检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2008年第3期24卷 254-258页

作者：刘朝奇许雪梅徐建青李昆司静懿刘世德三峡大学分子生物学研究所湖北宜昌443003 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L... 详细信息

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型 L1 E7 蛋白表达免疫原性

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内皮抑素和血管生成抑素融合基因的裂解病毒对C6胶质瘤的实验研究

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中华神经外科杂志 2008年第1期24卷 69-72页

作者：王建交杨立庄刘福生金贵善柴奇彭小忠(点评) 北京市神经外科研究所首都医科大学附属北京天坛医院100050 哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨重组单纯疱疹病毒介导的内皮抑素和血管生成抑素（Endo-Angio）融合基因对C6胶质瘤的疗效。方法构建含有Endo-Angio融合基因的重组单纯疱疹病毒，四唑蓝比色法（MTT法）体外观察其C6细胞的裂解作用；Western-blot观察Endo—Angi... 详细信息

目的探讨重组单纯疱疹病毒介导的内皮抑素和血管生成抑素（Endo-Angio）融合基因对C6胶质瘤的疗效。方法构建含有Endo-Angio融合基因的重组单纯疱疹病毒，四唑蓝比色法（MTT法）体外观察其C6细胞的裂解作用；Western-blot观察Endo—Angio融合蛋白的表达。建立大鼠C6模型，当肿瘤体积≥2mm^3时，治疗组瘤腔内注射10^7pfu（10μl）病毒，对照组注射等剂量生理盐水。MRI动态观察肿瘤体积变化，组织病理行微血管计数，并记录荷瘤鼠生存时间。结果体外实验示：当感染率（MOI）=1000时，99％的C6细胞死亡；头部MRI发现治疗组胶质瘤生长减慢；荷瘤鼠存活期：对照组（20．3±0．45）d，治疗组（38．3±0．96）d，中位生存期延长（P〈0．01）；HE染色见瘤细胞分散，体积较小，无出血坏死；病理染色示：治疗组和对照组新生血管均值分别为（5．3±1．7）／HP和（15．6±2．8）／HP（P〈0．01）。结论重组单纯疱疹病毒介导的Endo-Angio融合基因不仅通过抑制肿瘤的新生血管生成，而且通过裂解肿瘤细胞双重作用治疗颅内胶质瘤。

关键词：内皮抑素血管生成抑素血管生成 C6胶质瘤病毒-基因治疗

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NeuroD在神经细胞分化中的调控作用

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医学分子生物学杂志 2008年第3期5卷 278-282页

作者：方洪波张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游... 详细信息

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游基因表达,进而调控细胞周期和神经细胞分化进程。这些研究为NeuroD参与细胞分化进程,糖尿病和其他神经性疾病的发生提供了依据。

关键词： NeuroD 胰腺全反式维甲酸

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人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定

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免疫学杂志 2008年第6期24卷 684-687页

作者：刘惠荣吴刚周冰申乐薛红陈保生内蒙古农业大学生物工程学院生物科学教研室呼和浩特010018 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京市药品不良反应监测中心北京100024

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合。结论成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具。

关键词：磷脂转移蛋白原核表达抗体

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RNA干扰阻断COX-2基因表达对食管鳞状上皮癌EC109细胞株增生和凋亡的影响

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首都医科大学学报 2008年第3期29卷 295-299页

作者：张莉张澍田于中麟李鹏宗晔许彩民华方圆韩兵社首都医科大学附属北京友谊医院消化科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所国家分子生物学实验室

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA... 详细信息

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA干扰的效果,用噻唑兰法定量检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞增生的影响,用流式细胞仪检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞凋亡的影响。结果Westernblot方法证实,RNA干扰后EC109细胞COX-2表达下降至对照组的40%。MTT法检测结果显示,用COX-2基因干扰后,EC109细胞生长抑制作用增强,COX-2基因干扰和阿司匹林联合作用后,肿瘤细胞的生长抑制作用进一步增强。流式细胞仪检测结果显示,母本细胞组和RNA干扰的阴性对照组凋亡率较低,COX-2基因干扰后,促凋亡作用增加。COX-2基因干扰后再给予阿司匹林,促凋亡作用进一步增加。结论RNA干扰特异性抑制细胞COX-2蛋白的表达后,抑制食管鳞癌细胞株EC109的生长增生,增强凋亡作用,阿司匹林和RNA干扰对肿瘤细胞的增生和凋亡可产生协同效果。

关键词：食管鳞状上皮癌环氧化酶-2 阿司匹林凋亡 RNA干扰

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SIRT1对TNFα诱导的RAGE表达的影响

SIRT1对TNFα诱导的RAGE表达的影响

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：张慧娜鲁云彪刘德培中国医学科学院/中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室

糖尿病导致心血管系统各种疾患的易感性增强,如冠心病、高血压等都会随着糖尿病的加重而更加严重。糖尿病所致的各种损伤细胞的通路中终末糖基化产物(AGE)及其受体(RAGE)通路的激活会导致血管内皮细胞ROS增高,炎性反应加重。有报道用RAG... 详细信息

糖尿病导致心血管系统各种疾患的易感性增强,如冠心病、高血压等都会随着糖尿病的加重而更加严重。糖尿病所致的各种损伤细胞的通路中终末糖基化产物(AGE)及其受体(RAGE)通路的激活会导致血管内皮细胞ROS增高,炎性反应加重。有报道用RAGE的抗体或可溶性RAGE(sRAGE)与RAGE结合,竞争性抑制这条通路可以减少动脉粥样硬化斑块的产生。三类去乙酰化酶SIRT1有抗炎、抗凋亡的作用,本研究的日的是考察在人原代血管内皮细胞(HUVECs)中SIRT1对TNFα诱导的RAGE表达的影响。我们用表达野生型SIRT1的腺病毒感染HUVECs,再用TNFα处理后,通过RT-PCR和Western blot技术,观察到SIRT1可以降低TNFα诱导下RAGE的表达,而感染SIRT1干扰的腺病毒及用SIRT1的抑制剂sirtinol处理后会得到相反的结果。荧光素酶报告系统检测分析也显示SIRT1可以降低RAGE-promoter介导的荧光素酶活性,而突变RAGE启动子区的NF-κB结合位点后这种效应减弱,考虑到SIRT1可以通过去乙酰化NF-κB的亚基P65来影响NF-κB的活性,我们用chip实验证实SIRT1可以结合到RAGE启动子区NF-κB的结合元件处。通过CO-IP和IP检测发现在内皮细胞中SIRT1的确可以和P65作用,并且去乙酰化P65。证明SIRT1通过抑制NF-κB活性米降低HUVECs中RAGE的表达。

关键词： SIRT1 RAGE TNFα

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人sirtl对氧化性低密度脂蛋白介导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制的初探

人sirtl对氧化性低密度脂蛋白介导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的...

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：李莉周爽高鹏刘德培中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室

氧化性低密度脂蛋白（OxLDL）在动脉粥样硬化的发生发展过程中发挥重要作用,如诱导巨噬细胞的黏附、趋化及凋亡,以及促进血管平滑肌细胞的增殖与迁移等。Sirt1基因属于sirt基因家族成员,是一种NAD依赖的组蛋白乙酰化酶,它通过与多种转... 详细信息

氧化性低密度脂蛋白（OxLDL）在动脉粥样硬化的发生发展过程中发挥重要作用,如诱导巨噬细胞的黏附、趋化及凋亡,以及促进血管平滑肌细胞的增殖与迁移等。Sirt1基因属于sirt基因家族成员,是一种NAD依赖的组蛋白乙酰化酶,它通过与多种转录因子相互作用,在细胞周期控制,DNA损伤修复,抑制细胞凋亡,调节代谢,延长细胞寿命方面发挥重要作用。Sirt1在调控细胞的增殖和凋亡方面已有诸多报道,同时sirt1的激活剂白藜芦醇（resveratrol）也能对抗多种因素导致的平滑肌细胞的增殖和迁移,因此,我们考察了人sirt1对氧化性低密度脂蛋白介导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用及其分子机制。我们用MTT法检测发现OxLDL（10-100μg/mL）可以诱导VSMC数量显著增加,而在感染Ad-wt-sirt1后与对照Ad-GFP组相比,sirtl过表达能显著抑制OxLDL引起的VSMC增殖（P<0.05）。进一步通过流式细胞仪检测发现,OxLDL （15,50μg/mL）处理的VSMC的G0/G1的值减少,而S期细胞则显著增多,但是感染Ad-sirt1组则刚好相反,OxLDL处理的VSMC的G0/G1的值增多,细胞发生了G0/G1阻滞,同时与对照Ad-GFP组相比,感染Ad- sirt1组能显著抑制OxLDL（50μg/mL）所引起的细胞凋亡。进一步通过Western blot检测发现,在OxLDL刺激后,PCNA表达显著升高,而p27表达显著降低,感染Ad-wt-sirt1使sirt1基因表达增强后,OxLDL刺激所引起的PCNA表达升高及p27表达降低均得到显著抑制。因此,（1）OxLDL可诱导VSMC数量显著增加,sirt1过表达能显著抑制OxLDL（10～100μg/mL）引起的VSMC增殖（P<0.05）。（2）sirt1过表达能使OxLDL（15,50μg/mL）处理的VSMC的G0/G1的值增多,细胞发生G0/G1阻滞。（3）sirt1过表达能显著抑制OxLDL（50μg/mL）所引起的细胞凋亡。（4）sirt1基因对OxLDL所引起的VSMC增殖的抑制作用可通过增强p27的转录,抑制PCNA的表达实现。所以,sirt1可抑制OxLDL所引起的VSMC增殖和凋亡。

关键词： sirt1基因血管平滑肌细胞细胞增殖细胞凋亡

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值得关注的线粒体12SrRNA C1494T突变--药物敏感致聋靶点

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听力学及言语疾病杂志 2008年第6期16卷 446-450页

作者：王秋菊韩明鲲刘晓雯鲍晓林赵亚丽王大勇兰兰赵翠韩东一解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853 国家人类基因组北方研究中心兰州大学第二医院耳鼻咽喉-头颈外科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨线粒体12SrRNA C1494T突变与氨基糖苷类药物致聋的临床表型特征的相关性，警示临床值得关注的又一药物致聋敏感靶点。方法对遗传性聋资源库中两个具有母系遗传特征的耳聋大家系成员进行病史、体检、纯音测听及听性脑干反应检查... 详细信息

目的探讨线粒体12SrRNA C1494T突变与氨基糖苷类药物致聋的临床表型特征的相关性，警示临床值得关注的又一药物致聋敏感靶点。方法对遗传性聋资源库中两个具有母系遗传特征的耳聋大家系成员进行病史、体检、纯音测听及听性脑干反应检查并绘制系谱图。提取耳聋患者的外周血基因组DNA，运用聚合酶链扩增反应（polymerase chain reaction。PCR）方法对耳聋患者线粒体12SrRNA基因1228～1984位序列（涵盖12SrRNA 1494及1555位点）进行扩增，扩增产物纯化后进行限制性酶切鉴定或测序，运用DNAStar软件对测序结果进行比对分析。结果两个家系分别为一个四代相传的母系遗传家系（196家系）和一个三代相传的母系遗传性耳聋家系（1802家系）。196家系发现8名12SrRNA C1494T携带者，其中3名在接触氨基糖苷类药物后出现重度耳聋，成为聋哑人（Ⅱ：2、Ⅱ：5、Ⅲ：2）；2名无耳毒性药物用药史者（Ⅱ：9、Ⅱ：7），表现为高频听力损失，言语发育正常；1名患者25岁时应用链霉素后致重度耳聋，现交流困难（Ⅱ：3）；1名突变者现为2岁幼儿，目前对声音反应正常（Ⅳ：1）；1名为听力正常人（Ⅲ：3），现年28岁。1802家系发现12名耳聋患者，其中7名患者为母系后代，全部为聋哑，配偶聋哑人5名。1802家系中母系后代成员10名（3名男性，7名女性），其中7名为聋哑患者（2名男性，5名女性），3名为听力正常人（1名男性，2名女性）。7名母系后代患者中有4名有明确的耳毒性药物用药史（奎宁、链霉素或庆大霉素），3名用药史不详。2名母系患者进行基因检测发现线粒体12SrRNA C1494T突变。结论本研究通过两个线粒体12SrRNA C1494T突变家系警示线粒体12SrRNA C1494T突变又是一个值得非常关注的药物敏感作用靶点。具有此突变的患者接触氨基糖苷类药物会产生重度耳聋，而未接触该药物者可以是正常听力或是高频听力下降者。临床要高度警示线粒体12SrRNA C1494T突变患者，早发现、早预警可避免聋哑患者的出现。

关键词：线粒体12SrRNA C1494T突变线粒体DNA 氨基糖苷类抗生素母系遗传

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95例前庭水管扩大核心家系SLC26A4基因特异突变图谱

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听力学及言语疾病杂志 2008年第3期16卷 171-177页

作者：赵亚丽王秋菊李庆忠兰兰袁虎纵亮韩明鲲王大勇翟所强解放军总医院耳鼻咽喉一头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所北京100853 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室国家人类基因组北方中心复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻咽喉科

目的探讨中国人群中前庭水管扩大(enlarged vestibular aqueduct,EVA)患者SLC26A4基因突变图谱,为相关基因的筛查及临床应用奠定基础。方法采集95例EVA核心家系,募集84名听力正常者及46名内耳结构正常的听力损失患者作为对照。提取基因... 详细信息

目的探讨中国人群中前庭水管扩大(enlarged vestibular aqueduct,EVA)患者SLC26A4基因突变图谱,为相关基因的筛查及临床应用奠定基础。方法采集95例EVA核心家系,募集84名听力正常者及46名内耳结构正常的听力损失患者作为对照。提取基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增SLC26A4基因的21个外显子,纯化PCR产物后直接测序,使用DNAStar及BioEdit序列比对软件分析SLC26A4基因的突变位点,利用Clustal软件进行同源氨基酸序列比对分析。结果在95例EVA核心家系中,93例发生了SLC26A4基因突变,约占97.9%(93/95)。其中双等位基因突变占88.4%(84/95),单等位基因和未发现突变的家系分别占9.5%和2.1%。93个家系中共发现38种突变,包括23种国际上尚未报道的突变,15种已报突变(5种仅报道于中国家系)。IVS7-2A>G是所有突变中最常见的突变,其在所有突变体中约占57.63%(102/177),75(75/95)个家系发生了此种突变。结论95例中国EVA核心家系的SLC26A4基因调查中,发现了一个中国特异性的SLC26A4基因突变谱:97.9%的中国EVA患者均可检测到SLC26A4基因的突变,双等位基因突变率约为88.4%;23种新的突变和5种仅报道于中国家系的突变在其他人群未曾检测到;IVS7-2A>G为中国人群前庭水管扩大患者最常见的突变。

关键词：前庭水管扩大 SLC26A4 基因突变

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内质网应激介导的细胞凋亡

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生物化学与生物物理进展 2007年第11期34卷 1136-1141页

作者：关丽英许彩民潘华珍中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生物化学与分子生物学国家重点实验室北京100005

内质网是细胞内重要的细胞器,内质网功能的损伤引起ER应激(ERS).内质网通过激活未折叠蛋白质反应(UPR)以保护由内质网应激所引起的细胞损伤,恢复细胞功能,包括暂停早期蛋白质合成、内质网分子伴侣和折叠酶的转录激活、内质网相关性降解(... 详细信息

内质网是细胞内重要的细胞器,内质网功能的损伤引起ER应激(ERS).内质网通过激活未折叠蛋白质反应(UPR)以保护由内质网应激所引起的细胞损伤,恢复细胞功能,包括暂停早期蛋白质合成、内质网分子伴侣和折叠酶的转录激活、内质网相关性降解(ERAD)的诱导.长期过强的内质网应激诱导内质网相关性细胞凋亡,清除受损细胞,包括内质网应激诱导CHOP/GADD153表达、JNK的激活以及caspase-12蛋白水解酶的活化等一系列生物学效应.

关键词：内质网应激未折叠蛋白响应细胞凋亡

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