检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2002年第2期29卷 307-310页

作者：张艳丽陈松森杨克恭狄旭熊安琪张友鸿中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合... 详细信息

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法 ,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上 ,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白 ,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白 .利用此法筛选到人Flt3配体 (hFL)的甲醇酵母高表达转化子 ,液体诱导表达量约 2 0mg L .ELISA结果证明 ,原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关 .蛋白质印迹结果显示 ,培养上清在 2 5ku处有明显杂交条带 ,而对照组杂交呈阴性 ,且表达量随诱导天数增加 .原位双膜法是一种良好的筛选方法 ,可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子 .

关键词：原位双膜法人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子表达巴斯德毕赤酵母

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细胞生物学

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中华医学杂志 2002年第24期82卷 1722-1724页

作者：章静波狄凯军中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室北京100005

自1998年Thomson等成功地从人胚泡培养成功胚胎干细胞(embryonic stem cell)以及Gearhart从人胚胎生殖嵴的原始生殖细胞中分离和培养多能性(pluripotency)干细胞之后，人们立即认识到干细胞生物技术具有的特殊科学意义和临床应用前景，... 详细信息

自1998年Thomson等成功地从人胚泡培养成功胚胎干细胞(embryonic stem cell)以及Gearhart从人胚胎生殖嵴的原始生殖细胞中分离和培养多能性(pluripotency)干细胞之后，人们立即认识到干细胞生物技术具有的特殊科学意义和临床应用前景，并且很快成为生命科学研究的热点以及细胞生物学最主要的课题。《Science》连续2年将其评为最重要的研究进展之一，而且排在基因组研究之前。干细胞的概念由来已久，是指存在于胚胎、胎儿和成年动物组织，终生具有多种分化潜能和自我更新能力的细胞。

关键词：细胞生物学神经干细胞血液干细胞

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修饰后中国山东地方株HPV16 E6E7基因的转化活性检测及免疫原性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 427-432页

作者：许雪梅张明策罗利群刘晓娟朱明昭司静懿郭秀婵宋国兴中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生物物理室中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所免疫室中国医学科学院中国协和医科大学预防医学科学院病毒所

目的　利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型 (HPV16 )E6E7基因 ,研制HPV16DNA疫苗。方法　定点突变E6的终止密码 ,并保证E7读码框架不变 ;定点突变E7蛋白的Rb结合区中对其转化活性维持起关键作用的... 详细信息

目的　利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型 (HPV16 )E6E7基因 ,研制HPV16DNA疫苗。方法　定点突变E6的终止密码 ,并保证E7读码框架不变 ;定点突变E7蛋白的Rb结合区中对其转化活性维持起关键作用的第 2 4位氨基酸。突变修饰后的基因命名为fmE6E7。PCR扩增fmE6E7,重组入pLNCX载体 ,脂质体法转染 3T3细胞 ,免疫荧光组织化学及Westernblot检测转染细胞蛋白的表达。经软琼脂集落培养法和BALB c裸鼠皮下接种法检测fmE6E7的转化活性。然后PCR扩增fmE6E7,构建pVR10 12 fmE6E7真核表达质粒 ,于C5 7BL 6小鼠肌肉内直接进行裸DNA免疫 ,51 Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性 ,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。结果　测序证实获得了预期的突变结果。pLNCX fmE6E7转染细胞体外软琼脂培养 3周未见集落形成 ;裸鼠皮下接种 2月后未见移植瘤形成 (0 3)。免疫鼠获得了较好的E7特异性的抗体E和抗原特异性的CTL。结论　修饰后E6E7基因可融合表达 ,转化活性消除的同时还可诱发特异的细胞免疫和体液免疫 ,表明中国山东地方株的E6E7基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因。

关键词：免疫原性人乳头瘤病毒16型 E6基因 E7基因 DNA疫苗细胞毒性T淋巴细胞宫颈癌

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F-box蛋白家族的功能研究进展

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生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 503-505页

作者：吴静彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

F box蛋白是一类含有F box基序 (motif) ,在泛素介导的蛋白质水解过程中具有底物识别特性的蛋白质家族 .这类蛋白质在细胞时相转换、信号传导、发育等多种生理过程中都具有重要功能 .

关键词： F-box蛋白家族功能研究进展底物识别特异性

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长白猪精原细胞的分离和纯化

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解剖学报 2002年第6期33卷 662-664页

作者：俞作仁孙晓冬关纪奎薛社普韩代书中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系北京100005

目的　分离和纯化猪的精原细胞 ,从而对与人类具有高同源性的猪的精子发生进行研究。　方法　酶消化法制备 2月龄未成熟长白猪睾丸组织的单细胞悬液 ,以 2 %～ 4 %牛血清白蛋白 (BSA)连续梯度作为分离介质 ,采用重力沉降法并结合细胞贴... 详细信息

目的　分离和纯化猪的精原细胞 ,从而对与人类具有高同源性的猪的精子发生进行研究。　方法　酶消化法制备 2月龄未成熟长白猪睾丸组织的单细胞悬液 ,以 2 %～ 4 %牛血清白蛋白 (BSA)连续梯度作为分离介质 ,采用重力沉降法并结合细胞贴壁培养的方法分离精原细胞。　结果　重力沉降法分离细胞后所获精原细胞纯度为 91% ,进一步经过贴壁培养纯化后 ,精原细胞纯度达到 94 2 %。　结论　该方法方便、快捷 ,分离效果好 ,能满足在分子水平研究精原细胞的需要。

关键词：长白猪精原细胞纯化细胞分离重力沉降法生殖生物学

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延髓最后区对犬消化间期移行性复合运动的调节作用

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中华医学杂志 2002年第3期115卷 384-388页

作者：王礼建周吕田瑞中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院生理研究室北京100005　　

目的　探讨延髓最后区对胃肠消化间期移行性复合运动（MMC）及血浆胃动素水平的影响.方法　在8只犬的胃窦和十二指肠浆膜埋植应力传感器记录胃窦和十二指肠消化间期复合运动.在一侧股静脉内置慢性静脉插管供注射外源性胃动素.用RIA法测... 详细信息

目的　探讨延髓最后区对胃肠消化间期移行性复合运动（MMC）及血浆胃动素水平的影响.方法　在8只犬的胃窦和十二指肠浆膜埋植应力传感器记录胃窦和十二指肠消化间期复合运动.在一侧股静脉内置慢性静脉插管供注射外源性胃动素.用RIA法测定血浆胃动素含量.观察：（1）消化间期正常MMC活动和血浆胃动素浓度变化；（2）电损毁延髓最后区对MMC活动和血浆胃动素水平的影响；（3）电损毁延髓最后区对外源性胃动素启动MMC Ⅲ相收缩作用的影响.结果　（1）正常犬消化间期出现典型的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ相*** Ⅲ相与血浆胃动素释放高峰同步发生.（2）电损毁延髓最后区后, 胃窦和十二指肠MMC的收缩运动明显抑制,MMC Ⅰ相延长,Ⅱ、Ⅲ相明显缩短,失去了损毁前MMC周期性﹑时相性和移行性的特点,血浆胃动素浓度明显降低,外源性静脉注射胃动素不能启动MMC Ⅲ相收缩.结论　延髓最后区对消化间期 MMC的周期发生和移行有重要的调控作用,其作用途径与胃动素介导有关.

关键词：消化间期移行性复合运动延髓最后区胃动素

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粉防己碱诱导人红白血病细胞凋亡的研究

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解剖学报 2002年第5期33卷 530-533页

作者：狄凯军周建平章静波中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室北京100005

目的　探讨粉防己碱诱导人红白血病细胞 (K56 2 )凋亡的作用。　方法　采用光镜、电镜、免疫荧光观察K56 2 细胞形态的改变 ,以流式细胞仪分析细胞周期 ,以ABC法检测细胞中Bcl 2和p5 3蛋白的改变 ,以TUNEL法检测细胞凋亡。　结果　K56 2... 详细信息

目的　探讨粉防己碱诱导人红白血病细胞 (K56 2 )凋亡的作用。　方法　采用光镜、电镜、免疫荧光观察K56 2 细胞形态的改变 ,以流式细胞仪分析细胞周期 ,以ABC法检测细胞中Bcl 2和p5 3蛋白的改变 ,以TUNEL法检测细胞凋亡。　结果　K56 2 细胞经粉防己碱诱导 4 8h后 ,出现细胞凋亡早期形态学改变 ;流式细胞仪显示细胞DNA合成受到抑制 ;ABC法检测出细胞中Bcl 2水平降低和p5 3水平升高 ;TUNEL法原位检测揭示有DNA断裂。结论　粉防己碱可抑制K56 2 细胞的生长 ,其作用与浓度相关。

关键词：粉防己碱人红白血病细胞作用机制细胞凋亡

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狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗的联合免疫研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 403-406页

作者：李文辉张云隋建华杨帆郭彩云王树蕙中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原生物学研究室北京100005

目的　研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法　构建狂犬病毒糖蛋白 (GP)的真核表达质粒pcDNA3.1 CVS N2cGP作为核酸疫苗 ,瞬时转染COS 7细胞 ,间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1 CVS N2cGP的... 详细信息

目的　研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法　构建狂犬病毒糖蛋白 (GP)的真核表达质粒pcDNA3.1 CVS N2cGP作为核酸疫苗 ,瞬时转染COS 7细胞 ,间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1 CVS N2cGP的表达 ;以基因枪方法进行初次免疫接种和首次加强免疫 ,以表达同一抗原的复制缺陷型重组腺病毒通过鼻腔接种进行第二次加强免疫 ;ELISA试验检测血清狂犬病毒特异性IgG抗体 ,快速荧光灶抑制试验 (RFFIT)检测狂犬病毒中和抗体。结果　间接免疫荧光试验表明pcDNA3.1 CVS N2cGP能有效地表达GP于转染的细胞膜上 ,ELISA试验表明小鼠接受基因枪核酸免疫后 ,仅诱导产生低水平的特异性抗体 ,而用重组腺病毒进行加强免疫后 ,特异性抗体水平显著提高。结论　联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同种抗原核酸疫苗可克服它们单独使用时各自的缺点 ,能有效地诱导小鼠产生抗狂犬病毒特异免疫。

关键词：糖蛋白核酸疫苗重组腺病毒联合免疫狂犬病毒狂犬病特异免疫

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高密度脂蛋白诱导内皮细胞系差异表达基因的研究

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中华医学杂志 2002年第13期82卷 921-923页

作者：张文成陈保生曾武威白玲薛红吴纲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表... 详细信息

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表达明显差异的cDNA。对差异基因进行序列测定和同源性比较 ,Northern印迹分析部分差异基因的表达情况。结果　HDL诱导ECV 30 4细胞出现一些上调和下调表达的cDNA ,差异表达明显的已知基因有 9个 ,其中上调表达的基因包括STE2 0样激酶、PBK1蛋白、转谷氨酰胺酶、肌球蛋白轻链、apobec 1结合蛋白、DAP蛋白 ;下调表达的基因有核糖体蛋白L7a (RPL7A)、线粒体外膜电压依赖性阴离子通道蛋白基因、甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶。差异表达明显的未知基因 4个。Northern印迹证实 ,转谷氨酰胺酶基因表达上调5 0 % ,apobec 1结合蛋白基因表达上调 70 %。结论　HDL可诱导ECV 30 4细胞转谷氨酰胺酶、apobec 1结合蛋白表达水平上调。这两个基因表达水平的升高可能与HDL抗动脉粥样硬化作用相关。

关键词：高密度脂蛋白逆转录聚合酶链反应 HDL 基因表达动脉粥样硬化

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心钠素基因的突变及对其利尿活性的影响

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中华医学杂志 2002年第19期82卷 1324-1327页

作者：李涛梁红雁闫峰卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学北京100005

目的　提高心钠素的生物学活性。方法　通过改造心钠素基因、构建突变型心钠素基因的逆转录病毒载体以及用肌内注射法将突变型和非突变型心钠素基因表达载体的裸DNA分别导入阿霉素诱导的肾病大鼠体内 ,以对其突变前后的利尿活性进行比... 详细信息

目的　提高心钠素的生物学活性。方法　通过改造心钠素基因、构建突变型心钠素基因的逆转录病毒载体以及用肌内注射法将突变型和非突变型心钠素基因表达载体的裸DNA分别导入阿霉素诱导的肾病大鼠体内 ,以对其突变前后的利尿活性进行比较研究。结果　获得了结构和功能两方面均符合预期的突变型心钠素基因。与空载体组相比 [87± 7 1pg/ml(n =6 ) ],突变和野生型心钠素基因组大鼠 (n =6 )血浆中的心钠素浓度均在试验开始后的第 5d明显升高 ,分别为 10 7± 7 8pg/ml(t =4 6 5 ,P <0 0 1)和 113± 8 6pg/ml(t =5 71,P <0 0 1)。两个试验组大鼠的尿量在试验开始后的第 5d就明显增多 ,有效期达 15d以上。突变型心钠素基因的作用更强 ,其大鼠在第 5、10和 15d时的尿液增长量分别是野生型心钠素组的 1 6、2 0和 1 9倍。结论　所获突变型心钠素基因的利尿作用明显增强。

关键词：利尿活性心钠素基因疗法逆转录病毒载体心力衰竭

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