检索结果-内蒙古大学图书馆

药学学报 2005年第10期40卷 908-911页

作者：郭峰刘彦信郑德先蒋澄宇中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报... 详细信息

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体。将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,最终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物。结果建立了高效的药物筛选细胞模型。此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定。结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选。

关键词：维甲酸受体高通量药物筛选细胞模型

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人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第2期21卷 227-233页

作者：狄旭刘长征陈松森张艳丽邓艳春孙兰杨京医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院北京100005

为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序... 详细信息

为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .

关键词： Gly—hPTH(1—34)衍生物融合表达羟胺切割纯化生物学活性

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人载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体的二级结构和脂质结合能力的比较

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第5期21卷 603-609页

作者：祝学卫吴刚曾武威薛红陈保生中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体... 详细信息

为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体,分别为apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),和apoA-Ⅰ(L195C).观察比较各种野生型及突变apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量和二级结构稳定性及其脂质结合能力.结果显示,野生型apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano和apoA-Ⅰ(L195C)的α螺旋含量分别为54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,和54±1%,各种蛋白的α螺旋含量无显著性差异(P>0.05).野生型apoA-Ⅰ的变性标准自由能(ΔG0D)为10.5kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)和apoA-ⅠMilano的ΔG0D比野生型低2.1kJ/mol;而apoA-Ⅰ(K129C)的ΔG0D比野生型apoA-Ⅰ高1.6kJ/mol.与野生型apoA-Ⅰ相比,apoA-Ⅰ(K129C)和apoA-Ⅰ(L195C)两个突变体与脂质结合能力明显下降(P<0.05),而其它半胱氨酸突变体(包括apoA-ⅠMilano)在脂质结合动力学方面与野生型apoA-Ⅰ无明显差异.以上结果提示,不同位点发生的半胱氨酸突变对apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量无明显影响,但对蛋白的二级结构稳定性和脂质结合能力影响不尽相同.

关键词：人载脂蛋白A—Ⅰ 半胱氨酸突变体 α螺旋含量二级结构稳定性脂质结合能力

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动脉粥样硬化的基础研究

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中华医学杂志 2005年第6期85卷 428-431页

作者：张庆军刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

在中国,随着经济社会的发展,心血管疾病的发病率已经排在各种疾病之首.有人预测,到2020年全球范围内由于心血管疾病造成的死亡数有可能达到总死亡数的36%,从而在人类历史上心血管疾病将首次成为第1位的致死原因[1].所以,心血管疾病是现... 详细信息

在中国,随着经济社会的发展,心血管疾病的发病率已经排在各种疾病之首.有人预测,到2020年全球范围内由于心血管疾病造成的死亡数有可能达到总死亡数的36%,从而在人类历史上心血管疾病将首次成为第1位的致死原因[1].所以,心血管疾病是现在和将来很长一段时间内人类必须面对的最重大的公共卫生问题之一.在心血管疾病中,动脉粥样硬化(atherosclerosis)及其并发症占了相当大一部分.经过长期的研究,人类对于动脉粥样硬化有了很深入的认识,在预防、诊断和治疗方面取得了相当大的进步,但距离战胜它还有很长的路要走。

关键词：心血管疾病动脉粥样硬化并发症公共卫生问题首次致死原因基础研究死亡数发病率人类历史

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粘病毒抵抗蛋白 A 与干扰素治疗病毒性肝炎的研究进展

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中华肝脏病杂志 2005年第12期13卷 957-959页

作者：都特刘英中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室100005

1964年发现A2G小鼠能耐受对其它小鼠致死剂量的流感病毒感染,这种特性是从小鼠16号染色体上单一显性等位基因遗传获得的,因能抵抗副粘病毒(流感)而将其命名为Mx基因.

关键词：干扰素肝炎,病毒性,人粘病毒抵抗蛋白A

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Bcl-2家族蛋白参与调节CD3ε和5-氟尿嘧啶介导的T淋巴细胞凋亡

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中国免疫学杂志 2005年第1期21卷 17-21页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK... 详细信息

目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK、TJK和T3JK细胞 ,诱导细胞凋亡 ,用MTS比色法检测细胞死亡率 ,用Westernblot检测Bid的表达和活化。用脂质体的方法转染细胞。结果 :CD3ε特异的单克隆抗体和 5 FU分别单独处理TJK细胞 ,都能诱导其凋亡并伴随Bid的活化 ,二者联合使用能显著增加TJK细胞凋亡和Bid的活化。Bcl 2过表达可明显降低TJK细胞对 5 FU的敏感性。结论 :Bcl 2家族成员参与CD3ε和 5 FU诱导的T淋巴细胞凋亡的调节 ,Bcl 2过表达能显著抑制T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。

关键词： CD3ε 5-FU Bid Bcl-2 细胞凋亡

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如何命名和书写基因——最新国际人类基因命名和书写规则

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中国医学科学院学报 2005年第1期27卷 128-134页

作者：方福德向若兰杨燕丽中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

在实际工作中我们注意到,国内刊物对基因、蛋白质等生物分子的命名和书写比较混乱,一些专业刊物的编辑也经常询问相关问题。实际上,国际上早就有专门机构负责制定统一的规则和指南。这里着重介绍人类基因的命名和书写的国际通用规则。... 详细信息

在实际工作中我们注意到,国内刊物对基因、蛋白质等生物分子的命名和书写比较混乱,一些专业刊物的编辑也经常询问相关问题。实际上,国际上早就有专门机构负责制定统一的规则和指南。这里着重介绍人类基因的命名和书写的国际通用规则。人类基因的命名由国际人类基因命名委员会(HumanGeneNomenclatureCommittee,HGNC)负责制定和发布。首次发布人类基因命名指南是在1979年,此后每隔几年就会发布新的指南,迄今已达4次,分别在1987、1995、1997和2002年。本文资料主要来源于2002年版本(WainHM,BrufordEA,LoveringRC,etal,Guidelinesf

关键词：基因命名书写

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携带人FL、GM-CSF基因的裸DNA的抑瘤作用

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基础医学与临床 2005年第10期25卷 914-919页

作者：王亚栋张艳丽杨克恭邓艳春苏林罗丝刘长征陈松森中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨可表达人FL和GM-CSF的裸DNA抑制小鼠移植肿瘤生长的作用.方法分别将带有信号肽序列的人FL和GM-CSF基因插入pcDNA3.1/zeo载体,构建分泌表达人FL和GM-CSF的治疗用表达载体,经Sephacryl S1000柱层析法纯化了重组表达质粒.用Western... 详细信息

目的探讨可表达人FL和GM-CSF的裸DNA抑制小鼠移植肿瘤生长的作用.方法分别将带有信号肽序列的人FL和GM-CSF基因插入pcDNA3.1/zeo载体,构建分泌表达人FL和GM-CSF的治疗用表达载体,经Sephacryl S1000柱层析法纯化了重组表达质粒.用Western 印迹和ELISA法检测目的基因在293细胞中的表达,并用TF1细胞验证293细胞表达的GM-CSF的生物学活性.重组表达质粒与脂质体孵育形成复合物,隔天肌肉注射小鼠共6次,每只小鼠接种T细胞淋巴瘤细胞EL-4 2×105后,观察不同基因组合条件下肿瘤的生长情况.结果人FL和GM-CSF在293细胞中表达量分别为50 μg/L和30 μg/L,单用FL或GM-CSF和两者联用对肿瘤生长均有一定抑制作用,在第17天抑制率为30%～40%.联合应用组较单用FL或GM-CSF组更为有效抑制肿瘤生长,但小鼠生存时间并无延长.结论人FL和GM-CSF在293细胞中均获表达,且对肿瘤的早期生长具有一定的抑制作用,两者联合应用效果更为明显,但对小鼠最终生存时间并无影响.

关键词：人FL 人GM-CSF 免疫基因治疗

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哺乳动物日节律基因表达调控研究进展

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基础医学与临床 2005年第7期25卷 587-593页

作者：李然彭小忠曹济民中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理学系北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

生物体机能活动的日节律是一种基本的生命现象。在分子水平上研究日节律的调控机制,有助于更好地认识生命现象,揭示机体适应环境的内在机制,以及提高疾病的诊治水平。生物钟中枢的日节律基因通过分子水平的反馈环路产生节律性振荡,后者... 详细信息

生物体机能活动的日节律是一种基本的生命现象。在分子水平上研究日节律的调控机制,有助于更好地认识生命现象,揭示机体适应环境的内在机制,以及提高疾病的诊治水平。生物钟中枢的日节律基因通过分子水平的反馈环路产生节律性振荡,后者通过一定的信号放大机制统领整个脑和所有外周器官的节律性活动,进而产生整个机体协调一致的日节律。在生物体中,从基因到组织器官乃至系统的功能都与日节律紧密联系,因而日节律机制是生物学的重要研究领域。本文简要综述了哺乳动物生物钟基因表达和调控的有关研究进展。

关键词：日节律生物钟基因日节律基因

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HRV143C蛋白酶在大肠杆菌的融合表达及活性检测

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基础医学与临床 2005年第7期25卷 653-656页

作者：文中伟狄文娜董秀华阴彬强伯勤袁建刚彭小忠中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶。为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶。方法将编码HRV 14 3C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表... 详细信息

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶。为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶。方法将编码HRV 14 3C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经一步GST亲和层析纯化获得GST-3C,再通过体外酶切实验对GST-3C和Thrombin的酶切活性进行比较。结果每升培养产物可获得纯度≥90%的重组融合蛋白约50 mg,重组GST-3C在4℃低温下具有比Thrombin更高的酶活性。结论GST-3C蛋白酶不仅可以应用于融合蛋白的酶切,而且为引入3C蛋白酶识别位点的串联亲和纯化(TAP)系统提供又一种酶切工具。

关键词：人鼻病毒 3C蛋白酶表达纯化

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