检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 246-249页

作者：胡晓燕周严代芸陈建萌张斌彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究。方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA。应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及... 详细信息

目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究。方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA。应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及其存在的结构域和基序。以Northern印迹分析检测TNFLP的mRNA的组织分布,并用谷胱苷肽-S-转移酶(GST)原核表达系统分段表达TNFLP的N端和C端蛋白。结果TNFLP全长共2112bp,编码一208个氨基酸的蛋白。亲、疏水性分析显示,TNFLP有两个疏水区,且C端95个氨基酸与小鼠的TNF-α一致性为42%。基序分析显示,TNFLP的C端有一内质网膜定位信号-TYKRL,与TNF-α完全一致。人的TNFLP位于人的16号染色体上。Northern杂交显示,TNFLP在心、脑和胰腺中呈高表达,可见一个转录本。用GST原核表达系统,分段表达了TNFLP的N端和C端。结论初步分析了TNFLP的组织表达谱,并分段表达了其N端和C端,为进一步研究其功能提供了条件。

关键词：肿瘤坏死因子 -α 肿瘤坏死因子样蛋白原核表达基因克隆

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DR4死亡结构域结合蛋白的初步研究

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 310-314页

作者：李晓玲刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的克隆DR4死亡结构域的结合蛋白,为进一步研究DR4诱导细胞凋亡的信号传递途径提供条件。方法以TRAIL(TNF-relatedapoptosisinducingligand)死亡受体DR4的死亡结构域(DR4DD)为钓饵,采用酵母双杂交系统筛选人白细胞MATCHMAKERcDNA文库。... 详细信息

目的克隆DR4死亡结构域的结合蛋白,为进一步研究DR4诱导细胞凋亡的信号传递途径提供条件。方法以TRAIL(TNF-relatedapoptosisinducingligand)死亡受体DR4的死亡结构域(DR4DD)为钓饵,采用酵母双杂交系统筛选人白细胞MATCHMAKERcDNA文库。以DNA自动分析仪测定核苷酸序列,采用计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域。并用免疫共沉淀方法分析人类甲酰肽受体1(formylpeptidereceptor-like1,FPRL1)在哺乳动物细胞内是否与DR4CD(thecytoplsmicdomainofDR4)特异性地结合。结果获得了两个阳性克隆pADB1和pADB2。DNA序列分析及同源性比较表明,pADB1的插入片段与人FPRL1的mRNA序列具有97%的同源性。pADB2的插入片段与GeneBank中的已知序列无同源性。免疫共沉淀结果表明FPRL1在哺乳动物细胞内可与DR4CD特异性地结合。结论FPRL1可与DR4的死亡结构域特异性结合,推测FPRL1与DR4的结合可能在DR4介导的细胞凋亡信号传导途径中发挥一定的作用。

关键词：类甲酰肽受体1 死亡受体4 TRAIL 酵母双杂交系统

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人M961全长cDNA及剪接异构体的分离与克隆

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 254-258页

作者：张斌汪俊华陶波李光涛周严彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂... 详细信息

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂交膜分析该基因在各细胞系的表达;用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,探讨该基因在此过程中的表达变化。结果从文库中筛出长度分别为1878和1382bp的M96cDNA克隆,二者为剪接异构体,其开放阅读框分别编码491及262个氨基酸,分别命名为M961和M962(GenBank接受号分别为AF072814和AF073293)。Northern杂交结果表明,在所检测的10种血细胞系中,人淋巴细胞白血病细胞系CEM的M961基因表达量最高,在有巨核及红系特点的Hel、Dami及K562白血病细胞系中M961的表达量也较高。在K562细胞分化过程中,M961基因表达略有升高。结论M961基因在某些白血病细胞系中表达量较高。

关键词：剪接异构体 M96基因 M961基因 M962基因 PHD锌指结构基因克隆基因分离白血病

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TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 238-241页

作者：刘彦信胡欢开郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用... 详细信息

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序。结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235。Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性。结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变。

关键词：白血病细胞凋亡肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体白血病细胞差异表达基因

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阿霉素肾病大鼠肌肉和静脉注射心钠素基因利尿作用的比较研究

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生物工程学报 2002年第6期18卷 671-675页

作者：李涛梁红雁闫峰卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发... 详细信息

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发现 ,人心钠素基因经肌肉和静脉内直接注射这 2种途径导入后 ,均可使阿霉素肾病动物的尿量体重比明显增加 ,有效利尿作用时间大于 15d。试验期间 ,实验组肾病动物的体重明显增长 ,血浆中的心钠素浓度在基因转移 5d后明显升高 ,但动物尿中的K+和Na+浓度无明显变化。以上结果说明 ,心钠素基因经肌肉和静脉 2种途径导入均可明显改善肾病动物的泌尿功能。

关键词：阿霉素肾病大鼠肌肉注射静脉注射心钠素基因利尿作用比较研究基因治疗逆转录病毒载体

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检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 321-324页

作者：李宏帆刘兴荣衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果... 详细信息

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。

关键词：基因表达热休克基因内参照RNA 逆转录一聚合酶链反应 Jurkat细胞

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心钠素基因的突变及对其利尿活性的影响

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中华医学杂志 2002年第19期82卷 1324-1327页

作者：李涛梁红雁闫峰卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学北京100005

目的　提高心钠素的生物学活性。方法　通过改造心钠素基因、构建突变型心钠素基因的逆转录病毒载体以及用肌内注射法将突变型和非突变型心钠素基因表达载体的裸DNA分别导入阿霉素诱导的肾病大鼠体内 ,以对其突变前后的利尿活性进行比... 详细信息

目的　提高心钠素的生物学活性。方法　通过改造心钠素基因、构建突变型心钠素基因的逆转录病毒载体以及用肌内注射法将突变型和非突变型心钠素基因表达载体的裸DNA分别导入阿霉素诱导的肾病大鼠体内 ,以对其突变前后的利尿活性进行比较研究。结果　获得了结构和功能两方面均符合预期的突变型心钠素基因。与空载体组相比 [87± 7 1pg/ml(n =6 ) ],突变和野生型心钠素基因组大鼠 (n =6 )血浆中的心钠素浓度均在试验开始后的第 5d明显升高 ,分别为 10 7± 7 8pg/ml(t =4 6 5 ,P <0 0 1)和 113± 8 6pg/ml(t =5 71,P <0 0 1)。两个试验组大鼠的尿量在试验开始后的第 5d就明显增多 ,有效期达 15d以上。突变型心钠素基因的作用更强 ,其大鼠在第 5、10和 15d时的尿液增长量分别是野生型心钠素组的 1 6、2 0和 1 9倍。结论　所获突变型心钠素基因的利尿作用明显增强。

关键词：利尿活性心钠素基因疗法逆转录病毒载体心力衰竭

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小剂量亚硒酸钠和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞的凋亡及分化

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中华血液学杂志 2002年第12期23卷 628-630页

作者：孙义民左路许彩民沈悌潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院

目的　研究小剂量亚硒酸钠 (2～ 5 μmol/L)与全反式维甲酸 (ATRA)联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法　采用膜联蛋白Ⅴ (Annexin Ⅴ )荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻率和DNA片段化的琼... 详细信息

目的　研究小剂量亚硒酸钠 (2～ 5 μmol/L)与全反式维甲酸 (ATRA)联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法　采用膜联蛋白Ⅴ (Annexin Ⅴ )荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻率和DNA片段化的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,通过流式细胞术检测粒系分化细胞表面特异抗原CD11b表达 ,NBT还原实验检测细胞分化。结果　阴性对照组细胞PS外翻率为 1.2 % ,5 μmol/L亚硒酸钠处理NB4细胞 4 8h后PS外翻率为 0 .8% ,0 .1μmol/LATRA诱导 4 8h后PS外翻率为 2 .0 % ,与对照组相比 ,差异均无显著性 ,而两者联合作用NB4细胞 2 4 ,36 ,4 8h后的PS外翻率分别达到 18.3%、2 5 .9%、5 0 .0 % ,DNA电泳呈典型的梯形带。小剂量 (2 μmol/L)亚硒酸钠没有诱导NB4细胞分化的能力 ,但其与 0 .1μmol/L的ATRA联合使用同单独使用 0 .1μmol/L的ATRA相比 ,CD11b表达阳性细胞率进一步增加 ,NBT还原能力也进一步增强。结论　小剂量的亚硒酸钠与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化。

关键词：亚硒酸钠全反式维甲酸细胞凋亡细胞分化 NB4细胞株急性白血病

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北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶的cDNA和蛋白质的结构分析

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第1期18卷 64-69页

作者：曾武威张坚陈保生吴钢张可满薛红中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为获得不易感动脉粥样硬化动物北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 .以从北京鸭肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了北京鸭LCAT的cDNA序列 ,推导出其蛋白质氨基酸序... 详细信息

为获得不易感动脉粥样硬化动物北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 .以从北京鸭肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了北京鸭LCAT的cDNA序列 ,推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较 .北京鸭LCATcDNA (在GenBank中的注册号为AF32 4 887)全长 195 3bp ,其中开放阅读框架 135 6bp ,编码 4 5 1个氨基酸 ,包括一个由 2 3个氨基酸构成的疏水性信号肽和一个由 4 2 8个氨基酸组成的成熟蛋白 .该成熟蛋白比人LCAT在C端多 12个氨基酸 ,其与鸡、人、家兔的同源性依次为 98%、83%和 82 % .与其它种属LCAT蛋白序列的比较结果表明 ,北京鸭LCAT蛋白质序列虽然在长度上和结构上与其它种属有一定的差异。

关键词：北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 cDNA 蛋白质结构

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遗传性乳光牙本质家系致病基因的染色体定位

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中华口腔医学杂志 2002年第6期37卷 408-411页

作者：赵军吴丽更贾智张青松邢晓艳张晓海天津医科大学口腔医院牙体牙髓科 300070 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的　研究一个在天津塘沽地区发现的遗传性乳光牙本质回族家系致病基因是否与染色体 4q2 1连锁。方法　提取该家系 1 3名成员的外周血DNA ,选择染色体 4q2 1上的 8个短串联重复序列多态性标记 (shorttandemrepeatpolymorphisms ,STRPs... 详细信息

目的　研究一个在天津塘沽地区发现的遗传性乳光牙本质回族家系致病基因是否与染色体 4q2 1连锁。方法　提取该家系 1 3名成员的外周血DNA ,选择染色体 4q2 1上的 8个短串联重复序列多态性标记 (shorttandemrepeatpolymorphisms ,STRPs)做荧光标记PCR等位片段分析 ,用lod连锁分析法分析该家系致病基因位点与上述 8个STRPs的连锁关系。结果　得到 1 3名个体 8个位点的基因型和单体型 ,连锁分析结果显示 :8个STRPs的最大lod值均大于 0 ,其中 5个STRPs的lod值大于 1。结论　该家系致病基因定位在染色体 4q2 1上 ,表明中国回族人和报道的欧美人的DGI

关键词：遗传性乳光牙本质染色体定位牙本质生成不全遗传学串联重复序列多态性标记家系调查致病基因

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