检索结果-内蒙古大学图书馆

阿尔采末病淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)双重基因稳定转染细胞系的建立

中国药理学通报 2004年第5期20卷 508-511页

作者：梁平潘扬杏赵雪梅杜洪震张冀民中国医学科学院基础医学研究所病理室中国协和医科大学基础医学院北京100005 美国哈佛大学医学院神经疾病研究中心

目的　构建APP751和PS 1(M14 6L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ,以用于 β 分泌酶或γ 分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选。方法　从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增野生型和突变型PS 1(M14 6L)基因 ,... 详细信息

目的　构建APP751和PS 1(M14 6L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ,以用于 β 分泌酶或γ 分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选。方法　从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增野生型和突变型PS 1(M14 6L)基因 ,并重组克隆到PCI neo质粒 ,用脂质体 (Lipo fectAmine)法将野生型和突变型 (M14 6L)PS 1转染至含APP751表达基因的CHO细胞 ,选择培养液筛选能稳定表达目的基因的CHO细胞株。用免疫沉淀和ELISA测定分析细胞表达产物。结果　建立了数株能表达Aβ和PS 1的CHO细胞。在转染细胞株中高表达的SP 1为全长 4 5kd的PS 1蛋白 ;野生型PS 1和突变型PS 1(M14 6L)以及单纯APP751转染的CHO细胞株均可分泌Aβ多肽 ,且突变型PS 1(M14 6L)转染的细胞株分泌到条件培养液中的Aβ1～ 42 比其它细胞株增加了近两倍。结论　突变型PS 1(M14 6L)的高表达可促使Aβ1～ 42 的分泌增加。我们建立的PS 1和APP双重基因稳定转染的CHO细胞株模型 ,可用于 β 分泌酶或γ

关键词： β-淀粉样变多肽早老素-1 β-或γ-分泌酶基因转染

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p38MAPK——控制阿尔采末病进程的新靶点

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中国药理学通报 2004年第5期20卷 595-598页

作者：王抒孙兰杜冠华中国医学科学院.中国协和医科大学基础医学院药理室北京100005 中国医学科学院.中国协和医科大学药物研究所国家药物筛选中心北京100050

阿尔采末病 (AD)是严重威胁老龄人的一类神经退行性疾病 ,其病理学特征包括 :淀粉样斑块沉积、神经元纤维缠结形成、突触和神经元的丢失以及脑内炎症。促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)家族的成员之一 p38MAPK在AD发病和进展中有多重作用 ,... 详细信息

阿尔采末病 (AD)是严重威胁老龄人的一类神经退行性疾病 ,其病理学特征包括 :淀粉样斑块沉积、神经元纤维缠结形成、突触和神经元的丢失以及脑内炎症。促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)家族的成员之一 p38MAPK在AD发病和进展中有多重作用 ,包括p38在AD模型中激活的证据、p38与AD各项病理标志和炎症、神经元凋亡、tau过磷酸化等重要病理生理过程的联系 ,由此阐明了 p38作为AD治疗干预靶点的基础和根据。

关键词：阿尔采末病 MAPK p38MAPK 神经退行性变 tau 神经元纤维缠结

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美国大都市医疗反应系统及其对我国公共卫生体系建设的启示

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中华预防医学杂志 2004年第4期38卷 276-278页

作者：张慧黄建始胡志民中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院流行病教研室北京100050 中国协和医科大学

20世纪90年代以来,美国从国家安全的高度防备潜在的生物、化学和放射性物质的恐怖袭击,投入了大量的资金建设和完善突发公共卫生事件应对体系[1].大都市医疗反应系统(metropolitan medical response system, MMRS)就是其中的一个重要组... 详细信息

20世纪90年代以来,美国从国家安全的高度防备潜在的生物、化学和放射性物质的恐怖袭击,投入了大量的资金建设和完善突发公共卫生事件应对体系[1].大都市医疗反应系统(metropolitan medical response system, MMRS)就是其中的一个重要组成部分,涉及公共卫生、突发事件的管理、执法监督、医疗服务、科研机构和第一现场应急人员(如消防员、救护人员等),是一个多学科全方位的综合反应系统[2]。

关键词：美国都市医疗反应系统公共卫生体系建设中国

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体外培养细胞工作中支原体污染及对策

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中华病理学杂志 2004年第6期33卷 571-572页

作者：刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理学系北京100005

一、细胞培养中常见的污染问题　　由不同细胞、不同组织器官构成的哺乳动物,其细胞在整体存活时,互相调节、互相依赖,有很好的内环境平衡稳定系统,有特化的应对外来微生物感染、致病因子作用的免疫系统.细胞生活在温度、pH、离子强度... 详细信息

一、细胞培养中常见的污染问题　　由不同细胞、不同组织器官构成的哺乳动物,其细胞在整体存活时,互相调节、互相依赖,有很好的内环境平衡稳定系统,有特化的应对外来微生物感染、致病因子作用的免疫系统.细胞生活在温度、pH、离子强度、营养成分等相对稳定的状态下.哺乳类细胞在体外培养成活本身就是一项研究.科学家模仿并尽可能创造接近体内的环境,成功地在实验室中培养了各种哺乳类细胞,是20世纪很重要的成就。

关键词：体外培养细胞体内内环境微生物感染哺乳类致病因子免疫系统哺乳动物特化存活

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SARS冠状病毒棘突蛋白的S1蛋白诱导小鼠产生中和抗体的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第3期18卷 258-260页

作者：张云杨帆李妍涵李文辉涂新明魏强朱桦刘力王恒秦川袁国勇何维王树惠中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病原室北京100005 中国医学科学院血液病研究所美国哈佛大学肿瘤研究所中国医学科学院实验动物研究所香港大学微生物系

目的　研究SARS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1的免疫原性 ,为SARS的实验诊断和新型疫苗的研究提供依据。方法　用克隆有哺乳动物细胞密码子优化的SARS CoVS1基因的质粒pcDNA3 1 S1或P S1Ig转染 2 93T细胞 ,用细胞的上清液纯化S1蛋白。... 详细信息

目的　研究SARS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1的免疫原性 ,为SARS的实验诊断和新型疫苗的研究提供依据。方法　用克隆有哺乳动物细胞密码子优化的SARS CoVS1基因的质粒pcDNA3 1 S1或P S1Ig转染 2 93T细胞 ,用细胞的上清液纯化S1蛋白。以pcDNA3 1 S1质粒对BALB c小鼠进行 2次基因免疫 ,以纯化的S1蛋白进行加强免疫。用ELISA法检测小鼠抗SARS CoV的特异性IgG抗体 ,并在VeroE6细胞上做体外中和实验 ,检测中和抗体。结果　S1蛋白诱导小鼠产生抗SARS CoV的特异性抗体 ;1∶14 99 6 8稀释的S1蛋白免疫的小鼠血清可保护 5 0 %的细胞对 10 0 0TCID50 的病毒攻击 ,而阴性对照血清不能保护细胞对病毒的感染。结论　SARS冠状病毒棘突蛋白受体结合部位S1能有效诱导机体产生具有高效保护作用的中和抗体免疫反应 ,可望发展成为理想的SARS棘突蛋白亚单位疫苗。

关键词：棘突蛋白小鼠中和抗体诱导 SARS冠状病毒细胞 S1基因新型疫苗稀释

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恶性疟原虫类巨噬细胞迁移抑制因子基因的克隆和表达

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 515-518页

作者：韩志富邵丁丁王恒中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原系分子寄生虫学实验室北京100005

目的克隆、表达恶性疟原虫的巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)同源基因Pfmif。方法参照人MIF基因(Humif)氨基酸序列在***基因组中找到同源核苷酸序列,设计特异引物,采用RT-PCR方法从恶性疟原虫3D7株红内期RNA扩增获得Pfmif基因;利用生物信息... 详细信息

目的克隆、表达恶性疟原虫的巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)同源基因Pfmif。方法参照人MIF基因(Humif)氨基酸序列在***基因组中找到同源核苷酸序列,设计特异引物,采用RT-PCR方法从恶性疟原虫3D7株红内期RNA扩增获得Pfmif基因;利用生物信息学软件分析所扩增的基因;原核表达重组PfMIF蛋白,并亲和纯化。结果从恶性疟原虫RNA中扩增到Pfmif基因,长度为351bp,编码116个氨基酸,具有MIF家族蛋白的典型特征。成功的表达及纯化了融合有GST标签的重组PfMIF蛋白。结论获得来自恶性疟原虫的MIF同源基因,初步确定PfMIF是MIF家族的一个新成员。

关键词：恶性疟原虫巨噬细胞迁移抑制因子基因克隆原核表达

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小分子干扰RNA(siRNA)表达载体沉默靶基因的研究

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解剖学报 2004年第6期35卷 607-611页

作者：马鹏鹏葛晔华郭睿马静陈平薛社普韩代书中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

目的　研究siRNA表达载体在体外培养细胞中对目的基因的干扰作用 ,建立利用RNA干扰技术研究基因功能的平台。　方法　构建针对β actin基因的表达siRNA载体 ,转染HeLa细胞 ,然后在mRNA水平、蛋白水平和细胞形态水平评价siRNA表达载体对 ... 详细信息

目的　研究siRNA表达载体在体外培养细胞中对目的基因的干扰作用 ,建立利用RNA干扰技术研究基因功能的平台。　方法　构建针对β actin基因的表达siRNA载体 ,转染HeLa细胞 ,然后在mRNA水平、蛋白水平和细胞形态水平评价siRNA表达载体对 β actin基因表达的抑制作用。　结果　siRNA表达载体可以有效的抑制体外培养细胞 β actin基因的表达 ,使 β actin基因的mRNA和蛋白表达量显著下降 ,细胞形态发生显著变化。　结论siRNA表达载体可以在体外培养细胞中有效的沉默 β actin基因 ,为研究基因功能提供了一个快速、有效的系统。

关键词：小干扰RNA RNA干扰哺乳动物细胞 β-actin基因

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人造血增效因子在大肠杆菌中的表达及其生物学作用

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中华血液学杂志 2004年第11期25卷 666-670页

作者：齐春梅杨克恭陈松森张艳丽邓艳春苏林王亚栋罗丝刘长征罗庆良熊国林中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 军事医学科学院放射医学研究所

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3... 详细信息

目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达 ,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性。用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成。选用恒河猴 8只 ,随机分为两组 ,每组4只 :一组为单次皮下注射重组hSCF 5 0 0 μg/kg ,另一组为皮下注射rhG CSF 10 μg·kg-1·d-14d后 ,单次注射rhHSF 5 0 0 μg/kg。观察恒河猴外周血CD34+ 细胞、CFU GM数目以及血常规。结果　测序证实合成的hHSF序列与设计一致 ,构建的重组表达载体 pET30a hHSF在E .coli中获高效表达 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。目的蛋白纯度达 95 %以上 ,N端前 10个氨基酸序列分析结果与预期一致 ;相对分子质量为 75 4 0 ;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致。恒河猴实验结果表明 ,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+ 细胞、CFU GM和中性粒细胞数分别在用药后 3h ,1h和 4 5min达高峰 ,动员幅度分别为用药前检测值的 16 .3倍、1.9?

关键词：动员恒河猴外周血 CFU-GM 中性粒细胞 CD34^+细胞人造血高效表达 E.coli 重叠PCR

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2型糖尿病KKA^y模型小鼠肾脏中TGF-β及其受体和细胞外基质蛋白表达的关系

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基础医学与临床 2004年第4期24卷 422-427页

作者：陈丽萌李学旺黄利伟林嘉友李艳中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室北京10005

探讨 2型糖尿病动物模型KKAy 小鼠肾脏细胞外基质蓄积的原因和TGF β及其受体的关系。 15只KKAy 小鼠和 18只C5 7BL J小鼠 ,分成 3组 ,分别于 16、2 0和 2 4周处死动物 ,常规测体重、肾功能、血脂和尿蛋白 ,取肾皮质常规切片、染色 ,观... 详细信息

探讨 2型糖尿病动物模型KKAy 小鼠肾脏细胞外基质蓄积的原因和TGF β及其受体的关系。 15只KKAy 小鼠和 18只C5 7BL J小鼠 ,分成 3组 ,分别于 16、2 0和 2 4周处死动物 ,常规测体重、肾功能、血脂和尿蛋白 ,取肾皮质常规切片、染色 ,观察肾脏病理改变。用免疫组化和免疫印迹法检测不同周龄的KKAy 小鼠及参照组C5 7BL J小鼠肾皮质TGF β1及TGF βⅠ、Ⅱ型受体的表达 ,并用RT PCR方法检测肾皮质细胞外基质Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白(fibronectin ,FN)mRNA水平。KKAy 小鼠 16周龄以后便开始出现明显的肥胖、高血糖、高胰岛素血症和蛋白尿 ,符合2型糖尿病早期肾病特点。其FN和Ⅳ型胶原mRNA表达都比同龄参照组C5 7BL J小鼠高 2～ 4倍 ,其中以 16周时最为显著 ,FN为 1 5 3± 0 4 6比较 0 6 3± 0 16 (P <0 0 0 1) ;Ⅳ型胶原为 5 0 8± 1 92比较 1 2 1± 0 2 5 (P <0 0 1)。KKAy 小鼠肾小球内TGF β1及TGF βⅠ型受体的水平明显低于C5 7BL J小鼠 ,而Ⅱ型受体表达却高于C5 7BL J小鼠。2型糖尿病KKAy 小鼠早期肾病时 ,肾皮质细胞外基质合成增加 ,与TGF βⅡ型受体表达增加有关。

关键词：小鼠 2型糖尿病肾皮质 TGF-β 表达 Ⅱ型受体 Ⅳ型胶原细胞外基质蛋白 BL mRNA水平

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EGF作用下人脑胶质瘤细胞生长抑制的机理

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中国医学科学院学报 2004年第2期26卷 139-144页

作者：王欣周明锐黄秉仁蔡良琬中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的克隆、测序胶质细胞瘤 BT325细胞在生长抑制量表皮生长因子 (epithelial growth factor EGF)作用下差异表达的基因,了解 BT325细胞生长抑制的分子机制。方法在生长抑制量 EGF 作用下,用差异显示反转录聚合酶链反应 (differential ... 详细信息

目的克隆、测序胶质细胞瘤 BT325细胞在生长抑制量表皮生长因子 (epithelial growth factor EGF)作用下差异表达的基因,了解 BT325细胞生长抑制的分子机制。方法在生长抑制量 EGF 作用下,用差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reversed transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR ) 技术分析人胶质细胞瘤 BT325细胞表达水平明显差异的 cDNA , 对差异显示基因进行序列测定和同源比较 , 并用 Dot blot及 Northernblot等方法进行验证。结果在 EGF 作用下,生长抑制的胶质瘤细胞中出现一些上调和下调表达的 cDNA 片段。克隆、分离了 6个表达明显上调的 ESTs,1个序列为新的基因片段,另 5个与已知基因有不同程度的同源,其中 1个与转醛缩酶基因的编码区同源。新近的研究已发现,转醛缩酶与细胞凋亡有关。结论高剂量 EGF 可诱导 BT325中许多基因表达水平的改变,EGF 抑制 BT325细胞生长可能与促进转醛缩酶基因的表达而诱导细胞凋亡有关。

关键词：胶质细胞瘤BT325 差异显示反转录聚合酶链反应表皮生长因子基因表达

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