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小鼠红白血病细胞（MEL）沿红系分化过程中一种新的 VL-30 样基因的诱导表达

中华血液学杂志 2001年第1期22卷 30-33页

作者：陈渝萍刘德培薛社普 100005 北京，中国医学科学院、中国协和医科大学基础医学研究所、国家医学分子生物学重点实验室

目的研究在药物诱导小鼠红白血病细胞系EML沿红系分化过程中基因表达的变化。方法用mRNA差异显示法分析二甲亚砜（DMSO）和血红素（Hemin）诱导MEL细胞分化前后基因表达的改变，并利用改进的cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆其中一... 详细信息

目的研究在药物诱导小鼠红白血病细胞系EML沿红系分化过程中基因表达的变化。方法用mRNA差异显示法分析二甲亚砜（DMSO）和血红素（Hemin）诱导MEL细胞分化前后基因表达的改变，并利用改进的cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆其中一个差示cDNA片段的旁侧序列；以Northern杂交分析检测对应基因的表达改变。结果在差异显示分析中检测到长115bp的转录本在诱导后表达增强。经RACE扩增后产物长达1?883bp，和小鼠BVL-1转座成分的内部序列（1955～4000nt）区段有很高的同源性。Northern杂交表明MEL细胞中该基因至少有3个转录本，在诱导后表达水平均显著增高。结论在MEL细胞红系分化过中发现了一种新的VL-30样基因。

关键词：红白血病细胞红系分化 VL-30成分

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核转录因子NF-κB在血管内皮细胞组织因子表达中的作用

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中国医学科学院学报 2001年第3期23卷 251-254页

作者：高咏梅朱广瑾中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理生理室北京100005

目的探讨核转录因子NF-κB在肿瘤坏死因子α（TNF-α）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管内皮细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法用发色底物法测定血管内皮细胞表面TF活性。分别采用凝胶电泳迁移率改变法(EMSA)和Western印迹法检测... 详细信息

目的探讨核转录因子NF-κB在肿瘤坏死因子α（TNF-α）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管内皮细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法用发色底物法测定血管内皮细胞表面TF活性。分别采用凝胶电泳迁移率改变法(EMSA)和Western印迹法检测血管内皮细胞核转录因子NF-κB的DNA结合活性和含量。结果100 U/ml TNF-α、10-6 mol/l AngⅡ作用下，内皮细胞表面TF 活性明显增高，分别较对照增高1.65 倍和1.61 倍。TNF-α、AngⅡ作用组核抽提物与NF-κB特异DNA序列结合活性分别为正常对照组的2.07倍和3.89倍。TNF-α、AngⅡ处理后细胞核内NF-κB含量明显增加，分别为正常对照组的1.77倍和1.52倍。结论TNF-α、AngⅡ可增强内皮细胞TF活性，这可能与其促进内皮细胞核转录因子NF-κB的核转位和DNA结合活性有关，进一步证实NF-κB在内皮细胞TF诱导表达中的重要作用。

关键词：内皮细胞组织因子核转录因子κB 肿瘤坏死因子α 血管紧张素Ⅱ 动脉粥样硬化

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在大肠杆菌中以融合蛋白高效表达基因工程产品人心钠素

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中国医学科学院学报 2001年第6期23卷 573-579页

作者：陈伟京王俊路金芝卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建以融合蛋白形式在大肠杆菌中高效表达心钠素的重组质粒,稳定高效地获得基因工程产品心钠素。方法采用PCR和亚克隆技术构建带有心钠素的融合基因并在大肠杆菌中高效表达融合蛋白,利用操纵子重复克隆提高表达量,以凝血酶切割融合... 详细信息

目的构建以融合蛋白形式在大肠杆菌中高效表达心钠素的重组质粒,稳定高效地获得基因工程产品心钠素。方法采用PCR和亚克隆技术构建带有心钠素的融合基因并在大肠杆菌中高效表达融合蛋白,利用操纵子重复克隆提高表达量,以凝血酶切割融合蛋白释放心钠素小肽并通过柱层析纯化蛋白质,检定产品的各项理化指标和大鼠的体内降压、体内利尿和体外舒张血管等药理活性。结果构建了4个高效表达的心钠素融合蛋白的质粒,分别含1～4个目的基因串联操纵子;通过温度诱导表达后,该系列表达的目的蛋白分别为菌体总蛋白的46%、54.8%、56.1%和60.1%;提取纯化包涵体形式的融合蛋白后,以凝血酶切割释放心钠素,再经纯化分离出心钠素;实验室摇瓶发酵每升培养液可获得3mg以上的纯度大于96%的产品,产品具有利尿、降压和舒张血管的药理活性。结论利用融合基因的克隆与表达成功地研制了人心钠素基因工程产品。

关键词：心钠素大肠杆菌融合蛋白凝血酶基因工程

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表皮生长因子眼药水的毒理学研究

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 137-140页

作者：叶益新黄秉仁莫冬海中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005 Department of Biochemistry and Molecular Biology Institute of Basic Medicial Sciences Corporation of JinKeLong

目的研究表皮生长因子 (EGF)眼药水的急性、长期毒性及其他副作用。方法按《新药毒理学研究指导原则》的要求和方法进行动物实验。结果经全身或局部，短期或长期用药观察，均未发现 EGF眼药水的毒性和其他副作用。结论符合新药指导... 详细信息

目的研究表皮生长因子 (EGF)眼药水的急性、长期毒性及其他副作用。方法按《新药毒理学研究指导原则》的要求和方法进行动物实验。结果经全身或局部，短期或长期用药观察，均未发现 EGF眼药水的毒性和其他副作用。结论符合新药指导原则，表明 EGF眼药水用于滴眼是安全的。

关键词：表皮生长因子眼药水急性毒性长期毒性副作用毒理学

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Fudenine———个新的与血糖调节相关的膜蛋白

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中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 63-64,F003页

作者：常永生左瑾张雪峰张明方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

确定 Fudenine是否为一个新的膜蛋白。方法用绿色荧光蛋白（ GFP）对 Fudenine进行体内定位，以 GFP(一种代谢稳定的蛋白 )定位于细胞质中，作为对照。将融合质粒 Fudenine- GFP瞬时转染 CBRH7919和 L- 6TG两种细胞， 48 h后荧光显微镜... 详细信息

确定 Fudenine是否为一个新的膜蛋白。方法用绿色荧光蛋白（ GFP）对 Fudenine进行体内定位，以 GFP(一种代谢稳定的蛋白 )定位于细胞质中，作为对照。将融合质粒 Fudenine- GFP瞬时转染 CBRH7919和 L- 6TG两种细胞， 48 h后荧光显微镜下观察。结果报告质粒 GFP表达产物定位于胞质中，而融合质粒产物定位于细胞膜上。结论 Fudenine是一种膜蛋白，它可能与其同源基因 prominin和 AC133抗原有相似的功能，在血糖调控和信号转导等方面发挥作用。

关键词： Fudenine 亚细胞定位细胞膜膜蛋白血糖调节

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中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的相关性分析

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中国医学科学院学报 2001年第5期23卷 450-454页

作者：吴亚宁张俊武张正馨屈秋明陈等中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的关联。方法利用PCR和限制性内切酶酶解,分析阿尔茨海默病患者及正常老年人载脂蛋白E各等位基因、基因型的频率。结果ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4这三个等位基因出现的次数(和频率)... 详细信息

目的研究中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的关联。方法利用PCR和限制性内切酶酶解,分析阿尔茨海默病患者及正常老年人载脂蛋白E各等位基因、基因型的频率。结果ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4这三个等位基因出现的次数(和频率)在56例散发性阿尔茨海默病(AD)患者中分别为3(2.7%)、8475.0%、2522.3%,而在67例健康对照中分别为96.7%、11585.8%、107.5%。ApoEε4等位基因在AD患者中出现的频率明显高于对照组,统计学处理说明其差异有显著性(χ2=10.99P<0.01OR=3.5995%CI=1.54-8.41)ApoEε3等位基因在AD组中出现的频率低于对照组,两组中的差异也有统计学意义(P<0.05)。结论ApoEε4等位基因是AD的危险因素,ApoEε3等位基因在AD的发生中可能具有一定保护作用。

关键词：阿尔茨海默病载脂蛋白E 等位基因型相关性分析

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抗原诱导免疫耐受的EAE大鼠中枢神经系统中一氧化氮合酶和细胞凋亡的变化

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基础医学与临床 2001年第3期21卷 234-237页

作者：王惠林嘉友高扬李莉杨天祝中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005 河北医科大学基础医学研究所神经生物室石家庄050017

抗原髓鞘素于致敏注射前后给大鼠口服诱导免疫耐受 ,于致敏后第 14天 ,处死动物 ,检测中枢神经系统NADPH d和TUNEL阳性细胞 ,观察NOS表达和细胞凋亡的变化 ,结果为 1 EAE口服组nNOS的表达明显少于非口服组。 2 口服组与非口服组凋亡细... 详细信息

抗原髓鞘素于致敏注射前后给大鼠口服诱导免疫耐受 ,于致敏后第 14天 ,处死动物 ,检测中枢神经系统NADPH d和TUNEL阳性细胞 ,观察NOS表达和细胞凋亡的变化 ,结果为 1 EAE口服组nNOS的表达明显少于非口服组。 2 口服组与非口服组凋亡细胞数的变化趋势一致 ;相同的症状级别 ,凋亡细胞数也近似。提示CNS中 ,nNOS活性的降低可能与口服免疫耐受的形成有关 ,但CNS中的细胞凋亡与口服免疫耐受之间 ,未发现有明确的相关性。

关键词：髓鞘素 EAE 口服免疫耐受细胞凋亡一氧化氮合酶实验性变态反应性脑脊髓炎

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新型HMBA衍生物对红白血病细胞诱导分化作用研究

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解剖学报 2001年第3期32卷 246-250页

作者：张世馥王华力周建平狄凯军章静波中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物学室北京100005

目的　寻找新的、更有效、低毒的六亚甲基双乙酰胺 (HMBA)衍生物。　方法　以人红白血病细胞(K5 6 2 ) ,小鼠红白血病细胞 (MEL)及其亚株MELDS19为靶细胞 ,筛选并比较新合成的HMBA衍生物———HMBPA[N ,N’六亚甲基双 (3吡啶 )酰胺 ]与 ... 详细信息

目的　寻找新的、更有效、低毒的六亚甲基双乙酰胺 (HMBA)衍生物。　方法　以人红白血病细胞(K5 6 2 ) ,小鼠红白血病细胞 (MEL)及其亚株MELDS19为靶细胞 ,筛选并比较新合成的HMBA衍生物———HMBPA[N ,N’六亚甲基双 (3吡啶 )酰胺 ]与 1,6乙二胺四乙酸钴 (Co HDTA)的诱导分化活性。　结果　MELDS19细胞株对HMBA最敏感 ,联苯胺染色阳性率 (B+ )可达 76 %。Co HDTA有一定的抑制细胞增殖作用及微弱的诱导分化活性(B+ 2 %～ 4 5 % ) ,有效浓度为 0 5mmol L ,HMBPA在 0 0 2～ 5 μmol L的浓度范围内也有较低的诱导活性 (B+ 3%～8% ) ,低浓度HMBPA与HMBA(2mmol L)联合应用 ,则可明显提高诱导分化活性 (B+ 72 % ) ,其诱导活性与 5mmol LHMBA及 1 6 %DMSO接近。　结论　HMBPA与Co HDTA对MEL细胞具有诱导分化活性。

关键词：细胞分化六亚甲基双乙酰胺 MEL细胞红白血病分化诱导剂

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STAT1对hsp90α基因表达的负调控作用

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 356-360页

作者：陈雪松吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α 基因表达的调控作用。方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞，利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α 基因mRNA水平。共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转... 详细信息

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α 基因表达的调控作用。方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞，利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α 基因mRNA水平。共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因质粒，利用定量RT-PCR检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析方法检测42℃ 1 h热激前后Jurkat细胞中STAT1酪氨酸磷酸化状态，用电泳迁移率变更分析（EMSA）检测STAT1与hsp90α 5′基因上游调控区中含有STAT1特异结合元件的双链寡核苷酸片段特异性结合程度。结果 STAT1既可抑制Jurkat细胞hsp90α基因的表达，又能抑制hsp90α基因5′上游调控区驱动的CAT报告基因活性。热激以前Jurkat细胞中的STAT1 701位酪氨酸已有一定程度的磷酸化，热激以后其磷酸化程度明显升高，而且STAT1与hsp90α基因 5′上游调控区中的STAT1结合元件呈特异性结合。结论 STAT1对hsp90α基因的表达具有负调控作用。

关键词： STA1 hsp90∝ 基因表达调控

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人类疾病基因定位常用的统计学分析方法

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中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 86-88,96页

作者：孙红霞杜玮南方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

人类疾病，特别是多基因遗传病相关基因的定位，是目前医学遗传学和基因研究中的难点和热点。本文简要介绍疾病基因定位的几种常用分析方法，包括连锁分析法（参数法和非参数法）、关联分析和传递不平衡分析的基本原理和应用范围。

关键词：人类疾病基因定位统计学分析方法连锁分析法

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