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Construction of an inducible nitric-oxide synthase gene transferring vector mediated by retrovirus

Acta Pharmacologica Sinica 1998年第2期 26-32页

作者：刘景生臧梦维彭学贤胡萍中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院药理室中国科学院微生物研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：构建逆转录病毒介导的诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转移载体．方法：应用ＤＮＡ重组和ＰＣＲ扩增技术．结果：通过二步克隆，从质粒ｐＫＳｉＮＯＳ分离编码巨噬细胞ｉＮＯＳ的全长ｃＤＮＡ，亚克隆于中间载体ｐＳＰ７２，... 详细信息

目的：构建逆转录病毒介导的诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转移载体．方法：应用ＤＮＡ重组和ＰＣＲ扩增技术．结果：通过二步克隆，从质粒ｐＫＳｉＮＯＳ分离编码巨噬细胞ｉＮＯＳ的全长ｃＤＮＡ，亚克隆于中间载体ｐＳＰ７２，调整插入片段二端酶切位点；进而构建含ｉＮＯＳ基因、巨细胞病毒启动子和ｎｅｏ抗性基因的逆转录病毒载体ｐＬＮＣＸｉＮＯＳ．限制性酶切分析和ＰＣＲ鉴定证实，重组体ｉＮＯＳ插入片段的大小和方向正确．结论：获得含ｉＮＯＳ基因逆转录病毒表达载体，为建立ｉＮＯＳ基因修饰的神经细胞模型，研究ＮＯ／ＮＯＳ在阿片耐受依赖中的作用奠定基础．

关键词：一氧化氮合酶互补DNA 基因表达调控真核细胞重组DNA 逆转录病毒遗传载体限制性酶切图谱聚合酶链式反应

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连接介导PCR及其在体内足迹研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 1997年第3期24卷 224-227页

作者：纪新军刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接... 详细信息

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接介导聚合酶链反应的敏感性 .

关键词：连接介导PCR 连接子体内足迹法聚合酶链反应

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红细胞生成素基因克隆及其在酵母细胞中的表达

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中国医学科学院学报 1997年第5期19卷 389-394页

作者：张旭黄秉仁蔡良琬中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

用PCR方法从人红细胞生成素CDNA中扩增出咸熟肽基因片段，与含酵母系统启动子的中间载体pSK43SB融合后重组于酵母游离型表达载体YEpHc8中，转化宿主菌后获得表达，并对表达蛋白的活性及糖基化情况初步进行分析。

关键词：酵母表达红细胞生成素基因克隆糖基化 PCR

来源：评论

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中国汉族人HLA-DQA1启动子区核酸序列分析

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中国医学科学院学报 1997年第5期19卷 347-352页

作者：邱长春方明式朱席琳杜志荣周文郁中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

本文报告汉族人HLA－DQAI启动子区（QAP）基因多态性。汉族人HLA－DQA1Xbox第-111位是腺苷酸（A）而不是鸟苷酸（G），-98位可是A或G；Ybox-71位为A；Sbox-131位为G；IDDM患者在Sbox5’上游和X、Ybox之间易发生单个核苷酸取代。并发现1... 详细信息

本文报告汉族人HLA－DQAI启动子区（QAP）基因多态性。汉族人HLA－DQA1Xbox第-111位是腺苷酸（A）而不是鸟苷酸（G），-98位可是A或G；Ybox-71位为A；Sbox-131位为G；IDDM患者在Sbox5’上游和X、Ybox之间易发生单个核苷酸取代。并发现1例携带DR2－IDDM患者AAP的-157和-158位间发生CCA核苷酸插入突变。提示HLA－DQA1启动子区多态性可能在ID－DM的遗传易感性中起着重要作用。

关键词：胰岛素依赖型糖尿病启动子插入突变

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人胎脑mRNA的差异显示分析及脑表达新ESTs的分离

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中国医学科学院学报 1997年第2期19卷 93-99页

作者：潘美辉袁建刚陈斌周彦方鸣武梁植权强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 南开大学分子生物学研究所

应用mRNA差异显示技术分析人胎脑组织不同发育阶段及不同部位基因表达的差异并研究其特异表达的基因。以3个锚定引物Oligo（dT）12M（M=A，G，C）及20个随机引物，对脑组织mRNA进行了近50次差异显示分析，共分离出上百个差示产物。对其... 详细信息

应用mRNA差异显示技术分析人胎脑组织不同发育阶段及不同部位基因表达的差异并研究其特异表达的基因。以3个锚定引物Oligo（dT）12M（M=A，G，C）及20个随机引物，对脑组织mRNA进行了近50次差异显示分析，共分离出上百个差示产物。对其中部分产物进行克隆、测序获得了39个CDNA序列，长度为100～500bp。其中34个已被Genbank接受并给予新序列编号。

关键词：差异显示反转录 PCR 人胎脑表达序列标签

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X染色体长臂末端28个新序列标签位点的分离

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中国医学科学院学报 1997年第1期19卷 1-5页

作者：秦学斌孔建黄涛张军沈岩吴冠芸中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

用脉冲场凝胶电泳分离回收覆盖脆性X位点的酵母人工染色体YAC209G4中475kb片段，经MboⅠ完全酶解为平均长度400bp的片段，与pBSⅡKS质粒载体重组，共得到3500个重组作，筛选出60个含单拷贝序列插入片段的克隆。经序列测定，并与基因数... 详细信息

用脉冲场凝胶电泳分离回收覆盖脆性X位点的酵母人工染色体YAC209G4中475kb片段，经MboⅠ完全酶解为平均长度400bp的片段，与pBSⅡKS质粒载体重组，共得到3500个重组作，筛选出60个含单拷贝序列插入片段的克隆。经序列测定，并与基因数据库分析比较，其中28个序列被基因数据库接受为新的序列标签位点，GenBank收录号为U26560-U26587。根据其中3个新序列标签的核普酸顺序设计PCR引物，在人基因组DNA中扩增出相应的特异片段。

关键词：序列标签位点脆性X综合征染色体

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HLA-DRB_1等位基因与我国北方类风湿关节炎的关系

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中华内科杂志 1997年第2期36卷 112-115页

作者：赵岩董怡唐福林邱长春中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科中国医学科学院基础医学研究所分子生物学国家重点实验室

为了观察ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因在类风湿关节炎（ＲＡ）临床及发病中的作用，对８６例ＲＡ患者和１０６名正常对照的ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因进行分型。用序列特异性引物体外基因扩增法测定ＨＬＡ－ＤＲ特异性，用序列特异性寡核苷... 详细信息

为了观察ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因在类风湿关节炎（ＲＡ）临床及发病中的作用，对８６例ＲＡ患者和１０６名正常对照的ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因进行分型。用序列特异性引物体外基因扩增法测定ＨＬＡ－ＤＲ特异性，用序列特异性寡核苷酸探针进行ＨＬＡ－ＤＲ４亚型的测定。并根据ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因的分型结果分析ＲＡ的临床表现和血清学特点及其与ＲＡ患者预后的关系。结果表明：同对照组相比，ＲＡ患者中ＨＬＡ－ＤＲ４基因频率明显增高（４８．８％比１７．９％，Ｐ＜０．００１），而ＨＬＡ－ＤＲ５基因频率降低（１６．３％比２７．４％，Ｐ＝０．０６）。ＤＲ４阳性ＲＡ中主要的ＤＲ４亚型为ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４０５（６１．９％比２１．１％，Ｐ＜０．０１）。在ＤＲ４阳性和ＤＲ４阴性两组患者中，其发病年龄、病程和关节外表现无明显差异，但ＤＲ４阳性组的类风湿因子阳性率高于ＤＲ４阴性组（Ｐ＜０．０５），并且ＤＲ４阳性的ＲＡ患者腕和（或）指关节Ｘ线片分期明显重于ＤＲ４阴性者（Ｐ＜０．０５）。本研究结果表明，我国北方ＲＡ患者和ＨＬＡ－ＤＲ４基因明显相关，其主要亚型为ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４０５。ＲＡ患者ＨＬＡ－ＤＲ４基因的检测可作为一项有用的预后判断指标。

关键词：类风湿性关节炎 HLA-DR 抗原

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血管紧张素转化酶基因的插入/缺失多态性与其血清水平及心肌梗塞的关系

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中华心血管病杂志 1997年第1期25卷 34-36页

作者：郑豪义戴玉华邱长春中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院心内科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

旨在探讨中国人中血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）基因的插入／缺失（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ，Ｉ／Ｄ）多态性与血清中ＡＣＥ水平及心肌梗塞的关系。心肌梗塞患者１０３例；正常对照９６例。位于ＡＣＥ基因第１６内含子的Ｉ... 详细信息

旨在探讨中国人中血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）基因的插入／缺失（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ／ｄｅｌｅｔｉｏｎ，Ｉ／Ｄ）多态性与血清中ＡＣＥ水平及心肌梗塞的关系。心肌梗塞患者１０３例；正常对照９６例。位于ＡＣＥ基因第１６内含子的Ｉ／Ｄ多态性经ＰＣＲ扩增可分为三种基因型：纯合缺失型（ＤＤ），纯合插入型（Ｉ），杂合子型（ＩＤ）。血清ＡＣＥ水平在ＤＤ、ＤＩ、Ｉ型分别为２８．３±９．９Ｕ／ｍｌ、２４．５±８．４Ｕ／ｍｌ、１９．２±４．８Ｕ／ｍｌ，即ＤＤ＞ＤＩ＞ⅠⅠ。结果显示，心肌梗塞患者的Ｄ等位基因的频率（０．６１）高于正常对照组（０．４８），Ｐ＜０．０１。认为：ＡＣＥ基因的缺失多态性与中国人血清ＡＣＥ水平及心肌梗塞相关。

关键词：血管紧张素转化酶基因多态性心肌梗塞多态性

来源：评论

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓正常及异常造血细胞增殖及生存特性初探

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中华血液学杂志 1997年第10期18卷 517-520页

作者：李强张之南许彩民王美健沈悌武永吉中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者正常及异常造血细胞的增殖及生存特性。方法：用ＣＤ５９单抗及羊抗鼠ＩｇＧ免疫磁珠将６例患者骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）分选为ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－两群，分别进行体外培养并... 详细信息

目的：探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者正常及异常造血细胞的增殖及生存特性。方法：用ＣＤ５９单抗及羊抗鼠ＩｇＧ免疫磁珠将６例患者骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）分选为ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－两群，分别进行体外培养并与正常对照比较。结果：ＰＮＨ患者ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－ＢＭＭＮＣ的体外增殖及生存能力均弱于正常ＢＭＭＮＣ；患者体内“正常”的ＣＤ５９＋ＢＭＭＮＣ生长能力反较异常的ＣＤ５９－细胞显著降低；患者ＣＤ５９＋细胞培养后出现ＣＤ５９抗原的丢失，正常对照则无此改变。结论：ＰＮＨ患者ＢＭＭＮＣ中ＣＤ５９－的异常造血细胞具有相对的生长优势，ＣＤ５９＋的ＢＭＭＮＣ并非真正“正常”，可能存在尚未明了的某种缺陷；ＰＮＨ发病机制复杂，异常细胞除可因ＰＩＧ－Ａ基因突变产生外，还可能因ＧＰＩ蛋白的丢失而产生。

关键词：血红蛋白尿症 PNA 骨髓 CD59抗原

来源：评论

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人免疫缺陷病毒1型TAT突变蛋白及反义TAT RNA对TAT反式激活作用的抑制

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病毒学报 1997年第1期13卷 6-12页

作者：白龙川袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

Ｔａｔ（Ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）是人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）基因组编码的反式激活因子，突变分析表明它含有几个重要的功能域。为寻找控制ＨＩＶ复制的途径，构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ（－１５８－＋８０）为启动子的Ｔａｔｃ... 详细信息

Ｔａｔ（Ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）是人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）基因组编码的反式激活因子，突变分析表明它含有几个重要的功能域。为寻找控制ＨＩＶ复制的途径，构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ（－１５８－＋８０）为启动子的ＴａｔｃＤＮＡ全长反义表达质粒ｐＡＳ－Ｔａｔ，并用已经构建的以ＨＩＶＬＴＲ－１５８到＋８０为启动子，具有不同突变点的突变Ｔａｔ基因表达质粒，以荧光酶基因为报告基因，共转染Ｊｕｒｋａｔ细胞，结果发现无论是反义Ｔａｔ表达质粒还是突变Ｔａｔ表达质粒，在瞬时转染体系中均能不同程度地抑制Ｔａｔ的活性，其中以ｐＭ５（５２位Ａｒｇ由Ｌｅｕ替代）和反义ＴａｔＲＮＡ的抑制效果最好。结果说明。

关键词：艾滋病毒I型反义Tat RNA 突变Tat蛋白

来源：评论

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