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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

作者：卢丽王湛杜冠华李涛闫峰梁红雁卢圣栋中国医学科学院／中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院／中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院／中国协和医科大学药物研究所中国医学科学院／中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院／中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院／中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院／中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

心衰是在心脏无法维持正常血循环时所表现出的一组综合症。心脏能量学最新研究结果表明, 导致心衰的原因在于心肌细胞自身能量合成能力与心脏为维持正常血循环所必须做的功之间的失衡。在这一研究成果指导下人们发现,原已在临床上用于... 详细信息

心衰是在心脏无法维持正常血循环时所表现出的一组综合症。心脏能量学最新研究结果表明, 导致心衰的原因在于心肌细胞自身能量合成能力与心脏为维持正常血循环所必须做的功之间的失衡。在这一研究成果指导下人们发现,原已在临床上用于治疗心衰的药物(如-受体阻断剂卡维地洛、血管扩张药物曲美他嗪和降糖药乙莫克舍等)均具有改善或优化衰竭心脏能量代谢能力,其作用机制主要是增强“糖酵解”与“三羧酸循环”和“氧化磷酸化”之间的偶联。虽然心钠素多肽也已成功

关键词：心钠素心衰模型基因转移

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靶向融合蛋白GnRH-TNFα的构建、表达及其活性的初步研究

靶向融合蛋白GnRH-TNFα的构建、表达及其活性的初步研究

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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

肿瘤坏死因子α(TNTα)是人体内抗肿瘤作用最强的细胞因子之一,但严重的毒副作用限制了它的临床应用。既往的研究结果表明,促性腺激素释放激素(GnRH)受体是恶性肿瘤治疗中一个很好的攻击靶点,因为发生于乳腺、卵巢和子宫等性激素应答器... 详细信息

肿瘤坏死因子α(TNTα)是人体内抗肿瘤作用最强的细胞因子之一,但严重的毒副作用限制了它的临床应用。既往的研究结果表明,促性腺激素释放激素(GnRH)受体是恶性肿瘤治疗中一个很好的攻击靶点,因为发生于乳腺、卵巢和子宫等性激素应答器官的肿瘤以及肝癌、节直肠癌和胰腺癌等均具有GnRH受体的高表达。我们据此构建了由GnRH的编码序列和TNFα的cDNA共同组成的融合

关键词：放线菌素杀伤率 GnRH-TNF 靶向融合蛋白 TNF 初步研究

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红系分化相关基因的鉴别与功能研究

红系分化相关基因的鉴别与功能研究

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中国遗传学会七届一次青年研讨会暨上海高校模式生物E——研究院第一届模式生物学术研讨会

作者：霍晓芳张俊武中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的红系发生指造血干细胞经一系列分化阶段,最终产生成熟红细胞的过程,它的的启动和进行是多个基因有次序地开启和关闭或表达增强和降低的结果,一旦它们的表达次序受到干扰,将可能导致血液病的发生。K562细胞是从红白血病病人血液中分... 详细信息

目的红系发生指造血干细胞经一系列分化阶段,最终产生成熟红细胞的过程,它的的启动和进行是多个基因有次序地开启和关闭或表达增强和降低的结果,一旦它们的表达次序受到干扰,将可能导致血液病的发生。K562细胞是从红白血病病人血液中分离出的细胞株,形似于红系发育阶段中红系祖先细胞。在药物诱导下可模拟正常红系分化的过程,表现红系分化的特征。为了进一步获得分化过程中相关基因的信息,我们选用K562细胞株,应用改良差异RT-PCR(DDRT-PCR),研究药物诱导的K562细胞在红系分化前后的基因表达差异,寻找红系分化相关基因,最终获得红系分化的调控因子,并研究它们的作用机制。方法培养K562细胞并用氯高铁血红素(Hemin)诱导其向红系分化,收集诱导前及诱导36h后的细胞,用Trizol法提取总RNA,用改进的DDRT-PCR技术分析mRNA差异表达。挑取表达有明显差异的片段,PCR再扩增,T载体克隆并测序。经Northern验证,确定真正差异片段后,再用Northern杂交和Western blot检测其在Heroin诱导后其mRNA和蛋白水平的表达情况。从cDNA中扩增出该基因的全长,分别用pCDNA3.1和pAVU6+27构建过表达质粒和表达抑制质粒,用转染K562细胞,经过G4.18筛选得到稳定转化子后用Hemin诱导,联苯胺染色分析红系分化状态,以确定在红系分化中的作用。结果(1)通过DDRT-PCR技术得到200多条差异带。在NCBI进行BLAST比对,发现这些基因多为信号转导分子、分化相关抗原、细胞凋亡相关分子、肿瘤相关分子、染色质结构蛋白等,还有一些已知cDNA而未知功能的基因和几个新基因。(2)Northern验证了一个在Hemin诱导后明显表达上调的基因Annexinl,为钙依赖的磷脂酶结合蛋白,已知其参与调节细胞生长分化,凋亡等生理病理过程。该基因在红系细胞分化中的作用尚无报告。(3)我们用Northern blot和Western blot杂交证实了它在用Hemin诱导后,随着时间延长其mRNA水平和蛋白水平表达逐渐升高,高峰大约在诱导后36-48小时。(4)两种质粒转染K562细胞后获得的稳定转化子,用RT-PCR和Western blot检测确实实现了该基因的过表达和表达抑制。(5)这些转化子再用Hemin诱导,过表达的转化子联苯胺染色阳性细胞百分比随时间逐渐升高,并且比正常的K562诱导后有所增加,说明了该基因的过表达促进红细胞分化;而表达抑制的转化子联苯胺染色阳性细胞百分比明显减少,表明Annexinl的表达抑制几乎完全阻断了K562细胞的红系分化能力。(6)检测了Annexinl的稳定转化子的ERK1/2和P-ERK1/2的水平,发现过表达的转化子中P-ERK的水平升高,而抑制表达的转化子中P-ERK水平降低。这说明了ERK/MAPK通路与该基因的功能相关。具体机制有待进一步研究。结论通过DDRT-PCR获取许多与红细胞分化相关基因的线索,初步证明了Annexinl在红系分化中具有重要作用。并且发现ERK/MAPK通路参与了Annexinl促进红系分化的作用。这些结果有助于进一步揭示红细胞分化的详细机制,并可能对造血细胞分化相关疾病的治疗提供线索。

关键词：红系分化细胞株红细胞分化相关基因功能研究

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一种新发现的血管生成抑制剂:人载脂蛋白(a)kringleⅣt10-kringleⅤ结构域重组蛋白质在毕赤酵母中的表达

一种新发现的血管生成抑制剂:人载脂蛋白(a)kringleⅣt10-kringle...

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中国蛋白质组学第三届学术大会

作者：申乐陈保生中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的:通过对人载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),Apo(a)]kringleIVt10-kringleV结构域在毕赤酵母中的重组表达,探讨人载脂蛋白(a)kringleIVt10-kringleV结构域对血管生成的抑制效应,为开发新的血管生成抑制剂提供理论依据。方法:通过聚合... 详细信息

目的:通过对人载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),Apo(a)]kringleIVt10-kringleV结构域在毕赤酵母中的重组表达,探讨人载脂蛋白(a)kringleIVt10-kringleV结构域对血管生成的抑制效应,为开发新的血管生成抑制剂提供理论依据。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从人肝组织Apo(a)cDNA中扩增12,382-12,977这一596-bp的kringleIVt10-kringleV片段。在设计上下游引物时分别引入EcoRI和XbaI限制性内切酶位点,将分别经过上述两种限制性内切酶酶切后的PCR产物插入

关键词：重组蛋白质毕赤酵母结构域 a)kringle t10-kringle 抑制剂

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一种同时提取细胞总RNA和总蛋白的方法

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生物技术通讯 2005年第6期16卷 649-650页

作者：董华王军军应天翼李霆王恒樑许彩民中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

应用TRIzol法分步提取总RNA和总蛋白,提取的总RNA亮度强、完整,提取的总蛋白与经常规RIPA裂解液提取的全蛋白的质量相当。验证了从同一批次处理的细胞中同时提取总RNA和总蛋白进行检测分析是可行的,而且确保了实验条件的一致性,缩短了... 详细信息

应用TRIzol法分步提取总RNA和总蛋白,提取的总RNA亮度强、完整,提取的总蛋白与经常规RIPA裂解液提取的全蛋白的质量相当。验证了从同一批次处理的细胞中同时提取总RNA和总蛋白进行检测分析是可行的,而且确保了实验条件的一致性,缩短了实验周期。

关键词： TRIzol法总RNA 总蛋白提取

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一个新的脂肪因子——脂联素的结构与功能的研究进展

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中国动脉硬化杂志 2005年第4期13卷 520-522页

作者：毕楠陈保生中国医学科学院基础医学研究所协和医科大学基础医学院分子生物学国家重点实验室北京市100005

脂联素是脂肪组织特异分泌的一个具有重要功能的细胞因子,在血浆中以多种形式存在,在能量代谢和糖代谢等生理过程中发挥重要的调节作用。本文介绍有关脂联素的分子生物学、结构与功能、特异受体的发现及其与肥胖、胰岛素抵抗和动脉粥样... 详细信息

脂联素是脂肪组织特异分泌的一个具有重要功能的细胞因子,在血浆中以多种形式存在,在能量代谢和糖代谢等生理过程中发挥重要的调节作用。本文介绍有关脂联素的分子生物学、结构与功能、特异受体的发现及其与肥胖、胰岛素抵抗和动脉粥样硬化等关系研究的新进展。

关键词：分子生物学脂联素的结构与功能综述脂肪因子糖脂代谢

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造血干细胞作为基因治疗靶细胞的研究进展

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医学分子生物学杂志 2005年第3期2卷 198-201页

作者：马艳妮张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞,以纠正基因的缺陷或发挥治疗作用,从而达到治疗疾病的目的。造血干细胞具有自我更新能力和可移植性,可在体内长期存活,可使治疗基因在患者体内长期稳定地表达... 详细信息

基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞,以纠正基因的缺陷或发挥治疗作用,从而达到治疗疾病的目的。造血干细胞具有自我更新能力和可移植性,可在体内长期存活,可使治疗基因在患者体内长期稳定地表达,因而具有广泛的应用前景。来源于HIV的慢性病毒载体因为可有效转染处于静止状态的造血干细胞而成为研究热点。造血干细胞的基因治疗技术逐渐成熟且已应用于一些疾病的临床治疗。

关键词：基因治疗造血干细胞慢性病毒载体

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胰岛素样生长因子结合蛋白-6与肿瘤研究进展

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国外医学（肿瘤学分册） 2005年第4期32卷 253-255页

作者：陈照丽陈虹黄秉仁中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生化与分子生物学国家重点实验室北京100005

胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在体内分布广泛,许多肿瘤细胞中都可检测到其表达。细胞学实验证明IGFBP-6可以抑制多种肿瘤细胞的生长,其转录受到某些肿瘤相关转录因子的调控,IGFBP-6还参与介导一些抗肿瘤药物作用的发挥。

关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白质6 抗肿瘤和免疫抑制药肿瘤

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脑源性神经营养因子基因196A／G多态性和阿尔茨海默病关联性分析

脑源性神经营养因子基因196A／G多态性和阿尔茨海默病关联性分析

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中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会

作者：边建涛张俊武张振馨赵华路陈等中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经内科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种涉及中枢神经系统的渐进性退行性疾病,严重威胁老年人身心健康。目前AD的病因尚未完全阐明,一般认为是遗传因素和环境因素相互作用的结果, 遗传因素可能起主要的作用。已经确定了几个与早发性... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种涉及中枢神经系统的渐进性退行性疾病,严重威胁老年人身心健康。目前AD的病因尚未完全阐明,一般认为是遗传因素和环境因素相互作用的结果, 遗传因素可能起主要的作用。已经确定了几个与早发性家族性AD相关的基因,但对于更为常见的散发性AD,载脂蛋白E(apolipoprotein E)ε4等位基因是唯一被确定的遗传风险因子,但它对于AD的发生既不是必需的也不是充分的。其他若干候选基因已被提出,脑源性神经营养因子(BDNF)基因(定位在11p13-p14)就是其中的一个候选基因。

关键词：阿尔茨海默病神经营养因子多态性位点关联性分析

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无汗型外胚层发育不良家系EDA基因突变筛查及产前诊断

无汗型外胚层发育不良家系EDA基因突变筛查及产前诊断

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第六次全国医学遗传学学术会议

作者：赵谨赵秀丽孙淼敖杨张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系、医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系、医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系、医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系、医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系、医学分子生物学国家重点实验室

研究目的 X连锁无汗型外胚层发育不良(XLHED,MIM305100)是一种罕见的遗传性疾病,遗传方式为隐性遗传。临床表现主要为来源于外胚层的结构丧失或数量减少:无汗或少汗、毛发稀少或缺如、牙齿发育不良。致病机制为EDA基因发生突变,导致细... 详细信息

研究目的 X连锁无汗型外胚层发育不良(XLHED,MIM305100)是一种罕见的遗传性疾病,遗传方式为隐性遗传。临床表现主要为来源于外胚层的结构丧失或数量减少:无汗或少汗、毛发稀少或缺如、牙齿发育不良。致病机制为EDA基因发生突变,导致细胞膜蛋白Ectodysplasin-A功能丧失,无法接受TNF的调节从而导致外胚层起源器官的发育异常。本研究对一个EDA家系进行致病基因突变筛查,并通过单体型分析对一致病基因携带女性进行产前诊断。

关键词：产前诊断 EDA 外胚层发育不良突变筛查

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