检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 1999年第1期15卷 32-34页

作者：王辉邓洁英郑德先史轶蘩中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院河南新乡医学院免疫学教研室中国医学科学院基础医学研究所生化室

目的：克隆和鉴定人淋巴细胞免疫反应性生长激素（ｉｒＧＨ）基因调控序列的核苷酸顺序。方法：通过ＰＣＲ扩增出人淋巴细胞ｉｒＧＨ基因５′近端的调控序列，然后将其与质粒ＰＧＥＭ７Ｚｆ（＋）连接，经转化蓝白斑筛选、酶切鉴定，获... 详细信息

目的：克隆和鉴定人淋巴细胞免疫反应性生长激素（ｉｒＧＨ）基因调控序列的核苷酸顺序。方法：通过ＰＣＲ扩增出人淋巴细胞ｉｒＧＨ基因５′近端的调控序列，然后将其与质粒ＰＧＥＭ７Ｚｆ（＋）连接，经转化蓝白斑筛选、酶切鉴定，获得ＰＧＥＭ７Ｚｆ（＋）ｉｒＧＨＤＮＡ（－４８４＋２ｂｐ）重组质粒，进行序列测定。结果：显示ｉｒＧＨ基因５′近端的调控序列与垂体细胞ＧＨ基因的５′近端调控序列的核苷酸顺序完全相同。

关键词：生长激素基因调控序列淋巴细胞 irGH

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大鼠骶尾腹内侧肌的运动神经分布——CB-HRP、CB-胶体金结合CGRP免疫组织化学双标法研究

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解剖学报 1999年第1期30卷 27-30,I008页

作者：陈幽婷石葛明童江万选才中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所江苏徐州医学院神经解剖学研究室

目的通过研究Ｏｎｕｆ核靶肌肉的神经分布特点，探讨在某些运动神经元疾病中，Ｏｎｕｆ核及其靶肌肉功能不受影响的生理机制。方法应用ＣＢ－ＨＲＰ逆行示踪技术及ＣＢ－胶体金逆行示踪结合ＣＧＲＰ免疫组织化学双标技术，观察了支配大... 详细信息

目的通过研究Ｏｎｕｆ核靶肌肉的神经分布特点，探讨在某些运动神经元疾病中，Ｏｎｕｆ核及其靶肌肉功能不受影响的生理机制。方法应用ＣＢ－ＨＲＰ逆行示踪技术及ＣＢ－胶体金逆行示踪结合ＣＧＲＰ免疫组织化学双标技术，观察了支配大鼠骶尾腹内侧肌的运动神经元在脊髓内的定位分布。结果首次发现该肌的神经分布方式与会阴肌的神经分布相同，即同时接受脊髓前角躯体运动神经元和Ｏｎｕｆ核神经元的双重支配。其中有６３．４０％位于Ｌ６～Ｓ３前角的腹侧群，２２．３０％位于Ｏｎｕｆ核的背外侧群，１４．３０％位于Ｏｎｕｆ核的背内侧群。各核群内支配该肌的神经元约５０％为ＣＧＲＰ阳性神经元。另外，支配该肌的上述两种运动神经元在Ｌ６～Ｓ３节段软脊膜处特定部位形成丰富的软脊膜下树突丛。结论实验证实了骶尾腹内侧肌不但是Ｏｎｕｆ核最大的靶肌肉，而且支配该肌的运动神经元具有丰富的软脊膜下树突丛。

关键词：骶尾腹内侧肌神经分布 Onuf核大鼠靶肌肉

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人肿瘤转移抑制基因真核细胞表达质粒的构建

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解剖学报 1999年第2期30卷 171-173页

作者：文杰张世馥李守柔中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室白求恩医科大学第二临床医院妇产科

目的构建人肿瘤转移抑制基因ＮＭ２３－Ｈ１与真核表达载体ＰｃＤＮＡ３．１／Ｚｅｒｏ的重组体。方法利用分子生物学克隆技术从质粒ｐｕｃ１８中酶切回收９００ｂｐ的人ＮＭ２３－Ｈ１基因片段，与ＰｃＤＮＡ３．１／Ｚｅｒｏ构成重组... 详细信息

目的构建人肿瘤转移抑制基因ＮＭ２３－Ｈ１与真核表达载体ＰｃＤＮＡ３．１／Ｚｅｒｏ的重组体。方法利用分子生物学克隆技术从质粒ｐｕｃ１８中酶切回收９００ｂｐ的人ＮＭ２３－Ｈ１基因片段，与ＰｃＤＮＡ３．１／Ｚｅｒｏ构成重组体，并根据表达载体与克隆基因核苷酸序列中酶切位点分析、鉴定插入片段的正反连接。结果酶切得到９００ｂｐ的ＮＭ２３－Ｈ１基因片段，５．０ｋｂ质粒载体，两者相连构建成重组体ＰｃＤＮＡ．ＮＭ２３，利用ＰｓｔⅠ酶切位点确认ＰｓｔＩ酶切后得到４条带的重组体为正向连接。结论人真核细胞表达质粒ＰｃＤＮＡ．ＮＭ２３成功构建，为卵巢癌基因治疗提供了部分实验基础。

关键词：基因重组卵巢肿瘤基因治疗 nm23-H1基因

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关于败血症休克发病机理假说的实验(1)

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中国急救医学 1999年第1期19卷 9-11页

作者：戴顺龄段金虹李春涛陆媛桂怡张仪华斯勤程锦轩凌亦凌万梅中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学部河北医科大学病理生理教研室

目的将ＣＡ均有明显增高而临床症状截然相反的败血症休克（Ｓ）与神经源性肺水肿（ＮＰＥ）进行部分病理生理比较研究，以期从两者差别及Ｓ的特殊性中，揭示其发病机理。方法肺系数、ＣＡＰ、ＣＡＷＰ、微循环观察、血浆ＥＴ－１、ＮＯ... 详细信息

目的将ＣＡ均有明显增高而临床症状截然相反的败血症休克（Ｓ）与神经源性肺水肿（ＮＰＥ）进行部分病理生理比较研究，以期从两者差别及Ｓ的特殊性中，揭示其发病机理。方法肺系数、ＣＡＰ、ＣＡＷＰ、微循环观察、血浆ＥＴ－１、ＮＯ测定；ＳＳ时ｉＮＯＳｍＲＮＡ肺组织原位杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｏｌｔ原位ＰＣＲ、胞内Ｃａ＋＋、胞内ＩＰ１、ＩＰ２、ＩＰ３测定。结果部分生理学指标显示：交感、ＣＡ占优势的不是ＳＳ而是ＮＰＥ，ＮＰＥ时血管病理性收缩，ＥＦ－ｌ增高明显；而Ｓ时血管有病理性扩张、ＮＯ增高明显，内皮细胞胞内Ｃａ＋＋、ＩＰ３增高，肺组织ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达增强；而Ａｃｈ、Ｍ受体抑制剂６５４－２能使上述异常状态减轻或消失，恢复正常状态。结论在Ｓ发病机理中，交感与副交感系统均被激活，在交感、副交感系统高水平失衡基础上，以Ａｃｈ－ＮＯ为主导，ＮＯ与超氧阴离子结合成ＯＮＯＯ－，继而形成ＯＨ·＋ＮＯ－２，对细胞产生强烈毒性，导致血管病理性扩张为主，结合多种细胞因子与介质的激活形成ＳＳ。

关键词：败血症休克乙酰胆碱一氧化氮副交感系统

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配子印迹

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基础医学与临床 1999年第2期19卷 91-96页

作者：周彦袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

配子印迹周彦，袁建刚，强伯勤（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院，医学分子生物学国家重点实验室，北京　１００００５）随着细胞遗传学、发育遗传学和分子遗传学的发展及生物技术的不断更新，哺乳动物发育... 详细信息

配子印迹周彦，袁建刚，强伯勤（中国医学科学院基础医学研究所，中国协和医科大学基础医学院，医学分子生物学国家重点实验室，北京　１００００５）随着细胞遗传学、发育遗传学和分子遗传学的发展及生物技术的不断更新，哺乳动物发育过程中基因的活性及其调节机理的研究...

关键词：配子印迹印迹基因基因调控

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反义MCP-1转染兔平滑肌细胞及对其生长的影响

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基础医学与临床 1999年第4期19卷 79-84页

作者：李拥军管珩刘佩毛许漫赵三妹王宗立余铭鹏中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院普外科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理室北京100005

构建逆转录病毒载体反义单核细胞趋化蛋白1（LUCX-Anti-MCP－1）表达质粒，利用阳离子脂质体（Lipofectamine）将反义MCP－1导入体外培养的平滑肌细胞，通过PCR、Northern杂交检测外源基因的转染及其mRNA表达情况。应用3H胸腺嘧啶核苷... 详细信息

构建逆转录病毒载体反义单核细胞趋化蛋白1（LUCX-Anti-MCP－1）表达质粒，利用阳离子脂质体（Lipofectamine）将反义MCP－1导入体外培养的平滑肌细胞，通过PCR、Northern杂交检测外源基因的转染及其mRNA表达情况。应用3H胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）掺入法了解反义MCP－1基因对细胞生长的影响．结果显示：Lipofectamine可以成功的将反义MCP－1基因导入体外培养的主动脉平滑肌细胞中，并实现外源基因的转录表达。且反义MCP－1基因对体外培养的平滑肌细胞生长没有影响。

关键词：基因转染反义基因平滑肌细胞阳离子脂质体

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谷胱甘肽巯基转移酶pi参与肿瘤细胞耐药性的产生

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 402-406页

作者：曹威左瑾方福德中日友好医院临床医学研究所北京100029 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ... 详细信息

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ和ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ；采用细胞原位杂交法，以地高辛标记的ＧＳＴ－ｐｉ　ｃＤＮＡ为探针，检测两细胞株ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的表达水平；用ＭＴＴ法检测不同抗癌药物对细胞株的毒性作用。结果ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ表达明显升高，而ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ和ＨｅＬａ细胞的表达水平很低。阿霉素、丝裂霉素Ｃ和顺铂对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＩＣ５０分别为７０．１３、１０．９５和１６．５２ｕｇ／ｍｌ，对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ的ＩＣ５０分别为１０．３４、７．４８和１３．７０ｕｇ／ｍｌ，长春新碱对两细胞株的毒性无明显差别。结论ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ细胞具有较高的耐药性。ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的大量表达可能是产生多药耐药的原因，此细胞株可作为一个稳定的遗传学系统在ＧＳＴ－ｐｉ与肿瘤细胞耐药的研究中广泛应用。

关键词： GST-pi 肿瘤耐药性

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MBLL cDNA的克隆及组织表达分析

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科学通报 1999年第22期44卷 2408-2413页

作者：杜光伟周严陈建和汪俊华阴彬袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL... 详细信息

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL(muscleblind_like) .MBLL长为 2 5 95bp ,含有一个完整的开放阅读框 ,编码 2 5 5个氨基酸 ,具有 4个Cys3 His锌指基序 ,氨基酸序列与果蝇mbl有很高的同源性 (GenBank接受号 :AF0 6 1 2 6 1 ) .利用Northern和RNA斑点杂交检测MBLL基因在 43种成人组织 ,7种胎儿组织中的表达 ,结果显示MBLL是一个广泛表达的基因。

关键词： MBLL cDNA 克隆组织表达基因编码

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热休克基因mRNA定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

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科学通报 1999年第18期44卷 1928-1933页

作者：王艳林沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用... 详细信息

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用DNA重组技术及体外转录体系制备了一种能用作测定hsp70 ,hsp90α及hsp90 βmRNA的复合内参照RNA ;然后 ,通过对反应条件的优化、选择 ,建立了一种特异检测 3种主要的人HSP基因mRNA水平的定量RT PCR体系 .应用此体系测定了hsp70 ,hsp90α及hsp90 β在Jurkat细胞中的组成性及热诱导表达规律 .

关键词：热休克基因 mRNA 定量RT-PCR检测热休克白质

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PHF2全长cDNA及剪接异构体的克隆鉴定

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科学通报 1999年第8期44卷 835-840页

作者：汪俊华杜光伟周严阴彬胡松年袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

PHD锌指结构蛋白作为HOX基因的上游调控因子 ,在生物体的发育过程中起着重要作用 .涉及该蛋白的异常还与人类的某些恶性疾病如白血病相关 .利用基因数据库同源性比较、PCR扩增、cDNA文库筛选cDNA及部分基因组DNA序列分析、多组织Norther... 详细信息

PHD锌指结构蛋白作为HOX基因的上游调控因子 ,在生物体的发育过程中起着重要作用 .涉及该蛋白的异常还与人类的某些恶性疾病如白血病相关 .利用基因数据库同源性比较、PCR扩增、cDNA文库筛选cDNA及部分基因组DNA序列分析、多组织Northern印迹杂交等方法 ,克隆鉴定了一种新的人类编码PHD蛋白的全长cDNA(PHF2GenBankAcc :AF 0 5 2 2 0 5 )

关键词： PHD锌指结构可变剪接异构体 PHF2 克隆 cDNA

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