检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 1998年第12期43卷 1299-1304页

作者：何亦平刘彦信郑勇刘音杨桂珍刘士廉郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

CD3ε是T细胞抗原受体复合物 (TCR/CD3)的一个成员 ,在此复合物的组装和介导细胞激活信号的传递中起重要作用 ,其信号传递的功能与其胞内区称之为免疫受体酪氨酸依赖的激活基序 (ITAM )有关 .已有报道人CD8分子的膜外区_跨膜区和CD3ε... 详细信息

CD3ε是T细胞抗原受体复合物 (TCR/CD3)的一个成员 ,在此复合物的组装和介导细胞激活信号的传递中起重要作用 ,其信号传递的功能与其胞内区称之为免疫受体酪氨酸依赖的激活基序 (ITAM )有关 .已有报道人CD8分子的膜外区_跨膜区和CD3ε分子的胞内区组成的融合分子 (CD8_ε)能介导T淋巴细胞激活后凋亡 ,表明单独的CD3分子的ITAM可传递细胞凋亡信号 .进一步以CD8_ε为模板和点突变PCR技术制备了其ITAM中酪氨酸 170 ,181分别和同时突变为苯丙氨酸的突变体 ,克隆入真核表达载体 pcDNA3后 ,转染CD8阴性的人白血病TJurkat淋巴细胞 ,获得了分别表达野生型和各突变型CD8_ε融合分子的细胞株 .以抗CD8单抗分别处理这些细胞株 ,发现抗CD8单抗只能诱导表达野生型CD8_ε分子的细胞激活后凋亡 ,而不能诱导任何表达突变型融合分子的细胞凋亡 ,证明CD3ε_ITAM中的 2个酪氨酸对T淋巴细胞激活和凋亡是缺一不可的 .

关键词：细胞凋亡 CD3ε 酪氨酸 T淋巴细胞白血病

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人β^(41/42)地中海贫血基因的转基因小鼠研究

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自然科学进展（国家重点实验室通讯） 1998年第3期8卷 371-376页

作者：李政刘德培刘庆辉郭志晨章秋珩李志杰贾佩臣梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

人β珠蛋白基因簇位于第11号染色体短臂,由5个功能基因组成:5′-ε-G_γ-A_γ-δ-β-3′,其表达具有红系特异性和发育阶段特异性,并且β类珠蛋白基因与α类珠蛋白基因表达的终产物始终维持平衡。这些基因的适宜表达依赖于ε珠蛋白基因... 详细信息

人β珠蛋白基因簇位于第11号染色体短臂,由5个功能基因组成:5′-ε-G_γ-A_γ-δ-β-3′,其表达具有红系特异性和发育阶段特异性,并且β类珠蛋白基因与α类珠蛋白基因表达的终产物始终维持平衡。这些基因的适宜表达依赖于ε珠蛋白基因上游由4个DNaseⅠ高敏感位点(HS)组成的位点控制区(LCR),其中HS2具有主要的增强子活性。

关键词：异常珠蛋白基因贫血基因治疗地中海贫血

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用转基因动物研究珠蛋白基因红系增强子

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蚌埠医学院学报 1998年第5期23卷 291-293页

作者：刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

珠蛋白基因分为α与β两个基因簇，α基因簇位于１６号染色体，以５′ζ２ψζ１ψα２ψα１α２α１θ１３′的顺序排列；β珠蛋白基因簇位于１１号染色体，以５′εＧγＡγψβδβ３′的顺序排列。... 详细信息

珠蛋白基因分为α与β两个基因簇，α基因簇位于１６号染色体，以５′ζ２ψζ１ψα２ψα１α２α１θ１３′的顺序排列；β珠蛋白基因簇位于１１号染色体，以５′εＧγＡγψβδβ３′的顺序排列。两个珠蛋白基因簇的序列均已测定。珠...

关键词：珠蛋白类基因重组转基因动物动物模型

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Construction of an inducible nitric-oxide synthase gene transferring vector mediated by retrovirus

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Acta Pharmacologica Sinica 1998年第2期 26-32页

作者：刘景生臧梦维彭学贤胡萍中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院药理室中国科学院微生物研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：构建逆转录病毒介导的诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转移载体．方法：应用ＤＮＡ重组和ＰＣＲ扩增技术．结果：通过二步克隆，从质粒ｐＫＳｉＮＯＳ分离编码巨噬细胞ｉＮＯＳ的全长ｃＤＮＡ，亚克隆于中间载体ｐＳＰ７２，... 详细信息

目的：构建逆转录病毒介导的诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转移载体．方法：应用ＤＮＡ重组和ＰＣＲ扩增技术．结果：通过二步克隆，从质粒ｐＫＳｉＮＯＳ分离编码巨噬细胞ｉＮＯＳ的全长ｃＤＮＡ，亚克隆于中间载体ｐＳＰ７２，调整插入片段二端酶切位点；进而构建含ｉＮＯＳ基因、巨细胞病毒启动子和ｎｅｏ抗性基因的逆转录病毒载体ｐＬＮＣＸｉＮＯＳ．限制性酶切分析和ＰＣＲ鉴定证实，重组体ｉＮＯＳ插入片段的大小和方向正确．结论：获得含ｉＮＯＳ基因逆转录病毒表达载体，为建立ｉＮＯＳ基因修饰的神经细胞模型，研究ＮＯ／ＮＯＳ在阿片耐受依赖中的作用奠定基础．

关键词：一氧化氮合酶互补DNA 基因表达调控真核细胞重组DNA 逆转录病毒遗传载体限制性酶切图谱聚合酶链式反应

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连接介导PCR及其在体内足迹研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 1997年第3期24卷 224-227页

作者：纪新军刘德培梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接... 详细信息

连接介导聚合酶链反应是以连接反应为基础的单侧PCR技术 ,首先在DNA片段的一端连接上一个公共连接子 ,而后在这个连接子与另一个DNA序列特异的引物间扩增 .Vent聚合酶的使用 ,延伸产物捕获及连接子标记选择策略的采用 ,大大提高了连接介导聚合酶链反应的敏感性 .

关键词：连接介导PCR 连接子体内足迹法聚合酶链反应

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与细胞因子网络相关联的蛋白聚糖

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基础医学与临床 1997年第2期17卷 81-86页

作者：王航中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

与细胞因子网络相关联的蛋白聚糖王航（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院，医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）蛋白聚糖是一类重要而独特的蛋白糖复合物，由带负电荷的糖胺聚糖链通过共价键与... 详细信息

与细胞因子网络相关联的蛋白聚糖王航（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院，医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）蛋白聚糖是一类重要而独特的蛋白糖复合物，由带负电荷的糖胺聚糖链通过共价键与蛋白质连接而成。蛋白聚糖广泛分布于...

关键词：细胞因子网络蛋白聚糖

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基因差异表达的研究方法

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基础医学与临床 1997年第5期17卷 1-10页

作者：潘美辉金虎林袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

基因差异表达的研究方法△潘美辉金虎林袁建刚强伯勤（中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室，北京，１００００５）ＡｂｓｔｒａｃｔＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉ... 详细信息

基因差异表达的研究方法△潘美辉金虎林袁建刚强伯勤（中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室，北京，１００００５）ＡｂｓｔｒａｃｔＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅ...

关键词：基因差异表达研究方法分子生物学

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cDNA3′端代表差异显示分析

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生物工程进展 1997年第3期17卷 52-55,43页

作者：潘美辉金虎林袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理，可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ，或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用，均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端... 详细信息

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理，可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ，或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用，均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端代表扩增子。比较不同条件下的ｃＤ－ＮＡ３′端代表扩增子，可以获得两种或多种细胞中ｍＲＮＡ的表达差异谱，并分离。

关键词： DNA cDNA3'端代表扩增子差异显示分析

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人白细胞介素-15 cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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基础医学与临床 1997年第5期17卷 29-32,28页

作者：沈永泉崔莲仙何维赵庆胡愉刘庆丰巴德年中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥ... 详细信息

从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥＧ法回收其片段并将其连接到ｐＢＳＳＫ载体的ＳｍａⅠ位点上进行序列分析，结果表明其序列与文献报道一致。然后再将其片段亚克隆插入到ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＢａｍＨＩ位点。筛选插入方向正确的克隆，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，以１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ收集菌体直接进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，与阴性对照相比，ＭＷ４４ＫＤ处多出一条带，紫外扫描显示此带占菌体蛋白总量的８．８％。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证实此带能够特异地与兔抗人ＩＬ－１５的抗体发生反应。证明ＲＴ－ＰＣＲ所得的人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得了表达，为进一步探讨人ＩＬ－１５的生物学作用打下基础。

关键词：白细胞介素-15 基因克隆基因表达大肠杆菌

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一种从琼脂糠凝胶中分离DNA的快速方法

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基础医学与临床 1997年第2期17卷 154-155页

作者：潘美辉杨文华袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

本文介绍一种冷冻挤压离心法从琼脂糖凝胶中分离ＤＮＡ片段，适合从０．５％～１．８％的凝胶中分离几十到几万ｂｐ的不同ＤＮＡ，ＤＮＡ回收率与凝胶浓度、ＤＮＡ大小有关，介于２５％～８０％。本方法快速、简单、经济、重复性好，值... 详细信息

本文介绍一种冷冻挤压离心法从琼脂糖凝胶中分离ＤＮＡ片段，适合从０．５％～１．８％的凝胶中分离几十到几万ｂｐ的不同ＤＮＡ，ＤＮＡ回收率与凝胶浓度、ＤＮＡ大小有关，介于２５％～８０％。本方法快速、简单、经济、重复性好，值得推广应用。

关键词：琼脂凝胶电泳冷冻挤压离心 DNA分离分离技术

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