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中国免疫学杂志 2005年第1期21卷 17-21页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK... 详细信息

目的 :研究Bcl 2家族成员在 5 氟尿嘧啶 (5 FU)和CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡中的作用 ,阐述T淋巴细胞凋亡的分子机制 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法 :用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 5 FU(2 5 μg/ml)单独或联合刺激JK、TJK和T3JK细胞 ,诱导细胞凋亡 ,用MTS比色法检测细胞死亡率 ,用Westernblot检测Bid的表达和活化。用脂质体的方法转染细胞。结果 :CD3ε特异的单克隆抗体和 5 FU分别单独处理TJK细胞 ,都能诱导其凋亡并伴随Bid的活化 ,二者联合使用能显著增加TJK细胞凋亡和Bid的活化。Bcl 2过表达可明显降低TJK细胞对 5 FU的敏感性。结论 :Bcl 2家族成员参与CD3ε和 5 FU诱导的T淋巴细胞凋亡的调节 ,Bcl 2过表达能显著抑制T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。

关键词： CD3ε 5-FU Bid Bcl-2 细胞凋亡

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抗Aβ人源融合抗体在毕赤酵母中的高效表达纯化及性质研究

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中国生物工程杂志 2005年第6期25卷 40-44页

作者：刘立颖许士奇赵雪梅杜洪震张伟梁平中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学研究院病理室北京100005 承德医学院微生物与免疫学教研室承德067000

抗β-淀粉样多肽(Aβ)的抗体对老年性痴呆(AD)病变有清除作用,人源融合抗体由可识别结合Aβ的多肽序列A与人抗体Fc段连接重组构成。构建的单拷贝表达载体PA0815-αAFc,可以在毕赤酵母中高效表达。此表达载体含有一个AFc表达单元,并在受... 详细信息

抗β-淀粉样多肽(Aβ)的抗体对老年性痴呆(AD)病变有清除作用,人源融合抗体由可识别结合Aβ的多肽序列A与人抗体Fc段连接重组构成。构建的单拷贝表达载体PA0815-αAFc,可以在毕赤酵母中高效表达。此表达载体含有一个AFc表达单元,并在受严格调控的醇氧化酶启动子的控制下由甲醇诱导表达,并利用α因子前导肽引导融合抗体分泌。载体线性化后整合入甲醇营养型酵母Pichia pastoris(Pp)GS115基因组中,经鉴定表达单位具有良好的遗传稳定性。对筛选得到的高分泌表达融合抗体的细胞株进行表达和培养条件的优化,使诱导上清液中融合抗体的产量选到100mg/L。利用Protein A层析柱分离、纯化,获得纯度较高的融合抗体。经鉴定分析其具有正确的分子量和N末端,且融合抗体可与Aβ抗原结合并能吸引巨噬细胞吞噬和清除抗原抗体复合物,具有抗体生物学活性。这是首次利用甲醇营养型酵母表达系统成功实现了抗Aβ融合抗体的高效分泌表达及产物纯化鉴定,为进一步研究AD及其治疗提供了新的途径。

关键词：抗β-淀粉样多肽人源融合抗体甲醇营养型酵母表达系统阿尔茨海默病免疫治疗纯化性质

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植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠凝血及纤溶功能的影响与补充外源性17β-雌二醇的比较(英文)

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中国临床康复 2005年第27期9卷 195-197页

作者：王雯朱广瑾首都医科大学病理生理学教研室北京市100054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系北京市100005

背景:天然植物雌激素α-玉米赤霉醇具有与雌激素类似的抗动脉粥样硬化作用,且副作用明显低于雌激素,有一定的应用前景。目的:探讨补充外源性17β-雌二醇及植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠凝血及纤溶功能的影响,并对二者的药物作用... 详细信息

背景:天然植物雌激素α-玉米赤霉醇具有与雌激素类似的抗动脉粥样硬化作用,且副作用明显低于雌激素,有一定的应用前景。目的:探讨补充外源性17β-雌二醇及植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠凝血及纤溶功能的影响,并对二者的药物作用进行比较分析。设计:观察对比实验。单位:首都医科大学病理生理学教研室和中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系。材料:实验于2003-07/09在首都医科大学实验动物科学部完成。选择36只12周龄健康雌性Wistar大鼠,体质量(250±10)g,清洁级,随机分为4组,假手术对照组、去卵巢组、去卵巢+17β-雌二醇组及去卵巢+α-玉米赤霉醇组各9只。方法:假手术对照组开腹而不摘除卵巢。去卵巢组在无菌条件下摘除双侧卵巢复制去卵巢动物模型。去卵巢+17β-雌二醇组和去卵巢+α-玉米赤霉醇组分别在去卵巢14d后肌注17β-雌二醇(1mg/kg)和α-玉米赤霉醇(1mg/kg),3d注射1次,共35d。实验结束后大鼠经颈总动脉采血,分离血浆备用。用凝固法测定血浆凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间。用全自动生化分析仪测定血浆纤维蛋白原水平。用酶联免疫吸附法测定血浆组织因子水平。组织型纤溶酶原激活剂及纤溶酶原激活剂抑制物活性测定均采用发色底物法。同时分离子宫,计算子宫质量与体质量的比值。主要观察指标:①血浆凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、血浆纤维蛋白原水平、血浆组织因子水平、组织型纤溶酶原激活剂活性及纤溶酶原激活剂抑制物活性。②子宫质量/体质量的比值。结果:36只大鼠全部进入结果分析。①凝血酶原时间变化:去卵巢组显著短于假手术对照组(P<0.01);补充17β-雌二醇和补充α-玉米赤霉醇后长于去卵巢组(P<0.05～0.01)。②纤维蛋白原和组织因子水平变化:去卵巢组显著高于假手术对照组(P<0.05～0.01);补充17β-雌二醇和补充α-玉米赤霉醇后低于去卵巢组(P<0.05～0.01)。③组织型纤溶酶原激活剂活性变化:去卵巢组显著低于假手术对照组犤(0.33±0.33)μkat/L,(4.00±1.50)μkat/L,(q=9.43,P<0.01)犦。补充17β-雌二醇和补充α-玉米赤霉醇后犤(1.83±0.67)μkat/L,(1.17±0.83)μkat/L犦显著高于去卵巢组(q=13.50,P<0.01;q=5.00,P<0.05)。④纤溶酶原激活剂抑制物活性变化:去卵巢组显著高于假手术对照组犤(2.33±0.67)μkat/L,(1.17±0.33)μkat/L,(q=10.5,P<0.01)犦。⑤子宫质量/体质量比值:去卵巢+α-玉米赤霉醇组明显低于去卵巢+17β-雌二醇组犤0.66,1.96,(q=14.67,P<0.01)犦。结论:补充外源性17β-雌二醇或α-玉米赤霉醇后,均可使去卵巢大鼠重新建立起凝血-纤溶的动态平衡,表明α-玉米赤霉醇具有同17β-雌二醇相似的心血管保护作用,且其致子宫增生的副作用明显小于17β-雌二醇,是一种有一定应用前景的雌激素替代药物。

关键词：卵巢切除术雌二醇凝血酶原纤维蛋白溶酶原

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植物雌激素α-玉米赤霉醇对HUVEC组织因子基因表达的转录调控作用

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基础医学与临床 2005年第6期25卷 539-542页

作者：王雯刘伟祖淑玉朱广瑾张立克首都医科大学病理生理学教研室北京100054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系北京100005

目的探讨植物雌激素α玉米赤霉醇(ZAL)影响血管内皮细胞组织因子(TF)基因表达的转录调控机制,并与内源性动物类雌激素17β联雌二醇(17β联estradiol,E2)进行比较分析。方法进行人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养,利用基因重组技术构建4... 详细信息

目的探讨植物雌激素α玉米赤霉醇(ZAL)影响血管内皮细胞组织因子(TF)基因表达的转录调控机制,并与内源性动物类雌激素17β联雌二醇(17β联estradiol,E2)进行比较分析。方法进行人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养,利用基因重组技术构建4个含人TF基因5′上游不同长度序列的荧光素酶报告基因质粒,用脂质体转染法分别转入以下6组细胞:①正常对照组;②10-7molLE2刺激组;③10-7molLZAL刺激组;④10-6molLAngⅡ刺激组;⑤10-7molLE2+10-6molLAngⅡ刺激组;⑥10-7molLZAL+10-6molLAngⅡ刺激组;测定细胞裂解液中荧光素酶比活性(relativeluciferaseactivity,RLA)的变化。结果转染pGL3TF171+71的各组细胞RLA均较低,不同刺激组之间无显著差异;AngⅡ可使质粒pGL3TF593+71,pGL3TF316+71,pGL3TF236+71荧光素酶表达大量增加,E2、ZAL均可不同程度地抑制AngⅡ的上述效应,2者间无显著差异。结论含有1个NFκB位点和2个AP1位点的-236bp～-171bp区域在E2或ZAL影响TF基因转录中有重要作用。

关键词： α-玉米赤霉醇植物雌激素基因表达 HUVEC 调控作用血管内皮细胞组织因子 estradiol mol/L 人脐静脉内皮细胞 activity 转录调控机制报告基因质粒基因重组技术脂质体转染法荧光素酶表达抑制AngⅡ 正常对照组细胞裂解液

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成人心房肌细胞的急性分离和电生理学鉴定

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中国病理生理杂志 2005年第11期21卷 2286-2288页

作者：黄兵曹济民陈雷刘振伟左明章李立环卫生部北京医院麻醉科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理研究室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院麻醉科北京100037 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的介绍一种适用于成人的心房肌细胞膜片钳研究的急性分离方法,并对所分离的细胞进行电生理学鉴定。方法采用两步酶解与机械分离相结合的方法制备成年人心房肌细胞标本,应用倒置显微镜初步观察细胞形态、数目后,用全细胞膜片钳技术鉴... 详细信息

目的介绍一种适用于成人的心房肌细胞膜片钳研究的急性分离方法,并对所分离的细胞进行电生理学鉴定。方法采用两步酶解与机械分离相结合的方法制备成年人心房肌细胞标本,应用倒置显微镜初步观察细胞形态、数目后,用全细胞膜片钳技术鉴定细胞的电生理学特性。结果分离的细胞呈多种形态,其中有良好折光性、细胞膜完整、有清晰横纹的杆状细胞约占50%-60%,计算出11例独立实验分离出的此类细胞获得率为(57.2±3.1)%;具有正常的电生理学特性,能够诱发出人心房肌细胞上主要的Na+、K+通道混合电流以及心房肌细胞特有的超快速激活钾通道电流(IKur)。结论实验数据表明该方法分离的细胞保持有其典型的通道特性,并证明其具有实用、快速和高效的特点,适用于人心房肌细胞的电生理学和电药理学研究,有良好的可行性。

关键词：心肌分离膜片钳术电生理学

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一氧化氮与Alzheimer病(综述)

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中国神经免疫学和神经病学杂志 2005年第1期12卷 29-30,40页

作者：张世仪薛越强中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生理系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院分子生物学系北京100005

目的　概述了在Alzheimer病(AD)脑内一氧化氮(NO)可能介导胶质细胞激活后对神经元的损伤,参与炎性变化的毒性机制。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在AD脑的胶质细胞和微血管内高表达,同时又在神经元内出现。而反应性胶质细胞内既有 iNOS的激... 详细信息

目的　概述了在Alzheimer病(AD)脑内一氧化氮(NO)可能介导胶质细胞激活后对神经元的损伤,参与炎性变化的毒性机制。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在AD脑的胶质细胞和微血管内高表达,同时又在神经元内出现。而反应性胶质细胞内既有 iNOS的激活又有神经元型NOS(nNOS)激活,共同产生过量的、具有神经毒性的NO。

关键词：一氧化氮一氧化氮合酶 β-淀粉样肽 Alzheimer病

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脂联素缺乏与糖尿病心脏并发症

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生理通讯 2005年第2期24卷 40-41页

作者：叶刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生理系，北京100005

脂肪组织过去一直被认为仅仅是体内的—个能量储存池。然而，近十年来的研究表明，它还是机体重要的内分泌器官之一。它所分泌的一些激素对胰岛素的敏感性及其生理过程起着重要的调节作用，脂联素(Adiponectin)就是其中重要的一种。它于... 详细信息

脂肪组织过去一直被认为仅仅是体内的—个能量储存池。然而，近十年来的研究表明，它还是机体重要的内分泌器官之一。它所分泌的一些激素对胰岛素的敏感性及其生理过程起着重要的调节作用，脂联素(Adiponectin)就是其中重要的一种。它于1995被发现后，

关键词：脂联素缺乏糖尿病心脏病并发症内分泌激素胰岛素

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羊瘙痒因子263K经灌胃感染仓鼠动物模型的建立

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西安交通大学学报（医学版） 2005年第2期26卷 119-123页

作者：张瑾陈岚肖新莉张宝云韩俊高建梅姜慧英刘勇董小平西安交通大学医学院陕西西安710061 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

目的　胃肠感染是大多数动物类传染性海绵状脑病(TSE)传播的最主要途径。建立羊瘙痒因子263K灌胃感染仓鼠动物模型,并研究其发病特征。方法　Scrapie 263K毒株低剂量和高剂量经灌胃途径接种金黄仓鼠,在终末期取脑组织,用HE染色观察病理... 详细信息

目的　胃肠感染是大多数动物类传染性海绵状脑病(TSE)传播的最主要途径。建立羊瘙痒因子263K灌胃感染仓鼠动物模型,并研究其发病特征。方法　Scrapie 263K毒株低剂量和高剂量经灌胃途径接种金黄仓鼠,在终末期取脑组织,用HE染色观察病理变化,免疫组化法检测PrPSc 的组织沉积特点, Western blot 检测PrPSc 分子特征。结果　低剂量灌胃组仅一只动物发病,高剂量组所有接种动物均发病,潜伏期较颅内注射组明显延长。在脑组织中观察到典型的病理改变;PrPSc免疫组化检测显示弥漫性沉积于脑组织,主要累及脑干、大脑皮层深层、小脑,基本与病理学改变累及的区域一致;Western Blot检测发现感染动物脑提取物出现可抵抗蛋白酶消化的PrPSc条带,与颅内注射组脑组织提取物中PrPSc电泳性状完全一致。结论　羊瘙痒因子263K灌胃可成功引起动物发病,与颅内注射比较,潜伏期、神经病理变化和PrPsc沉积均有不同,可能受到感染途径的影响。

关键词：羊瘙痒病 263K 灌胃 PrP^Sc

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组蛋白赖氨酸甲基化在表观遗传调控中的作用

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医学分子生物学杂志 2005年第1期2卷 34-37页

作者：盛德乔(综述) 张业(审阅) 沈珝琲(审阅) 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

组蛋白赖氨酸的甲基化在真核基因表观遗传调控中起着关键作用。迄今已知,在组蛋白H3中有5个赖氨酸(K4、K9、K27、K36、K79)和组蛋白H4中的1个赖氨酸(K20)可被特异的组蛋白赖氨酸甲基转移酶甲基化。这不同位点的甲基化效应是不同的,H3-K9... 详细信息

组蛋白赖氨酸的甲基化在真核基因表观遗传调控中起着关键作用。迄今已知,在组蛋白H3中有5个赖氨酸(K4、K9、K27、K36、K79)和组蛋白H4中的1个赖氨酸(K20)可被特异的组蛋白赖氨酸甲基转移酶甲基化。这不同位点的甲基化效应是不同的,H3-K9、H3-K27、H4-K20甲基化具有抑制效应;H3-K4、H3-K36、H3-K79甲基化具有激活效应,而且组蛋白甲基化与其它组蛋白共价修饰之间以及DNA甲基化之间存在对话。

关键词：组蛋白赖氨酸甲基化组蛋白赖氨酸甲基转移酶表观遗传调控阻遏激活

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电针治疗缺血缺氧新生大鼠对海马神经元尼氏体的影响

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郑州大学学报（医学版） 2005年第2期40卷 271-273页

作者：李宛青吴爱群刘伟高艳郑州师范高等专科学校生命科学系郑州450044 第二军医大学解剖学教研室上海200433 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所解剖学与组织胚胎学系北京100005 郑州大学基础医学院人体解剖学教研室郑州450052

目的:探讨电针刺激缺血缺氧新生大鼠“百会”、“大椎”穴对海马神经元尼氏体的影响。方法:42只出生7d的Wistar大鼠,随机分为3组。假手术组(n=10)不进行缺血缺氧处理,缺血缺氧组(n=16)及电针治疗组 (n=16)制备成缺血缺氧模型,后者... 详细信息

目的:探讨电针刺激缺血缺氧新生大鼠“百会”、“大椎”穴对海马神经元尼氏体的影响。方法:42只出生7d的Wistar大鼠,随机分为3组。假手术组(n=10)不进行缺血缺氧处理,缺血缺氧组(n=16)及电针治疗组 (n=16)制备成缺血缺氧模型,后者于造模成功后同时电针刺激“百会”、“大椎”2穴,1次/d,10d1个疗程,共2个疗程,间隔2d。常规饲养22d后,取左侧脑组织制成石蜡切片,进行尼氏染色,并用图像分析仪测灰度阈值。结果:与假手术组比较,缺血缺氧组尼氏体大量脱失;电针治疗组尼氏体脱失现象较缺血缺氧组减轻。尼氏体灰度阈值电针治疗组为(135.19±7.00),缺血缺氧组为(188.31±10.43),2者相比,差异有统计学意义(P<0.05);后者亦高于假手术组(122.90±12.10)(P<0.05)。结论:电针治疗可减轻缺血缺氧对神经元尼氏体的损害。

关键词：电针缺血缺氧 “百会”穴 “大椎”穴尼氏体

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