检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2025年第5期41卷 995-1005页

作者：莫逊余姗姗贾静陈钰婷彭玉琳王方芳余雄陈荣誉谭万林许晓晓梁露群阮媛媛石明隽王圆圆郭兵贵州医科大学基础医学院病理生理教研室贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室贵州安顺561113 贵阳市第二人民医院贵州贵阳550005

目的:探讨茯苓酸(pachymic acid,PA)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导急性肾损伤(acute kidney injure,AKI)模型小鼠的治疗效果及潜在作用机制。方法:(1)通过数据库筛选PA可能作用与AKI疾病相关的基因,相关基因交集后应用Cytoscap... 详细信息

目的:探讨茯苓酸(pachymic acid,PA)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导急性肾损伤(acute kidney injure,AKI)模型小鼠的治疗效果及潜在作用机制。方法:(1)通过数据库筛选PA可能作用与AKI疾病相关的基因,相关基因交集后应用Cytoscape软件筛选出核心基因,通过DAVID数据库对交集靶点进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析,并对主要核心靶点进行分子对接和活性检测。(2)将100只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照(NC)组、模型(LPS)组、溶剂对照(LPS+DMSO)组、LPS+PA-10治疗组和LPS+PA-20治疗组,每组各20只。模型组腹腔注射18 mg/kg LPS建立LPSAKI模型,治疗组分别腹腔注射10 mg/kg PA和20 mg/kg PA,注射相同剂量的DMSO作为溶剂对照组,24 h后处死小鼠。收集小鼠血清进行生化分析,Western blot检测肾组织中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatin-ase-associated lipocalin,NGAL)、肾损伤分子(kidney injury molecule-1,KIM-1)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、活化的caspase-3(cleaved caspase-3)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattrac-tant protein-1,MCP-1)的蛋白表达量;RT-q PCR检测炎症因子m RNA水平;分子对接模拟PA与caspase-3最佳结合位点;酶活性检测PA对caspase蛋白活性的影响;通过HE染色观察肾脏病变情况;TUNEL染色检测细胞凋亡。结果:(1)通过网络药理学筛选出31个PA抗AKI的潜在作用靶点,GO和KEGG富集分析提示主要富集在免疫反应和炎症过程、细胞凋亡和生存、血管生成和血流动力学、氧化应激和内质网应激,并从中筛选出CASP3(caspase-3的基因)、PTGS2、BCL2、CCL2、CYP219这5个核心基因。(2)PA治疗可改善肾功能和减轻肾小管上皮损伤,显著降低NGAL、KIM-1、cleaved caspase-3蛋白水平,并减少炎症因子TNF-α、IL-1β和MCP-1 m RNA及蛋白表达,减少肾小管上皮细胞凋亡;结合酶活性检测和分子对接结果发现PA是通过与caspase-3直接结合,进而抑制caspase-8对其剪切活化,发挥抗凋亡效应。结论:PA对LPS-AKI具有较好治疗作用,其机制可能与抑制炎症因子合成和释放,同时抑制caspase-8对caspase-3的剪切活化进而减少肾小管上皮细胞凋亡有关。

关键词：茯苓酸脂多糖急性肾损伤炎症因子细胞凋亡

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医学形态学跨学科集体备课实践与思考

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中国高等医学教育 2024年第1期 34-35,39页

作者：赵雨欣倪萍廖礼彬马海梅冯树梅新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830000

医学形态学涵盖多门课程,是基础医学的重要组成部分。医学形态学各课程间存在紧密的内在联系,但各门课程多以单独教授形式开展,造成内容不连贯,衔接不紧密,甚至有重复教授、同时难以高效实现学生对内容的深层次理解,进而难以形成完整的... 详细信息

医学形态学涵盖多门课程,是基础医学的重要组成部分。医学形态学各课程间存在紧密的内在联系,但各门课程多以单独教授形式开展,造成内容不连贯,衔接不紧密,甚至有重复教授、同时难以高效实现学生对内容的深层次理解,进而难以形成完整的知识体系。通过组织医学形态学各学科开展跨学科集体备课,以疾病案例引入各学科相关知识,促使学科交叉的顺畅进行,完善了教学体系,改变了传统备课方式,为教师内涵式教学能力的提升提供平台,也为开展多学科交叉融合性教学奠定基础。

关键词：跨学科集体备课医学形态学

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缺氧诱导因子1-血管内皮生长因子-Notch信号通路参与马蹄内翻足畸形的发生机制

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中国临床解剖学杂志 2022年第1期40卷 62-66页

作者：张真翊陈曦王谦中国医科大学沈阳110122 沈阳医学院基础医学院沈阳110034 中国医科大学生命科学学院医学基因组教研室沈阳110122

目的研究马蹄内翻足畸形发生的分子机制。方法采用HE染色观察两组胎鼠足踝部组织结构差异,免疫组化染色、qRT-PCR和Western blot技术检测模型组和对照组大鼠足踝部组织缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1,HIF-1)、血管内皮生长因... 详细信息

目的研究马蹄内翻足畸形发生的分子机制。方法采用HE染色观察两组胎鼠足踝部组织结构差异,免疫组化染色、qRT-PCR和Western blot技术检测模型组和对照组大鼠足踝部组织缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1,HIF-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及Notch-1表达情况。结果光镜下观察,与对照组相比,实验组足踝部组织结构相对紊乱,组织间隙增大,软组织松散,局部软组织聚集挛缩。免疫组化染色、qRT-PCR和Western blot结果显示,实验组足踝部组织HIF-1表达水平下调,Vegf、Notch-1的表达减少。结论HIF-VEGF-Notch信号通路可能与马蹄内翻足畸形的发生相关。

关键词：缺氧诱导因子1 血管内皮生长因子 Notch信号通路马蹄内翻足模型

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GP35蛋白在牛支原体中互作分子的挖掘

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 151-162页

作者：尹号尤留超黄蓉韩瑞高鹏程支飞杰马轲付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

通过在牛支原体中表达GP35蛋白,利用IP-MS筛选其在牛支原体中的互作分子,将互作分子及GP35蛋白进行原核表达后展开互作验证。结果表明,牛支原体中的IP-MS筛选到了SSB蛋白和RmuC蛋白,前者为参与DNA复制过程的重要蛋白,而后者与DNA重组过... 详细信息

通过在牛支原体中表达GP35蛋白,利用IP-MS筛选其在牛支原体中的互作分子,将互作分子及GP35蛋白进行原核表达后展开互作验证。结果表明,牛支原体中的IP-MS筛选到了SSB蛋白和RmuC蛋白,前者为参与DNA复制过程的重要蛋白,而后者与DNA重组过程相关。完成对GP35、SSB和RmuC蛋白的原核表达后,通过pull-down确定了GP35蛋白与SSB蛋白和RmuC蛋白存在互作关系,结果将有助于解析GP35蛋白在牛支原体中介导重组的机制。

关键词：牛支原体 GP35重组酶互作分子同源重组

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刚地弓形虫致密颗粒蛋白3基因缺陷虫株的构建及毒力鉴定

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中国血吸虫病防治杂志 2025年

作者：王佩豪吴敏敏都建安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室感染性疾病研究中心安徽医科大学人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽医科大学第一附属医院检验科

目的构建刚地弓形虫ME49株致密颗粒蛋白3（dense granule protein 3,GRA3）基因缺陷虫株并鉴定其毒力。方法利用规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白9 [clustered regularly interspaced short palindromic repeats（C RISPR）/CR... 详细信息

目的构建刚地弓形虫ME49株致密颗粒蛋白3（dense granule protein 3,GRA3）基因缺陷虫株并鉴定其毒力。方法利用规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白9 [clustered regularly interspaced short palindromic repeats（C RISPR）/CRISPR-associated protein9,CRISPR/Cas9]技术构建基因缺陷虫株。使用E-CRISPR软件设计向导RNA（guide RNA,gRNA）,利用Q5定点突变试剂盒突变pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒上的gRNA,构建pSAG1::Cas9-U6::sgGRA3质粒。构建一个含有GRA3基因上游序列、乙胺嘧啶抗性基因二氢叶酸还原酶胸苷酸合酶（dihydrofolate reductase-thymidylate synthase,DHFR-TS）和GRA3基因下游序列的GRA3基因供体质粒,并通过PCR扩增出GRA3基因供体DNA。将pSAG1::Cas9-U6::sgGRA3质粒和GRA3基因供体DNA电穿孔转染野生型刚地弓形虫ME49速殖子,电转后的虫株悬液接种于人包皮成纤维（human foreskin fibroblast,HFF）细胞中,并用乙胺嘧啶进行筛选,获得乙胺嘧啶抗性虫株后进行单克隆筛选,采用PCR和Western blotting鉴定弓形虫GRA3基因缺陷单克隆株ME49Δgra3,采用Western blotting检测弓形虫ME49Δgra3株中GRA3蛋白表达水平。将新鲜裂解的弓形虫ME49株和ME49Δgra3株速殖子各1 000个加入接种有HFF细胞的12孔板中,置于37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养7d,以结晶紫染液染色法计数空斑数量。采用吉姆萨染色法对弓形虫ME49株和ME49Δgra3株速殖子感染的HFF细胞染色,计数细胞中含有1、2、4个和>4个弓形虫纳虫泡数量的细胞。比较弓形虫ME49株和ME49Δgra3株感染的C57BL/6小鼠35 d存活率。结果 PCR扩增发现,DHFR-TS基因上、下游同源臂条带在弓形虫ME49Δgra3株中均成功扩增,ME49株未扩增出相应条带;GRA3基因条带在弓形虫ME49株中成功扩增,ME49Δgra3株未扩增出GRA3基因条带但扩增出含DHFR-TS基因的条带。Western blotting检测发现,弓形虫ME49Δgra3株中未见GRA3蛋白表达。弓形虫ME49株平均形成（352.67±26.39）个空斑、ME49Δgra3株平均形成（235.00±26.29）个空斑,差异有统计学意义（t=5.472,P<0.01）。吉姆萨染色结果显示,弓形虫ME49株感染的HFF细胞中,纳虫泡内至少含有4个弓形虫速殖子的比例为（75.67±2.52）%,高于ME49Δgra3株感染组的（59.67±2.31）%（t=8.113,P<0.01）;纳虫泡内含有1个或2个弓形虫速殖子的比例为（24.33±2.52）%,低于ME49Δgra3株感染组的（40.33±2.31）%（t=-8.113,P<0.01）。感染弓形虫ME49株和ME49Δgra3株的小鼠分别自感染后第8、9天开始死亡,感染后第35 d存活率分别为10%（1/10）和70%（7/10）,差异具有统计学意义（χ2=6.762,P<0.01）。结论成功构建了刚地弓形虫ME49Δgra3株,GRA3蛋白可能增强弓形虫ME49株毒力。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白3 基因缺陷规律成簇间隔短回文重复序列及其相关蛋白9 毒力

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组蛋白甲基化转移酶SETD4对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响

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中国病理生理杂志 2023年第2期39卷 259-268页

作者：封慕茵郑阿秀白建荣曾玉梅罗泊涛申志华揭伟广东医科大学基础医学院病理学系广东湛江524023 海南医学院第一附属医院肿瘤内科海南海口570102 海南医学院肿瘤研究所海南海口571199 中山市人民医院病理科广东中山528400

目的:明确组蛋白甲基化转移酶含SET结构域蛋白4 (SET-domain-containing protein 4, SETD4)在临床鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中的表达,分析SETD4对NPC细胞增殖和迁移的影响。方法:采用免疫组织化学法检测86例临床NPC标... 详细信息

目的:明确组蛋白甲基化转移酶含SET结构域蛋白4 (SET-domain-containing protein 4, SETD4)在临床鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中的表达,分析SETD4对NPC细胞增殖和迁移的影响。方法:采用免疫组织化学法检测86例临床NPC标本与对照组30例鼻咽黏膜慢性炎症(nasopharyngeal chronic inflammation,NPI)组织中SETD4蛋白的表达;基于CRISPR/Cas9技术敲除CNE2细胞中SETD4基因,DNA测序结合半定量RTPCR进行鉴定;以SETD4敲除前后的CNE2细胞为研究对象,于倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8实验分析细胞增殖活性、Transwell实验观察细胞迁移能力变化、Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、细胞周期相关蛋白、上皮-间充质转化标志物和组蛋白赖氨酸甲基化的变化,并通过生物信息学富集SETD4相关联的功能和信号通路。结果:SETD4蛋白主要定位于NPC细胞核中,NPC组织中SETD4阳性表达率显著低于NPI对照组(P<0.01)。基于CRISPR/Cas9技术成功敲除了CNE2细胞的SETD4基因,获得基因敲除的纯合子细胞。与野生型(wild-type, WT)细胞株相比,SETD4敲除(knockout, KO)细胞株呈现更明显的梭形和多角形,增殖活性和迁移能力均显著增加(P<0.01),E-cadherin和p21蛋白表达显著下调(P<0.05),而cyclin D1、cyclin E1、Ncadherin和vimentin蛋白表达则显著上调(P<0.05)。此外,与WT组相比,SETD4KO组细胞中H3K4me2、H3K4me3、H3K9me1、H3K27me3、H3K79me2和H4K20me2水平显著降低(P<0.05)。基因集富集结果显示,SETD4与细胞周期的功能和信号通路相关。结论:临床NPC组织中SETD4蛋白的表达减弱或缺失;SETD4表达减弱通过上调细胞周期相关蛋白促进NPC细胞增殖,通过诱导上皮-间充质转化而促进细胞迁移;SETD4影响NPC细胞中H3K4、H3K9、H3K27、H3K79和H4K20多个位点的甲基化。

关键词：鼻咽癌组蛋白甲基转移酶含SET结构域蛋白4 细胞增殖细胞迁移基因集富集

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益智仁-乌药配伍对糖尿病肾病小鼠肾小球细胞外基质的影响及作用机制

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中国老年学杂志 2024年第9期44卷 2127-2133页

作者：尹德辉蔡飘吴珠陈应奇朱叶海南医学院第一附属医院中医科海南海口570102 海南医学院中医学院成都中医药大学基础医学院

目的从细胞外基质(ECM)角度探讨中药益智仁-乌药配伍治疗糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法以C57BL/KSJ-db/db小鼠为DKD研究模型,经缬沙坦[16 mg/(kg·d)]和不同剂量益智仁-乌药[4、8、16 g生药/(kg·d)]干预8 w,这期间每2 w进... 详细信息

目的从细胞外基质(ECM)角度探讨中药益智仁-乌药配伍治疗糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法以C57BL/KSJ-db/db小鼠为DKD研究模型,经缬沙坦[16 mg/(kg·d)]和不同剂量益智仁-乌药[4、8、16 g生药/(kg·d)]干预8 w,这期间每2 w进行血糖检测;8 w后进行24 h蛋白尿检测,采用透射电镜观察肾组织超微结构改变,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术、免疫荧光染色检测肾组织ECM成分:黏连蛋白(Laminin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)和Ⅰ/Ⅳ胶原蛋白(Collagen)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组相比,益智仁-乌药各剂量组空腹血糖水平有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05),益智仁-乌药中剂量组24 h蛋白尿水平明显降低(P<0.01)。益智仁-乌药配伍可明显减轻DKD小鼠肾小球基底膜增厚程度及减少细胞外基质沉积,不同程度降低DKD小鼠肾组织中Laminin、Fibronectin、CollagenⅠ、ⅣmRNA及蛋白表达。结论益智仁-乌药降低DKD小鼠血糖与24 h蛋白尿的作用与减轻肾小球基底膜增厚、降低细胞外基质沉积有关,与调控Laminin、Fibronectin、CollagenⅠ、Ⅳ蛋白表达密切相关。

关键词：糖尿病肾病益智仁乌药细胞外基质

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下调rpl15基因的表达抑制斑马鱼早期造血的发育

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第三军医大学学报 2021年第17期43卷 1611-1618页

作者：周唯君周栋珍彭涛杨懿琛周艳华李化舒莉萍何志旭贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室贵州省再生医学重点实验室基础医学院免疫学教研室贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵阳550004 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州遵义563000

目的探究核糖体蛋白L15(ribosomal protein l15,rpl15)基因表达下调对斑马鱼早期造血发育的影响。方法设计并合成rpl15吗啉代反义寡核苷酸(morphilino antisense oligo,MO),通过显微注射到单细胞期斑马鱼(0~0.75 hpf)的受精卵中来下调rp... 详细信息

目的探究核糖体蛋白L15(ribosomal protein l15,rpl15)基因表达下调对斑马鱼早期造血发育的影响。方法设计并合成rpl15吗啉代反义寡核苷酸(morphilino antisense oligo,MO),通过显微注射到单细胞期斑马鱼(0~0.75 hpf)的受精卵中来下调rpl15的表达,通过qRT-PCR和Western blot技术验证下调rpl15基因表达的有效性。使用体式显微镜分别观察注射rpl15 MO(MO)组与野生型(WT)组的发育情况。O-dianisidine染色检测血红蛋白表达的情况,qRT-PCR检测红系特异性转录因子hbae3、hbbe1的表达变化。全胚原位杂交和qRT-PCR检测红系特异性转录因子gata1、髓系转录因子pu.1、粒系转录因子mpo、定向造血标志转录因子runx1和c-myb、原始祖细胞造血标志物scl和lmo2等早期造血发育过程的关键转录因子的表达变化。TUNEL实验检测造血组细胞的凋亡变化。结果显微注射rpl15 MO能显著下调斑马鱼rpl15的表达,与WT组相比,MO组表现出体节弯曲、发育迟缓、心包水肿等异常表型。MO组血红蛋白合成量与hbae3、hbbe1的表达量相较于WT组明显减少(P<0.05)。原位杂交及qRT-PCR结果表明,gata1的表达明显减少(P<0.05),pu.1、mpo、runx1、c-myb的表达无明显变化,scl的表达明显减少(P<0.01),lmo2的表达无明显变化。TUNEL实验显示造血祖细胞的凋亡无明显变化。结论下调rpl15的表达抑制了斑马鱼早期的造血发育,并可能与gata1和scl表达明显降低有关。

关键词： rpl15 造血发育斑马鱼吗啉代反义寡核苷酸

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多房棘球蚴感染对小鼠脾自然杀伤T细胞及其亚群的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021年第3期39卷 311-317页

作者：李玲慧王伟侯昕伶施阳李德伟李亮王慧李静张传山新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的探讨多房棘球蚴感染对小鼠脾自然杀伤T细胞(NKT)及其亚群的影响。方法24只C57BL/6小鼠随机分为低、中、高感染组和对照组,每组6只。低、中、高感染组每鼠分别经肝门静脉注射50、500、2000个多房棘球蚴原头节,对照组注射等量生理盐... 详细信息

目的探讨多房棘球蚴感染对小鼠脾自然杀伤T细胞(NKT)及其亚群的影响。方法24只C57BL/6小鼠随机分为低、中、高感染组和对照组,每组6只。低、中、高感染组每鼠分别经肝门静脉注射50、500、2000个多房棘球蚴原头节,对照组注射等量生理盐水。感染后2周,无菌条件下取各组小鼠肝脏,制备肝组织切片,常规Masson染色后观察多房棘球蚴病灶和肝纤维化情况;取脾组织制备淋巴细胞悬液,流式细胞术检测NKT细胞不同亚群及分泌细胞因子的水平。结果Masson染色结果显示,感染2周后,对照组小鼠肝无明显变化;低、中感染组小鼠肝组织仅可见少量肉芽肿,炎性反应较弱,向纤维化修复转变;高感染组肝病灶形成较小的生发层结构,周围炎性细胞分布密集,可见纤维结缔增生。中、高感染组脾NKT细胞绝对数分别为(6.32±0.53)×10^(5)、(7.37±1.72)×10^(5),高于对照组的(5.02±1.08)×10^(5)和低感染组的(4.90±1.27)×10^(5)(P<0.01)。中、高感染组分泌γ干扰素(IFN-γ)的脾NKT1型细胞比例分别为(13.93±1.61)%、(10.9±3.04)%,低于对照组的(17.3±3.18)%和低感染组的(19.42±2.82)%(P<0.01);低、中、高感染组分泌IL-4的脾NKT2型细胞比例分别为(5.62±0.58)%、(5.86±1.43)%和(5.92±0.94)%,高于对照组的(4.37±0.83)%(P<0.05);低、中感染组分泌IL-17A的脾NKT17型细胞比例分别为(7.02±1.19)%和(6.62±0.41)%,高于对照组的(4.68±0.73)%和高感染组的(3.73±1.04)%(P<0.01)。中、高感染组脾CD4^(+)NKT细胞绝对数分别为(1.75±0.36)×10^(5)、(1.82±0.24)×10^(5),高于对照组的(1.24±0.26)×10^(5)(P<0.05);高感染组脾DN NKT细胞绝对数为(2.15±0.78)×10^(5),分别高于对照组的(1.27±0.36)×10^(5)、低感染组的(1.20±0.49)×10^(5)和中感染组的(1.43±0.19)×10^(5)(P<0.01)。低、中、高感染组分泌IFN-γ的脾CD4^(+)NKT1型细胞比例分别为(19.42±2.82)%、(14.40±1.81)%、(12.5±2.96)%,低于对照组的(21.16±2.83)%(P<0.01);低、中、高感染组分泌IL-17A的脾CD4^(+)NKT17型细胞比例分别为(18.73±1.99)%、(16.06±1.42)%和(14.41±3.55)%,高于对照组的(10.27±1.79)%(P<0.01)。低、中、高感染组分泌IFN-γ的CD8^(+)NKT细胞比例分别为(10.04±0.92)%、(13.43±0.92)%和(9.24±1.37)%,低于对照组的(15.83±1.59)%(P<0.01);中、高感染组分泌IL-10的脾CD8^(+)NKT细胞比例分别为(4.07±0.48)%、(3.92±0.75)%,高于对照组的(2.85±0.64)%(P<0.05)。中、高感染组分泌IFN-γ的脾DN NKT细胞比例分别为(17.48±2.50)%和(14.06±3.95)%,低于对照组的(25.18±5.78)%(P<0.01)。结论小鼠感染多房棘球蚴后,脾NKT细胞及其亚群发生明显变化,其中低、中感染组小鼠以CD4^(+)NKT17型免疫应答优势对虫体起杀伤和清除作用,高感染组小鼠以CD4^(+)NKT17型、NKT2型和NKT10型细胞亚群的混合优势,且NKT细胞呈抑制性表型,使NKT1型免疫应答能力下降,利于棘球蚴寄生。

关键词：多房棘球蚴脾 NKT细胞 CD4^(+)NKT细胞亚群

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转录因子配对盒基因6对骨髓间充干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化的影响

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中国组织工程研究 2022年第24期26卷 3858-3864页

作者：吴霜邹星星高杰胡蓉苏敏贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州省贵阳市550025

背景:角膜病移植手术面临着角膜供者严重缺乏、术后发生免疫排异反应等诸多问题。在大力倡导角膜捐献的同时,急需找到一种新的替代性的治疗手段。目的:通过优化骨髓间充质干细胞培养条件,探讨转录因子配对盒基因6对骨髓间充质干细胞向... 详细信息

背景:角膜病移植手术面临着角膜供者严重缺乏、术后发生免疫排异反应等诸多问题。在大力倡导角膜捐献的同时,急需找到一种新的替代性的治疗手段。目的:通过优化骨髓间充质干细胞培养条件,探讨转录因子配对盒基因6对骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化的影响。方法:根据细胞形态、成骨成脂分化能力、细胞表面抗原表达鉴定骨髓间充质干细胞及过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞。按照培养细胞和培养基不同进行分组:对照组(骨髓间充质干细胞+完全培养基)、实验组A(骨髓间充质干细胞+条件培养基)、实验组B(骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子)、实验组C(过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞+条件培养基+细胞因子)。诱导5,10 d时采用免疫荧光、流式细胞术检测p63、k14和k12的表达,流式细胞术检测细胞增殖指标Ki-67的表达和细胞凋亡率,Western blot法和RT-PCR法检测配对盒基因6的蛋白和mRNA表达。结果与结论:①诱导培养前,两组细胞均具有骨髓间充质干细胞的特性。②诱导培养后,均出现球型或卵圆形的细胞,呈悬浮生长。4组细胞的角膜缘干细胞样细胞特异性分子p63、k14表达阳性,实验组荧光表达量高于对照组(P<0.05),而角膜上皮分子k12表达阴性。随着培养条件的优化,实验组C的细胞增殖更明显,凋亡细胞更少。诱导5 d时,实验各组配对盒基因6的蛋白及mRNA表达量呈递增变化。③结果表明,条件培养基联合细胞因子诱导可加快骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞分化。过表达配对盒基因6的骨髓间充质干细胞向角膜缘干细胞样细胞定向分化的速度和比例更具有优越性,且其能促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。

关键词：干细胞骨髓间充干细胞角膜缘干细胞配对盒基因6 细胞因子条件培养基

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