检索结果-内蒙古大学图书馆

γδT细胞的抗原识别机制

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中国免疫学杂志 1999年第10期15卷 433-435页

作者：何维中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫室北京100005

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短重复序列PCR产物变性胶电泳影子带新解——正负链电泳行为的差异

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中华医学遗传学杂志 1999年第5期16卷 328-330页

作者：赵红珊黄尚志李辉梁承宇袁波中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学遗传室北京100005

目的　探讨短重复序列ＰＣＲ产物变性胶的电泳影子带形成机理，并设法消除影子带。方法采用ＰＣＲ和不对称ＰＣＲ，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳观察影子带产生的情况。结果　利用不对称ＰＣＲ，某些二核苷酸（ＣＡ）ｎ ... 详细信息

目的　探讨短重复序列ＰＣＲ产物变性胶的电泳影子带形成机理，并设法消除影子带。方法采用ＰＣＲ和不对称ＰＣＲ，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳观察影子带产生的情况。结果　利用不对称ＰＣＲ，某些二核苷酸（ＣＡ）ｎ重复序列的影子带减少一半，四核苷酸重复序列的影子带消除；正负链的电泳速度有差异。结论　正负链电泳行为的差异是影子带产生的原因之一，利用不对称ＰＣＲ可部分或完全消除影子带。

关键词：遗传病诊断聚合酶链反应影子带不对称

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甲状旁腺素对鼠成骨细胞胶原合成的影响

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中华医学杂志 1999年第10期79卷 785-786页

作者：韩志岩程锦轩刘景生中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院药理室北京100005

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逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第3期31卷 15-20页

作者：臧梦维沈琦汪青刘景生彭学贤中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院、医学分子生物学国家重点实验室中国科学院微生物研究所

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８... 详细信息

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８１５神经细胞，获得Ｇ４１８抗性克隆，命名为ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞。ＤＮＡ印迹杂交、ＰＣＲ扩增及ＲＴＰＣＲ和蛋白质免疫印迹杂交分析，证实ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞有外源ｉＮＯＳ基因整合、转录和表达；ＮＡＤＰＨ黄递酶（ＮＡＤＰＨｄｉａｐｈｏｒａｓｅ，ＮＡＤＰＨｄ）组化和免疫组化染色表明，胞质中有ｉＮＯＳ基因功能表达；酶催化活性和ＮＯ－２含量均明显升高；重组酶具有天然酶生化和药理特性，即ＮＡＤＰＨ依赖性，Ｃａ２＋非依赖性和Ｃａ２＋螯合剂抗性以及ＮＯＳ抑制剂使酶活性降低，呈剂量相关性；ｉＮＯＳ基因表达使ＮＯｃＧＭＰ系统上调。成功地建立ｉＮＯＳ基因修饰神经细胞株，为寻找治疗阿片耐受和依赖的新药创造了条件。

关键词：一氧化氮合酶逆转录病毒环磷酸鸟苷神经母细胞瘤细胞株

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反转录病毒载体介导的人β-珠蛋白基因在小鼠体内整合和表达的实验研究

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中华医学杂志 1999年第2期79卷 121-124页

作者：翟锦彬刘德培王晶陈迪郑勇梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用... 详细信息

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用回体（ｅｘｖｉｖｏ）基因转移策略，分析人β珠蛋白基因在小鼠体内的整合及表达。结果病毒重组体的病毒滴度在“乒乓”超感染后有明显提高，最高病毒滴度约为１×１０６ＣＦＵ／ｍｌ；在小鼠ＣＦＵＳ１２（第１２天脾结节）中检测到２个重组体中人β珠蛋白基因的整合，表达水平约为内源性鼠α珠蛋白基因的０５％～５％。在２只长期造血重建小鼠的骨髓、脾、胸腺及另一只小鼠的骨髓及脾中整合有人β珠蛋白基因，在一只重建小鼠的骨髓和脾中有人β珠蛋白基因表达，约为鼠α珠蛋白基因的７％。结论反转录病毒载体介导的人β珠蛋白基因可稳定整合在小鼠骨髓造血干细胞中。

关键词：珠蛋白基因表达 β地中海贫血

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舒喘灵对缺氧大鼠肺动脉高压和肺组织肾上腺素能β_2受体mRNA表达的影响

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中国病理生理杂志 1999年第3期15卷 193-196页

作者：丁耀贤王晓芳薛全福王立荣斯琴中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理生理研究室

目的：研究β２激动剂舒喘灵对缺氧大鼠肺动脉高压及肺β２受体ｍＲＮＡ的作用。方法：常压缺氧４周，同时用舒喘灵灌胃（５ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），用肺动脉插管测压，用ＲＴ－ＰＣＲ术测肺β２受体ｍＲＮＡ。结果：缺氧同... 详细信息

目的：研究β２激动剂舒喘灵对缺氧大鼠肺动脉高压及肺β２受体ｍＲＮＡ的作用。方法：常压缺氧４周，同时用舒喘灵灌胃（５ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），用肺动脉插管测压，用ＲＴ－ＰＣＲ术测肺β２受体ｍＲＮＡ。结果：缺氧同时给舒喘灵可减轻缺氧大鼠肺动脉高压、右心室压及右心室肥厚，同时使降低的β２受体ｍＲＮＡ回升到对照水平，动脉血氧分压不受影响，对体动脉压无明显作用。结论：舒喘灵能防止缺氧引起的肺动脉高压和肺肾上腺素能β２受体ｍＲＮＡ水平的降低。

关键词：肺动脉高压缺氧舒喘灵肾上腺素能 β2受体

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小鼠红细胞分化去核相关因子(MEDDF)cDNA克隆及全序列分析

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科学通报 1999年第6期44卷 618-622页

作者：章正琰刘世广马静章静波薛社普中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室北京100005

以小鼠脾红细胞减除杂交克隆得到的分化相关特异cDNA片段为探针 ,用噬菌体原位杂交结合PCR鉴定的方法 ,从小鼠中晚幼红细胞cDNA文库中筛选出一个阳性cDNA克隆 .将其亚克隆至pBluescript SK载体上测序 ,结果表明该cDNA为小鼠红细胞分化... 详细信息

以小鼠脾红细胞减除杂交克隆得到的分化相关特异cDNA片段为探针 ,用噬菌体原位杂交结合PCR鉴定的方法 ,从小鼠中晚幼红细胞cDNA文库中筛选出一个阳性cDNA克隆 .将其亚克隆至pBluescript SK载体上测序 ,结果表明该cDNA为小鼠红细胞分化去核相关因子(MEDDF)cDNA全序列 .该序列全长为 5 0 5bp ,其中有一个起始于第 5 3位 ,终止于第 3 5 9位的开放阅读框架 ,编码区长 3 0 9bp ,共编码 10 2个氨基酸和一个终止密码 ,其 5′端起始密码ATG附近的碱基序列符合真核生物基因的Kozak顺序 ,第 462位有一加尾号AATAA ,3′端有一个由2 6个腺苷酸组成的PolyA尾 .根据GenBank最新资料检索 ,这一小鼠的红细胞分化相关基因为一未见报道的新序列 (GenBankAccessionNumber:BankIt180 846AF0 60 2 2 0 ) .经Northern印迹分析发现 ,该cDNA仅在与造血相关的器官及中晚幼红细胞中表达 ,提示它是一个与小鼠红细胞终末分化相关的新基因 .

关键词： MEDDF 红细胞分化 cDNA 序列分析克隆

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血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞整合素β3表达的影响

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中国病理生理杂志 1999年第3期15卷 200-202页

作者：王华沈传陆郭恒怡吴其夏中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病理生理教研室

目的和方法：本实验采用细胞ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ的方法分别从蛋白质和ｍＲＮＡ水平对血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）作用下的内皮细胞表面整合素β３的表达进行检测。结果：１０－８ｍｏｌ／Ｌ～１０－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａｎｇ－Ⅱ在蛋... 详细信息

目的和方法：本实验采用细胞ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ的方法分别从蛋白质和ｍＲＮＡ水平对血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ－Ⅱ）作用下的内皮细胞表面整合素β３的表达进行检测。结果：１０－８ｍｏｌ／Ｌ～１０－５ｍｏｌ／Ｌ的Ａｎｇ－Ⅱ在蛋白质水平能够促进内皮细胞整合素β３表达（Ｐ＜０．０５），且呈剂量依赖性。１０－６ｍｏｌ／Ｌ的Ａｎｇ－Ⅱ作用培养的人脐静脉内皮细胞１８ｈ后，细胞整合素β３ｍＲＮＡ量为正常对照组的１５倍。结论：提示Ａｎｇ－Ⅱ促进内皮细胞表面整合素β３的表达可能是单核细胞和内皮细胞之间粘附功能增加的机制之一。

关键词：血管紧张素Ⅱ 血管内皮细胞整合素

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一种新的睾丸特异核孔蛋白基因特性的研究

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中国医学科学院学报 1999年第2期21卷 81-87页

作者：高颖朱海东曹登峰盛齐缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的通过筛选人睾丸特异基因及对其结构和功能的研究，为阐明精子发生与成熟提供新的线索。方法采用筛选人睾丸表达文库、快速扩增ｃＤＮＡ５′末端、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）以及基因重组等技术。结果（１... 详细信息

目的通过筛选人睾丸特异基因及对其结构和功能的研究，为阐明精子发生与成熟提供新的线索。方法采用筛选人睾丸表达文库、快速扩增ｃＤＮＡ５′末端、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）以及基因重组等技术。结果（１）获得一新的长度为２２０９ｂｐ的ｃＤＮＡ，编码７００个氨基酸，将该基因命名为ＢＳ－６３。Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ注册号为Ｕ６４６７５。（２）ＢＳ－６３Ｎ端具有核孔蛋白的特征性结构元件“ＸＦＸＦＧ”或“ＦＧ”以及与Ｒａｓ相关核蛋白（Ｒａｎ）结合的典型特征。（３）Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析显示，ＢＳ－６３基因有６．０和８．５ｋｂ两种转录形式，其中６．０ｋｂ为睾丸组织特异性转录本。（４）ＦＩＳＨ显示，ＢＳ－６３基因定位于２ｑ１１．２～１２。（５）ＢＳ－６３ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得高效表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，表达蛋白的相对分子质量约为８００００。（６）体外功能实验表明，该表达蛋白可被蛋白激酶Ｃ及细胞周期依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化。结论ＢＳ－６３可能是一种新的睾丸特异核孔蛋白。

关键词：核孔蛋白荧光原位杂交睾丸特异基因

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未知人Na(+)-K(+)-Exchanging ATPase α1亚基基因第一内含子的获得及鉴定

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中国医学科学院学报 1999年第3期21卷 159-165页

作者：杨靖轩张金三卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的研究人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因胞外区约８０～１３０位氨基酸编码序列的未知基因组结构。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对人基因组ＤＮＡ及ｃＤＮＡ文库进行扩增，限制性酶切... 详细信息

目的研究人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因胞外区约８０～１３０位氨基酸编码序列的未知基因组结构。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对人基因组ＤＮＡ及ｃＤＮＡ文库进行扩增，限制性酶切分析扩增产物，并进行荧光测序，对测序结果进行同源性分析及剪接位点的搜索并对得到的核苷酸序列进行分析。结果人基因组ＤＮＡ和ｃＤＮＡ经扩增后分别得到８３３和１９５ｂｐ两种不同大小的片段Ｆｇ，Ｆｃ。分析序列发现Ｆｇ与Ｆｃ相比在１３８～７７５ｂｐ处含有一６３８ｂｐ的插入片段，此片段与ＧｅｎＢａｎｋ中的任何已知序列均无明显同源性。结论本研究发现了一段全新未知的人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因的内含子全序列，并得到了第一外显子同第二外显子之间的相对位置和序列，其在Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ的基因检索号为Ｌ７６９３８。序列分析表明该内含子可能具有潜在的调控基因表达的功能，并含有一个可能的编码序列。

关键词： Exchanging ATPase α1亚单位 PCR 内含子

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