检索结果-内蒙古大学图书馆

应用酵母单杂交体系筛选与大鼠谷胱甘肽S-转移酶P增强子GPEⅠ相互作用的转录激活因子

中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 317-321页

作者：廖名湘左瑾刘东远方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法　采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测... 详细信息

目的　探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法　采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测定及计算机分析等手段对所测的 DNA序列进行分析。结果　共获得两个阳性克隆 p YGPE1和 p YGPE2。 DNA测序分析表明 :p YGPE1的插入片段与大鼠原癌基因 c- jun c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠 c- Jun蛋白具有 10 0 %的同源性。 p YGPE2的插入片段与大鼠线粒体腺苷酸转位酶 c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠腺苷酸转位酶具有 10 0 %的同源性。结论　大鼠 c- Jun蛋白和线粒体腺苷酸转位酶在酵母细胞内与大鼠 GST- P增强子 GPE 核心序列结合 ,可能是作用于 GPE 的反式作用因子。

关键词：酵母单杂交体系谷胱甘肽S-转移酶增强子GPE Ⅰ

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一个复合短串联重复序列的分离

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基础医学与临床 2000年第1期20卷 82-85页

作者：刘勇姚俊杰刘山鸣吴东颖刘国仰黄尚志杨焕明中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所遗传室北京100005

ＳｈｏｒｔＴａｎｄｅｍＲｅｐｅａｔｓ（ＳＴＲ）即短串联重复序列，已广泛应用于连锁分析和致病基因的定位克隆等方面。近年来发现可表达的三核苷酸重复单位拷贝数的扩增在导致人类某些遗传病的可能作用，使重复序列的研究更受重视。... 详细信息

ＳｈｏｒｔＴａｎｄｅｍＲｅｐｅａｔｓ（ＳＴＲ）即短串联重复序列，已广泛应用于连锁分析和致病基因的定位克隆等方面。近年来发现可表达的三核苷酸重复单位拷贝数的扩增在导致人类某些遗传病的可能作用，使重复序列的研究更受重视。本文采用自行设计的可筛选基因组中所有可能三核苷酸ＳＴＲ的“三联体”兼并寡核着酸探针来筛查５号染色体短臂区域部分Ｃｏｓｍｉｄ克隆中可能存在的三核苷酸ＳＴＲ。经过多次Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、酶切、亚克隆的方法，得到一复合ＳＴＲ。

关键词： STR 三联体杂交短串联重复序列

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DNA重新甲基化酶3b在成年及新生小鼠部分组织中的选择性剪接表达

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 312-316页

作者：林岚许琪张焱尹斌范钰罗一菁韩少梅张正国吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和... 详细信息

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和外显子 2 1、2 2选择性剪接对该基因功能可能产生的影响。结果　成年小鼠肝组织中大部分 Dnm t3b转录本保留外显子 10 ,而其它组织的大部分转录本中此序列被剪切掉。成年小鼠肺组织主要表达缺失外显子 10的 Dnmt3b转录本 ,而新生小鼠肺组织则表达保留外显子 10的转录本。亲水性及二级结构分析表明 ,选择性剪接区域编码的肽段均位于 Dnmt3b蛋白分子的表面。结论　小鼠 Dnm t3b基因的选择性剪接具有组织及发育阶段特异性 ,其选择性剪接区域编码的肽段可能与蛋白分子的调控或酶分子的靶序列识别有关。

关键词：甲基转移酶选择性剪接毛细管电泳 DNA

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白血病细胞系中B-Raf与Raf-1的表达及活性

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 533-535页

作者：张静刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中的 B- Raf和 Raf- 1表达水平及激酶活性。方法利用 Western印迹法检测 B- Raf和 Raf- 1表达水平，利用免疫沉淀及 Western印迹法检测 Raf- 1及 B- Raf的激酶活性。结果 Raf- 1在白血病细胞... 详细信息

目的研究白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中的 B- Raf和 Raf- 1表达水平及激酶活性。方法利用 Western印迹法检测 B- Raf和 Raf- 1表达水平，利用免疫沉淀及 Western印迹法检测 Raf- 1及 B- Raf的激酶活性。结果 Raf- 1在白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中均有表达 ,表达水平基本相似，其激酶活性较低； B- Raf仅在白血病细胞中表达，且在 Jurkat和 K562细胞中的表达水平较高，其激酶活性也较高。结论在白血病细胞中， B- Raf的高表达及活化可能是白血病发病的机制之一。

关键词： Raf-1 B-Raf 激酶活性白血病细胞

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单核苷酸多态性的研究进展

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 392-394页

作者：杜玮南孙红霞方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

单核苷酸多态性 (SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种 DNA序列多态性。SNP现象在人类基因组中广泛存在 ,并具有很高的信息含量。目前已发现数万个 SNP标记 ,且有多个生物医学网站开辟了专页对其加以介绍。随着对 SN... 详细信息

单核苷酸多态性 (SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种 DNA序列多态性。SNP现象在人类基因组中广泛存在 ,并具有很高的信息含量。目前已发现数万个 SNP标记 ,且有多个生物医学网站开辟了专页对其加以介绍。随着对 SNP检测和分析技术的进一步发展 ,尤其是与 DNA芯片等技术的结合 ,它已成为第三代遗传标记 ,初步满足对疾病相关基因定位研究的需要 ,尤其是对多基因遗传病高精度基因定位的要求 ,并将最终取代目前最常用的微卫星标记技术进入基因应用研究的领域。

关键词：单核苷酸多态性遗传标记基因研究 DNA芯片

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染色质结构与基因活化

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中国医学科学院学报 2000年第5期22卷 403-406页

作者：沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

核小体是染色质的基本单位。核小体对真核基因转录的阻扼现象是在特定细胞中基因组选择表达特异基因的最重要因素之一。染色质去阻扼后出现的开放构象能促进基因转录。本文讨论染色质动态调整的本质、组蛋白乙酰基转移酶和去乙酰基酶的... 详细信息

核小体是染色质的基本单位。核小体对真核基因转录的阻扼现象是在特定细胞中基因组选择表达特异基因的最重要因素之一。染色质去阻扼后出现的开放构象能促进基因转录。本文讨论染色质动态调整的本质、组蛋白乙酰基转移酶和去乙酰基酶的作用、以及通过甲基化 CpG结合蛋白而产生对染色质结构影响的机制等。染色质的顺式元件能参与确定染色体不同节段的功能，它将为生物信息学以及为基因组学与蛋白质组学之间的连接提供不可缺少的重要资料。染色质研究已引起临床医学家的关注，其研究成果可能为疾病的诊断和治疗提供新依据或途径。染色质结构动态调整对基因转录的新的调节活性标志着由分子到细胞或整体的综合研究手段在未来生命科学研究中将日益占据更为主导的地位。

关键词：染色质基因转录组蛋白乙酰化基因活化

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维生素D_3、9-顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因表达的调控

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 322-326页

作者：张洪美吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 J... 详细信息

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 Jurkat细胞 ,并用 VD3和 9- cis- RA分别或同时刺激细胞 ,或将质粒 β1.11及野生型维生素D3受体 (VDR)或 /和维甲酸 X受体 α(RXRα)真核表达质粒共转染 Jurkat细胞 ,检测细胞裂解液中荧光素酶活性 ;用 Western印迹分析方法检测经 VDR真核表达质粒转染或用 VD3和 9- cis- RA刺激的 Jurkat细胞中内源性Hsp90β蛋白的改变 ;通过电泳迁移率变更分析 (EMSA)实验 ,检测 VDR和 RXR能否与含有 hsp90β基因第一内含子中维生素 D3应答元件 (i VDRE)的双链寡核苷酸片段发生特异结合。结果　 VD3和 9- cis- RA可分别低水平诱导hsp90β基因表达 ,而两种配体同时加入有协同作用。 VDR或 RXRα分别转染只能较弱地抑制 hsp90β基因表达 ,二者共转染能增强其抑制作用。 EMSA实验证实 ,VDR和 RXR都可特异结合于 i VDRE上。结论　 VD3和 9- cis- RA这两条信号途径共同参与 hsp90β基因的启动子活性调节。

关键词：维生素D3 9-顺式维甲酸维生素D3受体基因表达

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早老蛋白氨基端与羧基端结构域的相互作用

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 536-539页

作者：梅品超楼蓉李兰英周义贡金英陈雨亭吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究早老蛋白分子相互作用及相互作用结构域。方法利用 RT- PCR扩增人早老蛋白- 1和早老蛋白- 2全长 cDNA。在此基础上构建多种缺失体，采用酵母双杂交体系分析它们之间的相互作用。结果 (1）早老蛋白- 1的氨基端多肽与羧基端多肽... 详细信息

目的研究早老蛋白分子相互作用及相互作用结构域。方法利用 RT- PCR扩增人早老蛋白- 1和早老蛋白- 2全长 cDNA。在此基础上构建多种缺失体，采用酵母双杂交体系分析它们之间的相互作用。结果 (1）早老蛋白- 1的氨基端多肽与羧基端多肽之间存在直接的相互作用，能形成同源二（多）聚体。早老蛋白- 1羧基端相互作用位点定位于第 361～ 447位氨基酸。这一相互作用不依赖于其旁侧亲水环结构功能域的存在，也无需其它配体参与；（ 2）早老蛋白- 1氨基端片段或羧基端片段自身之间均不能形成同源二（多）聚体；（ 3）早老蛋白- 2氨基端多肽与羧基端多肽之间也存在上述相互作用，能形成同源二（多）聚体；（ 4）早老蛋白- 1的羧基端片段与早老蛋白- 2的氨基端片段、早老蛋白- 2的羧基端片段与早老蛋白- 1的氨基端片段不发生相互作用。结论早老蛋白氨基端多肽与羧基端多肽之间直接的相互作用可能参与、并有助于早老蛋白的装配和成熟，是其功能的结构基础。

关键词：早老蛋白相互作用羧基端结构域早老性痴呆

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酵母单杂交体系——一种研究DNA-蛋白质相互作用的有效方法

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 388-391页

作者：廖名湘方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的... 详细信息

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的局限性。目前酵母单杂交体系已被广泛应用于寻找与目的 DNA片段相互作用的蛋白质分子 ,该体系是一种用于研究 DNA-蛋白质之间的相互作用的有效方法。本文就酵母单杂交体系的原理、具体实现方法、在研究 DNA结合蛋白质中的应用及其优缺点等方面作一简要介绍。

关键词：酵母单杂交体系 DNA-蛋白质相互作用

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异丁酰胺选择性活化人γ-珠蛋白基因的转录

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中国医学科学院学报 2000年第5期22卷 444-448页

作者：张雪青陈平黄小东张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究本室合成的异丁酰胺对于μ LCRAγψβδβ MEL稳定转化子中珠蛋白基因表达的影响作用。方法转化子细胞在含不同浓度异丁酰胺的细胞培养基中生长 4 d后，用 RNase保护分析法测定人 Aγ－、β－及鼠α－珠蛋白基因的表达水平... 详细信息

目的研究本室合成的异丁酰胺对于μ LCRAγψβδβ MEL稳定转化子中珠蛋白基因表达的影响作用。方法转化子细胞在含不同浓度异丁酰胺的细胞培养基中生长 4 d后，用 RNase保护分析法测定人 Aγ－、β－及鼠α－珠蛋白基因的表达水平。结果异丁酰胺可诱导人γ－、β－、及鼠α－珠蛋白基因的表达，且有一定的剂量相关性，对人γ－基因的诱导能力显著强于对人β－基因的诱导，在一定的异丁酰胺浓度范围 (2.5～ 5 mmol/L)内，对人γ－基因的诱导作用对比鼠α－珠蛋白基因更为有效。结论异丁酰胺在一定程度上可以选择性诱导人γ－珠蛋白基因转录，这一作用以及异丁酰胺的无毒性和血浆半衰期较长的优点，显示出其在β－地中海贫血和镰刀型贫血的治疗中具有潜在的应用前景。

关键词：异丁酰胺 γ-珠蛋白基因 β-地中海贫血

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