检索结果-内蒙古大学图书馆

利用PCR构建多拷贝HIV-1 TAR序列的串联体

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基础医学与临床 2001年第1期21卷 85-87页

作者：阴彬白龙川袁建刚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

建立“自身引物—模板”PCR方法 ,并应用此方法成功地扩增了多拷贝HIV 1TAR片段的同向串联体。此方法简便 ,省力 ,可用于多拷贝基因探针、多拷贝反义基因片段、多拷贝抗原表位的扩增和克隆。

关键词：自身引物-模板串联板聚合梅链反应 HIV-1TAR 多拷贝基因探针

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支气管哮喘患者T细胞受体δ链多态性研究

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中华结核和呼吸杂志 2001年第4期24卷 215-218页

作者：白彦林耀广何维陈勇马毅中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院呼吸科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基础医学研究所免疫室 100730

目的　探讨γδ链T细胞在哮喘气道慢性炎症产生及延续机制中的作用。方法　留取 7例哮喘患者与 7例对照者的外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF) ,用免疫荧光染色和流式细胞分析技术检测γδ链T细胞的百分率 ,用逆转录聚合酶链式反应 (RT P... 详细信息

目的　探讨γδ链T细胞在哮喘气道慢性炎症产生及延续机制中的作用。方法　留取 7例哮喘患者与 7例对照者的外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF) ,用免疫荧光染色和流式细胞分析技术检测γδ链T细胞的百分率 ,用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)法和基因扫描法分析T细胞受体Vδ1～Vδ3 亚族的相对取用频率及克隆增殖状态。结果　哮喘患者BALF中γδT细胞比例 [(7 8±4 7) % ]与对照组 [(3 3± 3 0 ) % ]比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;且Vδ1的相对取用频率 [(4 4±13) % ]与对照组 [(19± 5 ) % ]比较 ,差异有显著性 (P =0 0 0 2 )。哮喘患者BALF中部分Vδ基因亚家族呈单或寡克隆扩增 ,以Vδ1亚族尤其显著。结论　对抗原发生特异性应答的γδT细胞可能在启动和维持哮喘慢性气道炎症中发挥了较重要的作用。

关键词：支气管哮喘 T细胞受体 δ链多态性

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洛伐他汀对高糖时人肾小管上皮细胞核因子-κB和组织纤溶酶原激活物及其抑制物的作用

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中华肾脏病杂志 2001年第6期17卷 399-403页

作者：陈丽萌李学旺林嘉友李航段琳中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基础医学研究所免疫室北京100730

目的观察高糖环境中，肾小管上皮细胞组织纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及其抑制物－１（ＰＡＩ－１）异常与核因子（ＮＦ）－ｋＢ激活的关系，并探讨洛伐他汀对其改善作用。方法体外培养人肾小管上皮细胞（ＨＫＣ），用高糖刺激ＨＫＣ... 详细信息

目的观察高糖环境中，肾小管上皮细胞组织纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及其抑制物－１（ＰＡＩ－１）异常与核因子（ＮＦ）－ｋＢ激活的关系，并探讨洛伐他汀对其改善作用。方法体外培养人肾小管上皮细胞（ＨＫＣ），用高糖刺激ＨＫＣ细胞，并与洛伐他汀共孵育。发色底物法检测细胞上清中ＰＡＩ－１和ｔＰＡ活性；ＲＴ－ＰＣＲ方法观察ＨＫＣ细胞合成ＰＡＩ－１和ｔＰＡｍＲＮＡ表达；共聚焦显微镜和免疫印迹法检测核转录因子ＮＦ－ｋＢ的作用。结果高糖可激活ＮＦ－ｋＢ（ｐ６５），并使ＨＫＣ细胞培养上清中ＰＡＩ－１活性和ｍＲＮＡ表达增加，ｔＰＡ活性和ｍＲＮＡ表达降低；洛伐他汀可以部分或全部逆转高糖的作用。结论高糖促使ＨＫＣ细胞ＰＡＩ－１和ｔＰＡ异常表达，可能与ＮＦ－ｋＢ激活有关。洛伐他汀可以通过非降脂的甲羟戊酸途径逆转高糖对ＨＫＣ细胞ＮＦ－ｋＢ和ＰＡＩ－１与ｔＰＡ的影响。

关键词：洛伐他汀纤溶酶原激活物核因子-kB 葡萄糖肾小管上皮细胞糖尿病肾病

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胃粘膜慢性炎症与功能性消化不良之间相互关系的探讨

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基础医学与临床 2001年第Z1期21卷 82-83页

作者：郭建强柯美云张彦东中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科100730 基础医学研究所病理教研室

目的功能性消化不良(FD)胃镜下所见多数大致正常,而30%～50%患者组织学上仍表现为慢性炎症.慢性胃炎与FD之间的关系,一直存在有争议.本研究旨在探讨胃粘膜慢性炎症与FD之间的相互关系.方法临床连续入选符合FD诊断的患者41例(男∶女=12∶... 详细信息

目的功能性消化不良(FD)胃镜下所见多数大致正常,而30%～50%患者组织学上仍表现为慢性炎症.慢性胃炎与FD之间的关系,一直存在有争议.本研究旨在探讨胃粘膜慢性炎症与FD之间的相互关系.方法临床连续入选符合FD诊断的患者41例(男∶女=12∶29),平均年龄38. 2岁(21～65岁),病程2～10年.对所有患者首先进行消化不良症状(餐后饱胀、不适、早饱、打嗝为主,无反酸、烧心、便秘等)积分(0～4);通过胃镜取胃底、胃体、胃窦和十二指肠粘膜活检各2块,分别进行HE病理学检查和甲苯胺蓝染色观察Hp感染、肥大细胞计数及活化状况.结果 1.一般资料:44例FD患者,消化不良症状积分为2.6±0.5分,变异系数为10.4%.2.组织学改变:胃窦(31.7%)慢性活动性炎症显著高于胃底(7.3%)、胃体 (9.8%)和十二指肠(9.8%)(P＜0.05);胃窦粘膜组织(24.4%)显著低于以上其他部位 (53.7%、51.2%和46.3%)(P＜0.05);慢性非活动性炎症4个部位之间无显著性差别( 胃底、体、窦和十二指肠分别为39%、39%、43.9%和43.9%)(P＞0.05).3.各部位粘膜在慢性活动性、非活动性炎症和正常粘膜组中肥大细胞计数无显著不同;除胃底中慢性活动性、非活动性炎症组的肥大细胞活化计数和活化率显著高于正常粘膜组外(P＜0.05) ;3组的十二指肠降部粘膜中肥大细胞计数、活化计数和活化率均显著低于各部位胃内粘膜 .4. ***检出率:慢性活动性炎症组中除胃窦为51.8%外,其他部位并未检出;慢性非活动性胃炎中,胃体和胃窦显著高于胃底和十二指肠(P＜0.05);正常粘膜组中,H. pylori检出率胃窦显著高于其他部位(P＜0.05);***阳性与阴性FD患者之间,胃底、胃体和胃窦的肥大细胞计数、肥大细胞活化计数以及活化率之间无显著差别.结论胃十二指肠粘膜的慢性炎症可能是FD发生的病理学基础之一;胃底和胃体肥大细胞活化可能与FD的发病有关;***感染可能与FD之间的相关性并不显著.

关键词：功能性消化不良胃粘膜慢性炎症

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巨噬细胞(THP-1)表面apoE特性及在细胞脂质代谢中的作用

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 337-340页

作者：梁平 Jim W. Burgess 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理室北京100005 University of Ottawa Heart Institute Ottawa Ontario Canada K1Y4E9

目的研究巨噬细胞表面apoE的特性及与脂蛋白代谢的关系，以进一步了解巨噬细胞在动脉粥样硬化发展过程中的作用。方法以抗apoE单克隆抗体（7C9，3H1）的特异性结合，分析乙酰LDL、肝素及硫酸软骨素酶、LiposynⅡ等因素对THP-2细胞表面... 详细信息

目的研究巨噬细胞表面apoE的特性及与脂蛋白代谢的关系，以进一步了解巨噬细胞在动脉粥样硬化发展过程中的作用。方法以抗apoE单克隆抗体（7C9，3H1）的特异性结合，分析乙酰LDL、肝素及硫酸软骨素酶、LiposynⅡ等因素对THP-2细胞表面apoE的影响及相互关系。结果经乙酰LDL作用后，在4℃时125I-7C9与细胞表面结合减少19%；而去除乙酰LDL后再37℃孵育2 h可增加结合25%。与乙酰LDL孵育可使细胞分泌至培养液中的apoE增加，并且呈时间依赖。肝素酶（3 U/ml）或硫酸软骨素酶ABC（0．75 U/ml）对未经乙酰LDL作用的THP-1细胞表面的apoE没有影响，对经乙酰LDL作用后的细胞肝素酶有轻微影响（与7C9结合下降7．9%），而硫酸软骨素酶孵育可使细胞表面apoE下降50%。LiposynⅡ可显著增加apoA1与THP1细胞表面的结合，增加的结合面可通过预先与3H1单抗孵育而被拮抗。结论 THP-1巨噬细胞表面apoE与细胞摄取胆固醇的过程及细胞表面的蛋白多糖代谢均有密切关系，可能还参与了apoA1脂质体与THP-1细胞表面结合过程，它们的相互作用可能会影响巨噬细胞的脂质代谢功能，进而可能对动脉粥样硬化的发展产生影响。

关键词：巨噬细胞载脂蛋白E 蛋白多糖细胞质代谢

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抗原穴位注射增强机体免疫功能的神经免疫调节作用

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 163-167页

作者：高扬王建中黄以光林嘉友李莉王东林荣安中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室北京100005 Hospital of University of International Business and Economics Faculty of Medicine National University of Singaporesingapore119260

目的探讨神经免疫调节在抗原穴位注射增强机体免疫功能中的作用。方法采用免疫组化、免疫荧光标记和 RT-PCR定量分析技术，观察了不同途径免疫的大鼠中枢神经的下丘脑外侧区（ LH）和杏仁核区（ AA）中 IL-1β、 IL-6的表达与脾脏单... 详细信息

目的探讨神经免疫调节在抗原穴位注射增强机体免疫功能中的作用。方法采用免疫组化、免疫荧光标记和 RT-PCR定量分析技术，观察了不同途径免疫的大鼠中枢神经的下丘脑外侧区（ LH）和杏仁核区（ AA）中 IL-1β、 IL-6的表达与脾脏单个核细胞的 IL-1β、 IL-2和 IFN-γ变化的关系。结果抗原穴位注射组大鼠 LH和 AA脑区 IL-1β、 IL-6的表达明显高于皮下注射组 ,但阳性细胞表达的高峰时间相似。免疫荧光标记结果显示细胞因子阳性细胞为神经元。穴位免疫组脾脏单个核细胞 IL-2和 IFN-γ的表达明显高于皮下免疫组， IL-1β的表达无差异。结论结果提示抗原经不同注射途径 (皮下、穴位 )免疫动物 ,动物中枢神经系统的神经免疫调节功能活动的作用时程是相似的 ,仅表现为神经免疫调节的作用强度不同 ; LH和 AA脑区 IL-1β、 IL-6介导的神经免疫调节功能与机体的免疫功能状态呈正相关；神经元是神经免疫调质 /递质的来源。抗原经穴位注射增强机体免疫功能的作用机制可能为穴位免疫可更有效的动员中枢神经系统的免疫相关脑区的神经免疫调节功能 ,参与对免疫系统的功能调节。

关键词：神经免疫调节穴位注射预防免疫抗原免疫功能

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肝细胞(HepG2)表面apoE代谢与蛋白多糖的影响

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 320-323页

作者：梁平 Jim W. Burgess 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理室北京100005 University of Ottawa Heart Institute Ottawa Ontario Canada K1Y4E9

目的探讨肝细胞表面载脂蛋白E(apoE)的代谢及蛋白多糖对其的影响。方法采用抗apoE单克隆抗体（7C9）特异性结合方法，分析肝素、硫酸软骨素和软骨素酶及xyloside 对HepG2细胞表面apoE结合与解离的影响。结果 HepG2细胞在含β-D-xylos... 详细信息

目的探讨肝细胞表面载脂蛋白E(apoE)的代谢及蛋白多糖对其的影响。方法采用抗apoE单克隆抗体（7C9）特异性结合方法，分析肝素、硫酸软骨素和软骨素酶及xyloside 对HepG2细胞表面apoE结合与解离的影响。结果 HepG2细胞在含β-D-xyloside的培养液中生长，细胞表面apoE可减少45%，而apoE分泌则增加4．3倍；与肝素酶（3 U/ml）或肝素(l mg/ml)一起孵育可分别减少细胞表面apoE 25．0%和30．5%，而与软骨素ABC酶（1．5 U/ml）孵育可减少细胞表面apoE 40%；硫酸软骨素A和B可分别减少细胞表面apoE 23．6%和15．3%，硫酸软骨素C则没有影响作用；氨基多糖减少细胞表面apoE后，可增加LDL对HepG2细胞表面的结合1．8倍。结论肝细胞表面apoE主要（约40%）通过硫酸软骨素蛋白多糖、小部分（约23%）通过硫酸乙酰肝素蛋白多糖与细胞表面连接；细胞表面apoE水平降低可增加LDL与细胞表面的结合。

关键词：载脂蛋白E 蛋白多糖肝细胞

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小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 158-162页

作者：李永海苏华何维崔莲仙越智宏伦中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫室国家医学分子生物学重点实验室北京100005 日本老化制御研究所

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从... 详细信息

目的小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法利用 DDRT-PCR技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行分析，获得差异表达片段（ ESTs）。进一步作 Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个 EST为探针，从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆基因。结果对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺 mRNA差异表达进行 DDRT-PCR分析，发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异，某些基因在 1或 10月龄胸腺内有选择性表达，某些基因仅有表达量的变化。共获得 108个差异表达的 ESTs，其中 31个呈 Northern印迹阳性，全部测序。经同源性分析，有 14个 ESTs与已知基因有较高的同源性， 17个 ESTs为新的 cDNA片段。选取其中 1个在 1月龄鼠胸腺高水平表达的 EST,从小鼠胸腺 cDNA文库中克隆到 1个与小鼠的 LAF1转酮醇酶高度同源的 1 470 bp片段。结论小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。

关键词： DDRT-PCR 小鼠胸腺基因差异表达克隆

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小鼠增龄相关性胸腺基因的克隆

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中国免疫学杂志 2001年第8期17卷 397-399,403页

作者：李永海苏华何维越智宏伦卢兴武崔莲仙中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点试验室北京100005 日本老化制御研究所

目的 :用基因差异显示技术研究小鼠胸腺增龄相关基因。方法 :利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析 ,获得差异显示的表达序列标签 (ESTs)。选其 1个 1月龄高表达的EST为探针 ,从小鼠胸腺c... 详细信息

目的 :用基因差异显示技术研究小鼠胸腺增龄相关基因。方法 :利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对 1月龄和 10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析 ,获得差异显示的表达序列标签 (ESTs)。选其 1个 1月龄高表达的EST为探针 ,从小鼠胸腺cDNA文库中筛选出一个 82 7bp的阳性克隆 ,并用PCR扩增延长为 140 6bp的cDNA片段 (mt2 2 140 6 )。结果 :同源性分析结果表明 ,mt2 2 140 6含一编码 438AA的开放阅读框 ,与人延伸因子 1γ(EF1γ)高度同源 ,其Genbank接收号为BE2 410 6 2。结论 :获得一个含完整开放阅读框与小鼠胸腺增龄相关的基因。

关键词： DDRT-PCR 小鼠胸腺基因差异表达增龄相关基因

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转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义

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解剖学报 2001年第1期32卷 55-60页

作者：张虹冯捷付天云叶雪章静波北京大学第二临床医学院妇科肿瘤中心北京100034 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的　通过阻断 T细胞的 Fas信号传递途径 ,探讨消除肿瘤对 T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。　方法　流式细胞术、RT- PCR方法检测卵巢癌细胞表达 Fas和 Fas L。构建 pc DNA3-反义 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染 Jurkat细胞 ,流式... 详细信息

目的　通过阻断 T细胞的 Fas信号传递途径 ,探讨消除肿瘤对 T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。　方法　流式细胞术、RT- PCR方法检测卵巢癌细胞表达 Fas和 Fas L。构建 pc DNA3-反义 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染 Jurkat细胞 ,流式细胞仪检测 Fas表达变化。以 Annexin- V和 MTT法检测转染反义 Fas基因对 Ju-rkat细胞凋亡的影响。采用 MTT体外杀伤实验观察 3AO对 Jurkat细胞杀伤变化。　结果　 6种卵巢癌细胞均表达Fas和 Fas L。pc DNA3-反义 Fas基因可以使 Jurkat细胞表达 Fas量下降并部分阻断 Fas单抗诱导的 Jurkat细胞凋亡 ,3AO对其杀伤减弱。　结论　卵巢癌细胞表达 Fas L可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一 ;应用反义技术阻断 Fas表达 ,可部分阻断 Fas单抗诱导 Jurkat细胞凋亡 ,可削弱肿瘤细胞对淋巴细胞的攻击。

关键词： T淋巴细胞卵巢癌细胞凋亡 FsaL Fas基因基因转染信号传递

来源：评论

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