位于β珠蛋白基因下游～６６ｋｂ，距离Ｃｈｉｎｅｓｅ（Ａγδβ）０－地贫缺失３′端点上游～１２．２ｋｂ的一个ＥｃｏＲⅠ位点上游４１３ｂｐ．围绕５′和３′端点的序列之间无明显同源性，说明这一缺失代表了体内的非同源重组事件．这一重组事件可能由Ｌ１序列介导．

关键词：地中海贫血缺失连接区非同源重组

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sTRAIL在大肠杆菌中的表达及其诱导细胞凋亡活性的研究

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科学通报 1999年第9期44卷 972-975页

作者：朱迅刘彦信马正宇郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

TRAIL(TNF relatedapoptosis inducingligand ,简称TRAIL或Apo 2L)是肿瘤坏死因子家族的新成员 ,体外研究表明其具有特异性杀伤肿瘤细胞的功能 .为了进一步探索TRAIL的生物学功能及其临床应用前景 ,首次从中国正常人外周血淋巴细胞中扩... 详细信息

TRAIL(TNF relatedapoptosis inducingligand ,简称TRAIL或Apo 2L)是肿瘤坏死因子家族的新成员 ,体外研究表明其具有特异性杀伤肿瘤细胞的功能 .为了进一步探索TRAIL的生物学功能及其临床应用前景 ,首次从中国正常人外周血淋巴细胞中扩增了TRAIL胞外功能区(sTRAIL) ,并将其插入原核表达载体 ,转化大肠杆菌后 ,可溶型重组蛋白 (rsTRAIL)获得了高效稳定表达 ,其产量达到菌体总蛋白的 30 %左右 .体外研究表明 ,亲和层析纯化后的重组蛋白在 0 .1～ 1 μg/mL的浓度范围内 ,能显著诱导所试全部 7种肿瘤细胞株细胞凋亡 ,但不能诱导正常鼠成纤维细胞株细胞凋亡 ;进一步研究表明 ,rsTRAIL对贲门癌、乳腺癌和恶性胸腺瘤等原代细胞也具有强烈的杀伤作用 ,但不能杀伤正常人外周血淋巴细胞 .此实验结果为rsTRAIL特异性地诱导肿瘤细胞凋亡的生物学作用提供了新的实验证据 ,具有重要的临床应用价值 .

关键词：肿瘤细胞细胞凋亡 sTRAIL 肿瘤坏死因子

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FMRP与TDG蛋白的相互作用

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科学通报 1999年第18期44卷 1981-1985页

作者：陈雨亭 B. Bardoni 余珉朱宁吴冠芸 J.L. Mandel 沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 IGBMC CNRS-INSERM-ULP 67404 Illkirch France

脆性X智力低下蛋白FMRP表达的缺乏可以导致最常见的遗传性智力低下疾病--脆性X综合征. 用酵母双杂交体系筛选与FMRP相互作用的蛋白质,以期通过相互作用的蛋白质研究与FMRP相关的生化途径. 从小鼠胚胎cDNA文库中得到一个与FMRP特异相互... 详细信息

脆性X智力低下蛋白FMRP表达的缺乏可以导致最常见的遗传性智力低下疾病--脆性X综合征. 用酵母双杂交体系筛选与FMRP相互作用的蛋白质,以期通过相互作用的蛋白质研究与FMRP相关的生化途径. 从小鼠胚胎cDNA文库中得到一个与FMRP特异相互作用蛋白的cDNA ( Genbank号af102875 ). 该cDNA编码的蛋白与人的G/T错配DNA胸腺嘧啶糖苷酶( hTDG )高度同源. 通过多种FMRP选择剪接异构体或缺失体与一系列TDG缺失体间相互作用的研究,确定了FMRP与TDG的相互作用发生在FMRP第13外显子(第397～425氨基酸残基)和TDG第122～346氨基酸残基区域内. 上述结果有助于深入研究FMRP涉及的生化途径.

关键词：脆性X智力低下蛋白质 (FMRP) G/T错配DNA胸腺嘧啶糖苷酶(TDG) 酵母双杂交蛋白质相互作用

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人GRY-RBP基因的表达及其RNA结合活性的初步鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 1999年第6期15卷 866-870页

作者：杜光伟陈建和周严汪俊华黄晓玮袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ，编码一个ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ的全编码区用ＰＣＲ扩增后，克隆到ｐＥＴ３０ａ＋表达... 详细信息

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ，编码一个ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ的全编码区用ＰＣＲ扩增后，克隆到ｐＥＴ３０ａ＋表达载体中，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达，表达的ＧＲＹ－ＲＢＰ重组蛋白占细菌总蛋白的２１％．利用融合在ＧＲＹ－ＲＢＰＮ端的Ｈｉｓ．Ｔａｇ，采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白．为了检测ＧＲＹ－ＲＢＰ的ＲＮＡ结合活性及其所结合的ＲＮＡ性质，将表达的蛋白与ｐｏｌｙ（Ａ）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ结合，发现ＧＲＹ－ＲＢＰ能与ｐｏｌｙＡ（Ａ）结合，结合活性能被可溶性的ｐｏｌｙ（Ａ）、ｐｏｌｙ（Ｃ）减弱．改变ＮａＣｌ浓度和加入不同浓度的酵母ｔＲＮＡ竞争物后，ｐｏｌｙ（Ａ）结合活性不变．

关键词： RNA结合蛋白 RNA结合活性转录后调控 GRY-RBP

来源：评论

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Dnmt3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 339-340页

作者：尹斌陈雨亭朱敏罗一菁朱宁徐世才吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

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中国人2型糖尿病的基因分型和定位

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解剖学报 1999年第4期30卷 289-292页

作者：赵进英王姮左瑾李玉秀孙琦黄薇陈竺蔡有余方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院上海第二医科大学瑞金医院中国医学科学院实验动物研究所

目的　对中国人２型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。　方法　采用分布于１～２２号染色体及Ｘ染色体上的３５８对荧光标记的微卫星引物，进行多重ＰＣＲ，ＰＣＲ扩增产物用聚... 详细信息

目的　对中国人２型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。　方法　采用分布于１～２２号染色体及Ｘ染色体上的３５８对荧光标记的微卫星引物，进行多重ＰＣＲ，ＰＣＲ扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分离，然后进行电泳图谱及信息收集。应用ＧｅｎｅｓｃａｎＴＭ３．０软件和Ｇｅｎｏ－ｔｙｐｅＴＭ２．１软件进行基因分型和基因定位。　结果　在３５个家系中共有１９３个微卫星标志能准确进行基因分型。共得４１４９５个基因型。经过多点连锁分析和患病同胞对分析，初步确定在１，１０，１２，１８，２０号染色体上存在ＮＩＤＤＭ相关基因位点。　结论　用全基因组扫描技术可以对中国人２型糖尿病相关基因位点进行基因分型和基因定位。

关键词：糖尿病 Ⅱ型基因分型基因定位

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