检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2005年第10期25卷 948-952页

作者：莫志成张勇李宏帆吴宁华沈(王羽)琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的为制备体外组装染色质所需的核心组蛋白及蛋白因子。方法应用密度梯度离心和羟基磷灰石柱分离小牛胸腺细胞核心组蛋白H2A、H2B、H3及H4;应用昆虫表达体系表达了染色质组装相关子NAP-1、ACF(包括Acf-1和ISWI两个同时表达的组分),并... 详细信息

目的为制备体外组装染色质所需的核心组蛋白及蛋白因子。方法应用密度梯度离心和羟基磷灰石柱分离小牛胸腺细胞核心组蛋白H2A、H2B、H3及H4;应用昆虫表达体系表达了染色质组装相关子NAP-1、ACF(包括Acf-1和ISWI两个同时表达的组分),并用离子交换或亲和层析方法进行了纯化。结果本实验报道了制备几种核内蛋白因子的表达与纯化方法和条件,为体外组装染色质模板提供了必要基础。

关键词：染色质组装组蛋白 NAP-1 Acf-1 ISWI

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用酵母单杂交系统筛选人IL-2Rα基因NIRS元件结合蛋白的cDNA

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基础医学与临床 2005年第3期25卷 214-218页

作者：盛德乔陆瑜李宏帆吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和... 详细信息

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和βgal活性;测序后分析发现它们分别属于4个不同蛋白的cDNA克隆。其中一个是已知的反式作用因子Ku抗原,另一个是RNA聚合酶Ⅰ的转录终止因子。它们的C末端分别含有SAP和SANTDNA结合结构域。结论在Jurkat细胞中存在与NIRS元件相互作用的结合蛋白,相关的研究正在进行中。

关键词： NIRS 结合蛋白人IL-2 筛选 Ra基因杂交系统酵母白细胞介素2受体人外周血淋巴细胞 DNA结合结构域 Jurkat细胞相互作用 HTLV-1 cDNA文库 cDNA克隆反式作用因子 RNA聚合酶阳性克隆 Ku抗原杂交体 gal 假阳性 SAP C末端

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成体干细胞

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基础医学与临床 2005年第10期25卷 5-10页

作者：吴皖陈建河赵春华中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程研究中心实验血液学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所组织工程研究中心实验血液学国家重点实验室

在胎儿、儿童和成人组织中存在的多潜能干细胞统称成体干细胞。成体干细胞具有自我更新的能力,并且可以分化成与其来源不同的其他组织类型的细胞。一种组织来源的干细胞可分化成各种类型的细胞,即干细胞可塑性。成体干细胞可塑性是成体... 详细信息

在胎儿、儿童和成人组织中存在的多潜能干细胞统称成体干细胞。成体干细胞具有自我更新的能力,并且可以分化成与其来源不同的其他组织类型的细胞。一种组织来源的干细胞可分化成各种类型的细胞,即干细胞可塑性。成体干细胞可塑性是成体干细胞应用于临床的基础,但对干细胞可塑性机制的认识学术界仍存在较大的争议,先后有学者提出脱分化、异质细胞群体和细胞融合等学说,但都不能完全解释成体干细胞的可塑性。近年来的研究提示,成体组织中存在多潜能干细胞,我们发现在胚胎发育后的多种组织中都存在一类原始干细胞群体,在体内、外的特殊环境下,这类原始干细胞可分化为不同胚层的组织细胞,我们称其为亚全能干细胞。亚全能干细胞是存在于人体多种组织中的分化潜能介于从人体胚胎干细胞逐渐形成组织多能干细胞的发育过程中的一种原始干细胞亚群。

关键词：成体干细胞可塑性亚全能干细胞

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核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗原基因克隆表达及其抗体诊断原发性胆汁性肝硬化的价值初探

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中华检验医学杂志 2005年第11期28卷 1120-1125页

作者：李永哲刘镭孙庆国曾常茜赵振国佟大伟张蜀澜高扬于孟学朱立平 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科北华大学医学院免疫学教研室北华大学医学院免疫学教研室吉林北方肝胆医院吉林北方肝胆医院中国医学科学院中国协和医大学基础医学研究所免疫学系 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

目的克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,构建重组表达质粒,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,建立酶联免疫吸附法(ELISA),初探抗核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法构建重组表达... 详细信息

目的克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,构建重组表达质粒,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,建立酶联免疫吸附法(ELISA),初探抗核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法构建重组表达载体,在大肠杆菌BL21、M15中表达;融合蛋白经NiNAT树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)及免疫印迹法(WB)进行免疫活性鉴定;应用表达蛋白建立间接ELISA,检测60名健康体检者、68例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、60例病毒性肝炎、60例结缔组织病患者血清中抗gp210、p62和LBR抗体。结果经重组质粒测序和酶切结果证实,gp210、p62和LBR目的基因已正确插入原核表达载体中,基因序列正确,符合表达框架;SDSPAGE检测表达产物分别在69000、62000和27000处有一明显的蛋白表达条带,WB分析表明重组蛋白具有人gp210、p62和LBR抗原反应性。ELISA检测标本血清结果显示,PBC中,抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体阳性率分别为36.8%、30.9%和5.9%;而病毒性肝炎组、结缔组织病组和健康体检组中,除抗gp210抗体在结缔组织病患者中阳性率为1.7%外,3种自身抗体检测结果均为阴性。PBC组3种自身抗体阳性率与疾病对照组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论本研究成功克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,并将其在大肠杆菌中成功表达。应用纯化融合蛋白建立的ELISA检测抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体,对PBC具有较好特异性,为PBC的特异性临床诊断提供了有效的工具。

关键词：肝硬化,胆汁性自身抗原核包膜蛋白

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鼻咽癌患者外周血γδT细胞对鼻咽癌细胞的细胞毒活性测定

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2005年第6期40卷 466-468页

作者：王小路何维张素梅何洪彬张连山姜鸿武警总医院耳鼻咽喉科北京100039 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫研究室北京协和医院耳鼻咽喉科

T细胞受体(T cell receptor,TCR)γδ表型细胞与TCRαβ细胞不同,识别抗原的方式类似于免疫球蛋白,以主要组织相容性复合体非限制性方式识别抗原分子[1,2],无需抗原呈递分子配合,直接识别广谱肿瘤抗原.我们以抗体固相法体外扩增7例鼻咽... 详细信息

T细胞受体(T cell receptor,TCR)γδ表型细胞与TCRαβ细胞不同,识别抗原的方式类似于免疫球蛋白,以主要组织相容性复合体非限制性方式识别抗原分子[1,2],无需抗原呈递分子配合,直接识别广谱肿瘤抗原.我们以抗体固相法体外扩增7例鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者及6例健康人外周血的γδT细胞,经原代NPC细胞同步培养,得到高纯度的NPC细胞.流式细胞仪检测γδT细胞纯度,研究两种来源的γδT细胞对Daudi、CNE1、CNE2和新建的传代培养NPC细胞的细胞毒作用,探讨NPC患者外周血中γδT细胞的抗肿瘤作用.

关键词： γδT细胞鼻咽癌细胞鼻咽癌患者活性测定主要组织相容性复合体 carcinoma receptor 流式细胞仪检测抗原呈递分子 T细胞受体免疫球蛋白抗体固相法 Daudi 细胞毒作用抗肿瘤作用 C细胞 cell γδ表型识别抗原抗原分子

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BALB/c小鼠衰老过程中大脑皮质组织基因表达的改变

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中华老年医学杂志 2005年第3期24卷 205-208页

作者：陈等张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

　目的　鉴别和克隆小鼠衰老相关基因,为揭示人体衰老机制提供线索。　方法　利用改进逆转录多聚酶链反应 (DDRT PCR) 技术分析了 4 月龄和 24 月龄 BALB/c小鼠大脑皮质组织中mRNA的差异表达。　结果　确定了42个差异表达 cDNA片段,在... 详细信息

　目的　鉴别和克隆小鼠衰老相关基因,为揭示人体衰老机制提供线索。　方法　利用改进逆转录多聚酶链反应 (DDRT PCR) 技术分析了 4 月龄和 24 月龄 BALB/c小鼠大脑皮质组织中mRNA的差异表达。　结果　确定了42个差异表达 cDNA片段,在衰老小鼠中表达上调和下调者各21个。其中17个为已知编码蛋白功能的基因片段,12个为已知基因序列但未知功能的基因片段,13个可能为新基因片段。在已知蛋白功能的基因中,与氧化应激、能量产生和蛋白质代谢等相关的基因分别为2个、3个和4个,此外还有参与细胞凋亡、神经退行性变和生长发育调节等基因表达的改变。　结论　小鼠衰老可能与机体氧化应激状态、能量产生和蛋白质代谢等的改变有关。

关键词：改变大脑皮质 BALB/c小鼠基因表达氧化应激差异表达基因片段衰老相关基因新基因克隆

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SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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解剖学报 2005年第2期36卷 221-223页

作者：蒋毅陈实平董红燕冯长访王保君中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物室北京100005 北京科卫临床诊断试剂有限公司北京100039

目的　制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。　方法　以重组SARS CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。... 详细信息

目的　制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。　方法　以重组SARS CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。　结果　共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS CoV呈阳性反应。 10株单抗的相对亲和常数在108～109mol L-1之间;10株中有1株为IgG2b、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B 有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg L。　结论　获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS CoVN蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。

关键词： SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体双抗体夹心

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质粒纯化利用离子交换柱的再生方法

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基础医学与临床 2005年第6期25卷 561-563页

作者：董敏王小竹李继红王恒中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原学研究室北京100005 河北北方学院细胞生物系河北075000

目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质... 详细信息

目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染。结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值。

关键词：再生方法离子交换 mol/L NaOH溶液凝胶电泳分析 PCR扩增质粒DNA 提取纯化实验成本重复利用实用价值使用率 HCl 一次性琼脂糖

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成人心房肌细胞的急性分离和电生理学鉴定

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中国病理生理杂志 2005年第11期21卷 2286-2288页

作者：黄兵曹济民陈雷刘振伟左明章李立环卫生部北京医院麻醉科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生理研究室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院麻醉科北京100037 军事医学科学院毒物药物研究所北京100850

目的介绍一种适用于成人的心房肌细胞膜片钳研究的急性分离方法,并对所分离的细胞进行电生理学鉴定。方法采用两步酶解与机械分离相结合的方法制备成年人心房肌细胞标本,应用倒置显微镜初步观察细胞形态、数目后,用全细胞膜片钳技术鉴... 详细信息

目的介绍一种适用于成人的心房肌细胞膜片钳研究的急性分离方法,并对所分离的细胞进行电生理学鉴定。方法采用两步酶解与机械分离相结合的方法制备成年人心房肌细胞标本,应用倒置显微镜初步观察细胞形态、数目后,用全细胞膜片钳技术鉴定细胞的电生理学特性。结果分离的细胞呈多种形态,其中有良好折光性、细胞膜完整、有清晰横纹的杆状细胞约占50%-60%,计算出11例独立实验分离出的此类细胞获得率为(57.2±3.1)%;具有正常的电生理学特性,能够诱发出人心房肌细胞上主要的Na+、K+通道混合电流以及心房肌细胞特有的超快速激活钾通道电流(IKur)。结论实验数据表明该方法分离的细胞保持有其典型的通道特性,并证明其具有实用、快速和高效的特点,适用于人心房肌细胞的电生理学和电药理学研究,有良好的可行性。

关键词：心肌分离膜片钳术电生理学

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Sirtuin:依赖NAD^+的去乙酰化酶

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生命的化学 2005年第3期25卷 181-184页

作者：霍晓芳张俊武中国医学科学院/中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

组蛋白的乙酰化-去乙酰化修饰在基因表达调控中起重要作用。参与去乙酰化的酶除了经典的Ⅰ类和Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC),还有比较特殊的III类HDAC———Sirtuin,其活性依赖于NAD+。酵母的Sirtuin———Sir2在交... 详细信息

组蛋白的乙酰化-去乙酰化修饰在基因表达调控中起重要作用。参与去乙酰化的酶除了经典的Ⅰ类和Ⅱ类组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,HDAC),还有比较特殊的III类HDAC———Sirtuin,其活性依赖于NAD+。酵母的Sirtuin———Sir2在交配型基因沉默、端粒区基因沉默、rDNA沉默中起重要作用,还可能参与长寿与衰老的调节。在人类,Sirtuin的底物是组蛋白、各种转录因子如p53、FOXO、NF-κB、乙酰化酶如p300和其他的各种功能蛋白质。根据底物特点推测,人类Sirtuin蛋白的生理功能可能一方面是参与调节细胞在应激条件下的存活与死亡的平衡,另一方面是参与代谢的调节。

关键词：组蛋白去乙酰化酶(HDAC) 沉默信息调节因子2(Sir2) SIRTl 去乙酰化

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