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CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白与钙联蛋白在内侧颞叶癫痫模型小鼠海马中的表达

中国医学科学院学报 2016年第3期38卷 265-270页

作者：沙志强沙龙泽许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区... 详细信息

目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区的表达量及分布差异,并与注射PBS的正常小鼠进行对照。结果免疫印迹检测结果显示,KA注射后12 h小鼠海马中的CHOP(F=1.136,P=0.4069)和CNX表达量(F=2.378,P=0.2087)与对照组差异没有统计学意义,KA注射后24 h注射侧海马中的CHOP(F=8.510,P=0.0362)和CNX表达量(F=6.968,P=0.0497)明显高于对照组。免疫荧光结果显示,KA注射后12 h CHOP的表达主要集中于CA3区,注射后24 h在CA1和CA3区表达水平均升高;KA注射后24 h CHOP蛋白(F=24.480,P=0.0057)和CNX蛋白(F=7.149,P=0.0478)的表达量显著高于对照组。结论伴随着癫痫发作的产生,CHOP蛋白表达量上升,提示神经元内质网应激水平不断增加,可能需要更多CNX作为分子伴侣帮助更多未折叠蛋白完成折叠过程。

关键词：内侧颞叶癫痫内质网应激 CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白钙联蛋白

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小RNA干扰蛋白酶体亚基α7抑制K562细胞增殖

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中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 601-606页

作者：秦涛范翠青朱宁沈岩陈梅红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的运用小干扰RNA(siRNA)技术降低人髓性白血病细胞株K562细胞20S蛋白酶体亚基α7(PSMA7)基因的表达水平,探讨PSMA7表达下调对其细胞功能的影响。方法采用HiPerFect将化学合成的针对人PSMA7基因的特异性siRNA转染入K562细胞后,用Wester... 详细信息

目的运用小干扰RNA(siRNA)技术降低人髓性白血病细胞株K562细胞20S蛋白酶体亚基α7(PSMA7)基因的表达水平,探讨PSMA7表达下调对其细胞功能的影响。方法采用HiPerFect将化学合成的针对人PSMA7基因的特异性siRNA转染入K562细胞后,用Western blot法检测siRNA对PSMA7蛋白表达的抑制效果,采用MTS法及细胞计数法检测细胞增殖速率,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A、D、E的表达水平,Annexin V/FITC染色后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 PSMA7 siRNA转染K562细胞后使PSMA7蛋白表达水平明显下调;细胞增殖速率明显降低但无明显细胞凋亡,细胞周期中S期细胞比例减少;细胞周期蛋白Cyclin A、E表达下调。结论 PSMA7表达下调可使人髓性白血病细胞株K562细胞Cyclin A、E表达下调,使S期细胞比例降低从而抑制K562细胞增殖。

关键词： RNA干扰蛋白酶体亚基α7 细胞周期蛋白细胞增殖

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蛋白4.1基因家族的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2001年第3期28卷 290-294页

作者：胡晓燕周严袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

近几年 ,先后发现了三种与红细胞中的 4 1蛋白同源性很高的蛋白质 ,这四种蛋白质都具有三个功能性结构域 ,即膜结合结构域 ,血影蛋白肌动蛋白结合结构域和羧基端结构域 .而且除了已知的在细胞膜物理和生理特性维持方面的重要作用外 ,... 详细信息

近几年 ,先后发现了三种与红细胞中的 4 1蛋白同源性很高的蛋白质 ,这四种蛋白质都具有三个功能性结构域 ,即膜结合结构域 ,血影蛋白肌动蛋白结合结构域和羧基端结构域 .而且除了已知的在细胞膜物理和生理特性维持方面的重要作用外 ,4 1蛋白还与有丝分裂以及神经突触的形成有关 .

关键词： 4.1R 4.1G 4.1N 4.1B 蛋白基因4.1 基因家族

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基于蛋白质跨外膜自转运系统的细菌细胞表面蛋白展示技术研究进展

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微生物学报 2022年第2期62卷 458-475页

作者：蔡锟储引娣黄丕英韦良婉范恩国中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨... 详细信息

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa–eⅤ5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨膜步骤介导蛋白质穿过阴性菌的内外膜。据信Ⅴa型是目前已知蛋白质跨膜转运时最简单的分泌途径,故该蛋白质分泌系统作为一种生物工程手段被认为是进行外源蛋白细菌细胞表面展示的理想系统。本文概括了目前已知的自转运蛋白的种类、结构域组成及其可能的分泌机理,总结基于自转运蛋白构建细菌细胞表面展示系统的生物工程应用,特别是其在疫苗研发领域的最新研究进展,并探讨了其在病原体检测方面的潜在应用,以期深入拓展该分泌系统在生物工程方面的应用。

关键词：自转运蛋白细菌细胞表面蛋白展示蛋白质分泌活疫苗生物工程技术

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靶向整合研究进展

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第1期31卷 3-6页

作者：李竹红刘德培梁植权中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所

基因治疗的目的是将遗传物质导入细胞并使之得到适宜水平的表达，以纠正机体的遗传缺陷，恢复细胞的正常功能或杀死癌细胞及致病微生物。目前广泛应用的病毒及非病毒载体不能很好地满足临床要求，是基因治疗亟需解决的关键技术。同源重... 详细信息

基因治疗的目的是将遗传物质导入细胞并使之得到适宜水平的表达，以纠正机体的遗传缺陷，恢复细胞的正常功能或杀死癌细胞及致病微生物。目前广泛应用的病毒及非病毒载体不能很好地满足临床要求，是基因治疗亟需解决的关键技术。同源重组介导的基因靶向性整合，是遗传性疾病基因治疗的较佳方案。近年来有关同源重组研究的进展，使得其应用于基因治疗成为可能。

关键词：基因治疗整合同源重组

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非编码的mRNA

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生物化学与生物物理进展 1998年第5期25卷 387-389页

作者：罗文琴袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

非编码的ｍＲＮＡ是近年发现的一类不含典型ＯＲＦ的ｍＲＮＡ．目前已发现或克隆的这类基因主要有：Ｈ１９基因，ＸＩＳＴ基因，ＸＬＳＩＲＴ基因，Ｈｉｓ１基因，ｂｉｃ基因，ｒｏｘ１和ｒｏｘ２基因等．它们与胚胎发育，肿瘤发生及... 详细信息

非编码的ｍＲＮＡ是近年发现的一类不含典型ＯＲＦ的ｍＲＮＡ．目前已发现或克隆的这类基因主要有：Ｈ１９基因，ＸＩＳＴ基因，ＸＬＳＩＲＴ基因，Ｈｉｓ１基因，ｂｉｃ基因，ｒｏｘ１和ｒｏｘ２基因等．它们与胚胎发育，肿瘤发生及Ｘ染色体失活密切相关．

关键词：非编码 mRNA H19基因 XIST基因 His-1基因

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F-box蛋白家族的功能研究进展

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生物化学与生物物理进展 2002年第4期29卷 503-505页

作者：吴静彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

F box蛋白是一类含有F box基序 (motif) ,在泛素介导的蛋白质水解过程中具有底物识别特性的蛋白质家族 .这类蛋白质在细胞时相转换、信号传导、发育等多种生理过程中都具有重要功能 .

关键词： F-box蛋白家族功能研究进展底物识别特异性

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miR-29a和miR-142-3p促进髓系分化的基因调控网络

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基础医学与临床 2014年第7期34卷 896-903页

作者：董贺马艳妮董磊赵华路张俊武王芳余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家医学分子生物学重点实验室北京100005

目的深入了解miR-29a/miR-142-3p参与促进髓系分化的调控网络。方法首先实现miR-29a和miR-142-3p在HL-60细胞中的过表达,同时使用PMA以及ATRA分别诱导HL-60细胞向单核及粒系分化。May-GrünwaldGiemsa染色方法观察核形态变化,Real-t... 详细信息

目的深入了解miR-29a/miR-142-3p参与促进髓系分化的调控网络。方法首先实现miR-29a和miR-142-3p在HL-60细胞中的过表达,同时使用PMA以及ATRA分别诱导HL-60细胞向单核及粒系分化。May-GrünwaldGiemsa染色方法观察核形态变化,Real-time PCR检测细胞内CD11和CD14的表达。mRNA表达谱芯片分析获得表达模式相似的基因,利用DAVID和Gene MANIA进行GO categories和信号通路归类分析。Pic Tar和Target Scan进行靶基因预测,双荧光报告基因实验确定靶基因的真实性。结果 miR-29a/miR-142-3p过表达细胞与PMA/ATRA诱导分化细胞在整体基因表达模式上有较高的相似度,而表达模式相似的基因大多与细胞分化相关,且在GO分析中显著富集。同时,ZBTB5、Ca MKK2、SUV420H2、TRIB2和CANX被确定为miR-29a新的靶基因。结论 miR-29a/miR-142-3p通过调节其靶基因活性,引发整个基因表达调控网络的改变,使之趋向于髓系分化过程中的基因表达变化,从而促进髓系分化进程。

关键词： miR-29a miR-142-3p 髓系分化基因表达 GO分析

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eIF4A1与TrkA相互作用后抑制TrkA的泛素化（英文）

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生物化学与生物物理进展 2019年第8期46卷 812-822页

作者：张俊文崔迎彬陈虹黄秉仁刘福生北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心首都医科大学北京100070 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

神经生长因子(NGF)结合细胞表面受体p75NTR (p75神经营养素受体)和TrkA (酪氨酸蛋白激酶A)后介导了细胞分化、细胞生存、凋亡、增殖和侵袭等多个重要的生理病理过程. TrKA能与细胞内多个蛋白质相互作用,但是由于NGF信号通路的复杂性,现... 详细信息

神经生长因子(NGF)结合细胞表面受体p75NTR (p75神经营养素受体)和TrkA (酪氨酸蛋白激酶A)后介导了细胞分化、细胞生存、凋亡、增殖和侵袭等多个重要的生理病理过程. TrKA能与细胞内多个蛋白质相互作用,但是由于NGF信号通路的复杂性,现在仍有必要发现与之相互作用的蛋白质以更准确地了解NGF信号通路.本研究中我们通过酵母双杂交的方法筛选到了一个新的与TrKA相互作用的蛋白质——真核生物翻译起始因子4A1 (eIF4A1),然后通过谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白沉降实验(GST-pull-down)和免疫共沉淀实验(Co-IP)证明了TrkA和eIF4A1的相互作用.此外NGF能够增强TrkA和eIF4A1的相互作用.在鉴定相互作用位点实验中,我们发现eIF4A1的氨基端结构域和TrkA的TK结构域参与了相互作用. TrkA和e IF4A1共定位在细胞膜上. NGF能够引起TrkA与泛素蛋白63位的赖氨酸连接,而eIF4A1与TrkA相互作用后能够抑制TrkA与泛素蛋白63位的赖氨酸连接.综上,得出结论 e IF4A1通过与TrkA相互作用抑制其泛素化调控NGF信号通路.

关键词： TrkA eIF4A1 相互作用泛素化

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含1型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶2(ADAMTS2)多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第3期32卷 393-396,401页

作者：付俊缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的原核表达并纯化小鼠源性含1型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶2(ADAMTS2)蛋白的C段(1109-1213),制备兔抗ADAMTS2多克隆抗体。方法以重组质粒p GEX-6p-1-ADAMTS2(1109-1213)转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)... 详细信息

目的原核表达并纯化小鼠源性含1型血小板结合蛋白基序的去整合素样金属蛋白酶2(ADAMTS2)蛋白的C段(1109-1213),制备兔抗ADAMTS2多克隆抗体。方法以重组质粒p GEX-6p-1-ADAMTS2(1109-1213)转化大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过亲和纯化,并且经质谱鉴定;以表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ADAMTS2的多克隆抗体。ELISA检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性。结果在大肠杆菌中表达出目的蛋白ADAMTS2,纯化后经质谱鉴定并免疫新西兰大白兔,成功获得抗血清。血清效价达到1∶160 000以上,且具有良好的特异性。结论成功制备出效价高、特异性好的兔抗ADAMTS2抗体。

关键词： ADAMTS2 原核表达多克隆抗体

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