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大鼠骶尾腹内侧肌的运动神经分布——CB-HRP、CB-胶体金结合CGRP免疫组织化学双标法研究

解剖学报 1999年第1期30卷 27-30,I008页

作者：陈幽婷石葛明童江万选才中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所江苏徐州医学院神经解剖学研究室

目的通过研究Ｏｎｕｆ核靶肌肉的神经分布特点，探讨在某些运动神经元疾病中，Ｏｎｕｆ核及其靶肌肉功能不受影响的生理机制。方法应用ＣＢ－ＨＲＰ逆行示踪技术及ＣＢ－胶体金逆行示踪结合ＣＧＲＰ免疫组织化学双标技术，观察了支配大... 详细信息

目的通过研究Ｏｎｕｆ核靶肌肉的神经分布特点，探讨在某些运动神经元疾病中，Ｏｎｕｆ核及其靶肌肉功能不受影响的生理机制。方法应用ＣＢ－ＨＲＰ逆行示踪技术及ＣＢ－胶体金逆行示踪结合ＣＧＲＰ免疫组织化学双标技术，观察了支配大鼠骶尾腹内侧肌的运动神经元在脊髓内的定位分布。结果首次发现该肌的神经分布方式与会阴肌的神经分布相同，即同时接受脊髓前角躯体运动神经元和Ｏｎｕｆ核神经元的双重支配。其中有６３．４０％位于Ｌ６～Ｓ３前角的腹侧群，２２．３０％位于Ｏｎｕｆ核的背外侧群，１４．３０％位于Ｏｎｕｆ核的背内侧群。各核群内支配该肌的神经元约５０％为ＣＧＲＰ阳性神经元。另外，支配该肌的上述两种运动神经元在Ｌ６～Ｓ３节段软脊膜处特定部位形成丰富的软脊膜下树突丛。结论实验证实了骶尾腹内侧肌不但是Ｏｎｕｆ核最大的靶肌肉，而且支配该肌的运动神经元具有丰富的软脊膜下树突丛。

关键词：骶尾腹内侧肌神经分布 Onuf核大鼠靶肌肉

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一个新的人类硫氧化还原蛋白基因的克隆

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科学通报 1999年第12期44卷 1307-1310页

作者：周彦潘美辉袁建刚杜光伟强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

根据不同发育阶段 ( 1 3,33周 )的人胎脑组织mRNA差异显示分析 (又称DDRT PCR)所得到的具有差异表达的EST的序列 ,设计引物筛选点阵排列的人胎脑cDNA文库 ,得到一个新的全长cDNA克隆 .这个克隆全长 1 2 0 8bp ,包含一个 889bp的开放阅读... 详细信息

根据不同发育阶段 ( 1 3,33周 )的人胎脑组织mRNA差异显示分析 (又称DDRT PCR)所得到的具有差异表达的EST的序列 ,设计引物筛选点阵排列的人胎脑cDNA文库 ,得到一个新的全长cDNA克隆 .这个克隆全长 1 2 0 8bp ,包含一个 889bp的开放阅读框 ,一个 1 32bp的 5′非翻译序列和一个 2 0 9bp的 3′非翻译序列以及典型的polyA加尾信号 .其推断的氨基酸序列与人硫氧化还原蛋白同源 ,而且含有硫氧化还原蛋白的保守的活性位点序列 .将它命名为人的类硫氧化还原蛋白基因 (humanthioredoxinlikegene ,hTRXL) .

关键词：差异显示硫氧化还原蛋白胎脑基因克隆

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谷胱甘肽巯基转移酶pi参与肿瘤细胞耐药性的产生

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 402-406页

作者：曹威左瑾方福德中日友好医院临床医学研究所北京100029 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ... 详细信息

目的建立携带大鼠谷胱甘肽巯基转移酶ｐｉ（ＧＳＴ－ｐｉ）ＣＤＮＡ的细胞表达体系。方法用磷酸钙沉淀法将重组质粒ｐＳＶ－ＧＴ和载体质粒ｐＳＶ－ｎｅｏ分别转染ＨｅＬａ细胞，Ｇ４１８筛选得两株转染阳性细胞ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ和ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ；采用细胞原位杂交法，以地高辛标记的ＧＳＴ－ｐｉ　ｃＤＮＡ为探针，检测两细胞株ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的表达水平；用ＭＴＴ法检测不同抗癌药物对细胞株的毒性作用。结果ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ表达明显升高，而ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ和ＨｅＬａ细胞的表达水平很低。阿霉素、丝裂霉素Ｃ和顺铂对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ的ＩＣ５０分别为７０．１３、１０．９５和１６．５２ｕｇ／ｍｌ，对ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ｎｅｏ的ＩＣ５０分别为１０．３４、７．４８和１３．７０ｕｇ／ｍｌ，长春新碱对两细胞株的毒性无明显差别。结论ＨｅＬａ／ｐＳＶ－ＧＴ细胞具有较高的耐药性。ＧＳＴ－ｐｉｍＲＮＡ的大量表达可能是产生多药耐药的原因，此细胞株可作为一个稳定的遗传学系统在ＧＳＴ－ｐｉ与肿瘤细胞耐药的研究中广泛应用。

关键词： GST-pi 肿瘤耐药性

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MBLL cDNA的克隆及组织表达分析

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科学通报 1999年第22期44卷 2408-2413页

作者：杜光伟周严陈建和汪俊华阴彬袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL... 详细信息

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL(muscleblind_like) .MBLL长为 2 5 95bp ,含有一个完整的开放阅读框 ,编码 2 5 5个氨基酸 ,具有 4个Cys3 His锌指基序 ,氨基酸序列与果蝇mbl有很高的同源性 (GenBank接受号 :AF0 6 1 2 6 1 ) .利用Northern和RNA斑点杂交检测MBLL基因在 43种成人组织 ,7种胎儿组织中的表达 ,结果显示MBLL是一个广泛表达的基因。

关键词： MBLL cDNA 克隆组织表达基因编码

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热休克基因mRNA定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

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科学通报 1999年第18期44卷 1928-1933页

作者：王艳林沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用... 详细信息

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用DNA重组技术及体外转录体系制备了一种能用作测定hsp70 ,hsp90α及hsp90 βmRNA的复合内参照RNA ;然后 ,通过对反应条件的优化、选择 ,建立了一种特异检测 3种主要的人HSP基因mRNA水平的定量RT PCR体系 .应用此体系测定了hsp70 ,hsp90α及hsp90 β在Jurkat细胞中的组成性及热诱导表达规律 .

关键词：热休克基因 mRNA 定量RT-PCR检测热休克白质

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PHF2全长cDNA及剪接异构体的克隆鉴定

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科学通报 1999年第8期44卷 835-840页

作者：汪俊华杜光伟周严阴彬胡松年袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

PHD锌指结构蛋白作为HOX基因的上游调控因子 ,在生物体的发育过程中起着重要作用 .涉及该蛋白的异常还与人类的某些恶性疾病如白血病相关 .利用基因数据库同源性比较、PCR扩增、cDNA文库筛选cDNA及部分基因组DNA序列分析、多组织Norther... 详细信息

PHD锌指结构蛋白作为HOX基因的上游调控因子 ,在生物体的发育过程中起着重要作用 .涉及该蛋白的异常还与人类的某些恶性疾病如白血病相关 .利用基因数据库同源性比较、PCR扩增、cDNA文库筛选cDNA及部分基因组DNA序列分析、多组织Northern印迹杂交等方法 ,克隆鉴定了一种新的人类编码PHD蛋白的全长cDNA(PHF2GenBankAcc :AF 0 5 2 2 0 5 )

关键词： PHD锌指结构可变剪接异构体 PHF2 克隆 cDNA

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3种化学诱导物对大鼠GST-P基因表达的影响及机理

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科学通报 1999年第23期44卷 2550-2554页

作者：廖名湘刘东远左瑾张红云方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

大鼠谷胱甘肽S_转移酶P(GST_P)基因可被多种化学致癌物诱导表达 .采用基因诱导实验、共转染报告质粒瞬时表达实验、凝胶阻滞实验和分子杂交实验探讨了 3种化学物诱导GST_P基因表达的机理 .结果表明 ,佛波酯 (TPA)、甲基丙烯酸环氧丙酯 (... 详细信息

大鼠谷胱甘肽S_转移酶P(GST_P)基因可被多种化学致癌物诱导表达 .采用基因诱导实验、共转染报告质粒瞬时表达实验、凝胶阻滞实验和分子杂交实验探讨了 3种化学物诱导GST_P基因表达的机理 .结果表明 ,佛波酯 (TPA)、甲基丙烯酸环氧丙酯 (GMA)和H2 O2 对GST_P基因表达的影响及其机理不甚相同 :TPA和GMA主要通过激活AP_1或相应转录因子与GPEⅠ增强子元件相作用而促进GST_P表达 ,H2 O2

关键词：癌变 GST-P基因基因表达调控化学诱导物

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肿瘤的基因预防

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 399-401页

作者：张敏磊方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

肿瘤的发生和发展是一个渐进和缓慢的过程，在人类，有的癌形成需要几十年时间，但在出现临床症状以前，分子水平的改变大多已经出现。肿瘤的发生一方面有赖于外界致癌因素（化学的，生物的和物理的因素，特别是环境中化学致癌物）的反... 详细信息

肿瘤的发生和发展是一个渐进和缓慢的过程，在人类，有的癌形成需要几十年时间，但在出现临床症状以前，分子水平的改变大多已经出现。肿瘤的发生一方面有赖于外界致癌因素（化学的，生物的和物理的因素，特别是环境中化学致癌物）的反复刺激，另一方面也取决于个体的遗传学背景，即基因水平功能的完损与否。不同的个体其ＤＮＡ的修复、细胞的凋亡与分化、酶的解毒功能以及免疫系统的差异等因素，决定了该个体对致癌因素的易感性。因此肿瘤的预防包括两大方面，一是减少个体对致癌因素的暴露；另一是要修复或完善基因水平的功能，亦即肿瘤的基因预防。目前，肿瘤基因预防主要通过食物、药物和其他化学物质影响和调节基因的功能或直接导入不同作用原

关键词：肿瘤基因预防预防

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应用酵母双杂交法对人精子膜蛋白YWK-Ⅱ胞外区作用配体的筛选

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 287-287,292页

作者：张树民缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

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体外转运富含GPI-蛋白的红细胞囊泡改善PNH溶血的探索

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 278-281页

作者：杨洋许彩民潘华珍吕照江张之南中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　在体外观察是否能将富含ＣＤ５９的红细胞囊泡转运到缺失ＣＤ５９的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞膜上，以改善ＰＮＨ溶血，为ＰＮＨ的治疗提供新的线索。方法　采用免疫亲和层析分离技术分离ＰＮＨＣＤ５９－红... 详细信息

目的　在体外观察是否能将富含ＣＤ５９的红细胞囊泡转运到缺失ＣＤ５９的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞膜上，以改善ＰＮＨ溶血，为ＰＮＨ的治疗提供新的线索。方法　采用免疫亲和层析分离技术分离ＰＮＨＣＤ５９－红细胞，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析、流式细胞仪及蛇毒因子溶血实验等检测和分析红细胞与囊泡的结合。结果　Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析显示，红细胞囊泡含有ＣＤ５９；流式细胞仪测定表明，ＰＮＨＣＤ５９－红细胞与囊泡结合后，ＣＤ５９的荧光标记率明显增高（Ｐ＜０００１）；蛇毒因子溶血实验显示，加入囊泡后ＰＮＨＣＤ５９－红细胞溶血度也显著下降（Ｐ＜００５）。结论　红细胞囊泡上的ＣＤ５９可以在体外转运到ＰＮＨＣＤ５９－红细胞上，并产生抑制补体溶血的作用，使ＰＮＨＣＤ５９－

关键词：红细胞囊泡 PNH 糖肌醇磷脂血红蛋白尿症

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