检索结果-内蒙古大学图书馆

中华病理学杂志 2024年第12期53卷 1238-1243页

作者：巫乔马春卉张垚李晴佟伟民牛亚梅中国医学科学院基础医学研究所暨北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的探讨RNA m6A识别蛋白YTHDF2在老年小鼠神经退行过程中的作用。方法使用表现出明显衰老特征的18月龄正常对照C57BL/6小鼠18只以及同月龄Ythdf2条件性敲除(cKO)小鼠22只,其中5对小鼠用于形态学分析,13只对照小鼠和17只Ythdf2 cKO小鼠... 详细信息

目的探讨RNA m6A识别蛋白YTHDF2在老年小鼠神经退行过程中的作用。方法使用表现出明显衰老特征的18月龄正常对照C57BL/6小鼠18只以及同月龄Ythdf2条件性敲除(cKO)小鼠22只,其中5对小鼠用于形态学分析,13只对照小鼠和17只Ythdf2 cKO小鼠用于行为学实验。首先通过免疫荧光实验检测18月龄C57BL/6正常对照小鼠脑组织中YTHDF2的表达;随后构建神经前体细胞特异性敲除Ythdf2的小鼠模型;通过体重、脑重以及HE染色初步分析老年小鼠大脑的变化;利用免疫组织化学和免疫荧光检测老年正常对照小鼠和Ythdf2 cKO小鼠中不同神经细胞特异性标志物的表达情况;最后通过行为学实验(旷场实验、新物体识别、水迷宫)检测小鼠的运动能力及学习记忆能力。结果免疫荧光染色显示YTHDF2主要在神经元中表达;与正常对照小鼠相比,Ythdf2 cKO小鼠的体重无明显变化,脑重显著下降(P<0.05);免疫染色结果显示,Ythdf2 cKO老年小鼠的海马神经元数量减少、星形胶质细胞数量减少且形态缺陷、小胶质细胞增多和活化(P<0.05);行为学测试显示Ythdf2 cKO老年小鼠的运动能力下降、学习记忆能力受损(P<0.05)。结论老年小鼠脑组织中YTHDF2主要在神经元中表达,Ythdf2缺失会造成小鼠海马神经细胞的数量与结构异常,并损害其运动能力和学习记忆,这提示YTHDF2在老年小鼠的神经退行过程中发挥重要作用。

关键词：甲基化小鼠,基因敲除 YTHDF2 神经退行性病变

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低压低氧刺激后小鼠小脑中RNA m6A甲基化调控因子表达的变化

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中华病理学杂志 2024年第5期53卷 452-457页

作者：肖灵凤马春卉赵顺莉李晴刘春英牛亚梅佟伟民中国医学科学院基础医学研究所暨北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的探讨RNA m6A甲基化在低压低氧引起的小脑发育障碍中可能发挥的作用。方法将出生后5 d的C57/BL6小鼠放置于低压低氧饲养舱中连续处理9 d后,首先通过体重、脑重以及HE染色的方式来初步分析小鼠小脑发育情况;其次,利用免疫组织化学和... 详细信息

目的探讨RNA m6A甲基化在低压低氧引起的小脑发育障碍中可能发挥的作用。方法将出生后5 d的C57/BL6小鼠放置于低压低氧饲养舱中连续处理9 d后,首先通过体重、脑重以及HE染色的方式来初步分析小鼠小脑发育情况;其次,利用免疫组织化学和免疫荧光染色法检测小脑中不同类型细胞特异性标志物的表达以解析其细胞结构的紊乱程度;然后利用即时荧光定量聚合酶链反应、Western blot和免疫组织化学染色方法检测小鼠小脑中RNA m6A主要调控因子的表达变化。结果相比于对照组小鼠,低压低氧小鼠体重、脑重以及小脑体积显著减小(P<0.01);不同类型细胞特异性标志物的免疫染色结果显示,NeuN(成熟神经元)表达下降,Calbindin-D28K(浦肯野细胞)和胶质纤维酸性蛋白(星形胶质细胞)的表达下降(P<0.01),且细胞分布紊乱;RNA m6A主要调控因子的表达分析结果显示,甲基转移酶METTL3在低压低氧小鼠小脑中的表达显著下调(P<0.05)。结论低压低氧刺激会造成小鼠小脑发育障碍,成熟神经元、浦肯野细胞和星形胶质细胞结构异常;与常压常氧小鼠相比,低压低氧刺激后小鼠小脑METTL3表达下降,提示其介导的RNA m6A甲基化可能在低压低氧引起的小脑发育障碍过程中发挥重要的作用。

关键词：小脑细胞低氧 RNA甲基化甲基转移酶类

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DNA结构和染色体构象与癌症研究进展

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中华病理学杂志 2018年第10期47卷 814-816页

作者：孙昊刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

随着基因组科学研究地深入开展，干扰RNA、非编码RNA对基因调控作用的研究越来越深入，发现了越来越多的非线性、超远程的染色体相互作用。在细胞核中每条染色体或染色质都有自己的位置和疆界，它们相互交错，共同维持着基因转录网。在... 详细信息

随着基因组科学研究地深入开展，干扰RNA、非编码RNA对基因调控作用的研究越来越深入，发现了越来越多的非线性、超远程的染色体相互作用。在细胞核中每条染色体或染色质都有自己的位置和疆界，它们相互交错，共同维持着基因转录网。在肿瘤细胞中，细胞功能的变异往往受到核内DNA链结构和染色体构象的影响。DNA局部的链结构异常、压缩或长程邻近，都导致DNA受到核内不同功能区域的调节。这些改变在肿瘤发生发展中的作用，值得探讨。DNA构象研究的方法，近年有不少新进展，包括高分辨及立体捕获技术，因而对DNA的构象及其在包括致癌物在内的物质对DNA构象和功能的研究，也取得了新认识。本文对近年来这方面的突出进展做一综述。

关键词： DNA结构 DNA构象染色体癌症非编码RNA 肿瘤发生发展干扰RNA 科学研究

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中华病理学杂志 2009年第8期38卷 537-541页

作者：杨振丽刘玉琴卞晓翠顾蓓冯海凉杨丽娟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的探讨囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能。方法用1％TritonX—114提取DCS细胞膜蛋白，用已制备的DCS细胞多克隆抗体（pAb）及蛋白A＋G琼脂糖进行免疫沉淀，所得样品利用质谱技术进行分析，... 详细信息

目的探讨囊泡运输相关蛋白VAP-33在小鼠树突状细胞肉瘤细胞株DCS细胞中的表达及其功能。方法用1％TritonX—114提取DCS细胞膜蛋白，用已制备的DCS细胞多克隆抗体（pAb）及蛋白A＋G琼脂糖进行免疫沉淀，所得样品利用质谱技术进行分析，检测到VAP-33蛋白在DCS细胞中有表达，继而DCS细胞经不同量抗原（150、850、1500μl）刺激24、48、72h后观察细胞形态及吞噬能力的变化，同时通过间接免疫荧光、共聚焦显微镜、Western blot等方法检测了VAP．33的分布及表达变化。0．5mol／L胰岛素刺激DCS细胞20min后，采用Western blot检测DCS细胞全蛋白、胞质蛋白、膜蛋白中VAP-33、葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4）的表达变化，共聚焦方法观察胰岛素刺激前后VAP-33和GLUT-4在DCS细胞中的表达及定位变化。实验中均以常规培养的DCS细胞作为对照。结果VAP-33蛋白主要表达在DCS细胞膜和胞质中；在外来抗原刺激下，随抗原量的增加及作用时间的延长DCS细胞趋向成熟树突状细胞，VAP-33表达量降低，对辣根过氧化物酶的吞噬能力增强。胰岛素刺激后，VAP-33与GLUT-4有共定位。结论VAP-33在树突状细胞来源的肿瘤细胞中表达，与树突状细胞的抗原加工有关，在葡萄糖的转运中起一定作用。

关键词：树突细胞细胞系肿瘤抗原呈递葡萄糖转运体4型

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抗阿尔茨海默病Aβ人源单链抗体基因的筛选和表达

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中华病理学杂志 2008年第6期37卷 400-404页

作者：贾静刘喆赵雪梅梁平中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的从人源噬菌体单链抗体库中筛选与阿尔茨海默病发病中起关键作用的B淀粉样多肽（Aβ）142特异性结合的单链可变区抗体（scFv）基因，利用原核生物大肠杆菌进行可溶性表达，以获得抗Aβ142人源抗体。方法利用噬菌体展示技术对人源噬... 详细信息

目的从人源噬菌体单链抗体库中筛选与阿尔茨海默病发病中起关键作用的B淀粉样多肽（Aβ）142特异性结合的单链可变区抗体（scFv）基因，利用原核生物大肠杆菌进行可溶性表达，以获得抗Aβ142人源抗体。方法利用噬菌体展示技术对人源噬菌体单链抗体库进行多轮富集，以AB1-42啦为抗原经酶联免疫吸附（ELISA）检测，筛选与Aβ1-42特异性结合的阳性噬菌体克隆，再用阳性噬菌体感染*** HB2151进行可溶性表达，经SDS-PAGE、Western blot及ELISA法检测scFv单抗的可溶性表达水平及抗原结合活性。并对阳性scFv抗体基因进行基因测序鉴定。结果获得了7个特异性的抗Aβ1-42scFv阳性噬菌体克隆，其中4个克隆ELISA检测吸光度值（A值）高于阴性对照5倍以上；其中1株（A10）获得可溶性单链抗体的成功表达，表达产物主要位于菌体中，ELISA效价显示在全菌蛋白中A值高于对照5倍以上。其相对分子质量约为33000。DNA测序表明所获抗体的可变区基因属于scFv抗体基因，推导得到的氨基酸序列具有典型的抗体可变区结构。结论用人源噬菌体单链抗体库筛选出抗Aβ1-42越的人源抗体单链可变区基因，并成功表达了具有抗原结合活性的可溶性单链抗体，为进一步研究阿尔茨海默病的发病机制和治疗奠定了基础。

关键词：阿尔茨海默病大肠杆菌噬菌体淀粉样β蛋白抗体生成

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囊泡膜蛋白相关蛋白VAP33对小鼠树突状细胞肉瘤恶性行为的抑制作用

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中国肿瘤临床 2012年第12期29卷 817-821页

作者：赵文晶杨振丽顾蓓冯海凉张敏刘艳艳李占稳刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院病理学系北京市100005

目的：探讨囊泡膜蛋白相关蛋白（VAP33）过表达对小鼠树突状肉瘤细胞DG6增殖及侵袭转移的影响。方法：反转录获得VAP33cDNA，利用基因重组技术构建VAP33-GFP融合基因慢病毒表达载体（pWPXL-VAP33），在脂质体Lipofectamine2000介导下与... 详细信息

目的：探讨囊泡膜蛋白相关蛋白（VAP33）过表达对小鼠树突状肉瘤细胞DG6增殖及侵袭转移的影响。方法：反转录获得VAP33cDNA，利用基因重组技术构建VAP33-GFP融合基因慢病毒表达载体（pWPXL-VAP33），在脂质体Lipofectamine2000介导下与辅助质粒（PsPAx2、MD2G）共转染293T细胞包装生产重组慢病毒。取病毒上清感染内源性低表达VAP33的DG6细胞，通过荧光显微镜挑选、Western-blot鉴定获得VAP33稳定过表达的阳性单克隆细胞株（DG6-VAP33）。M1vr法检测细胞增殖情况，Transwell和集落形成检测肿瘤细胞体外侵袭、成瘤能力。同时建立小鼠皮下移植瘤模型，连续6周观察VAP33过表达对活体内肿瘤细胞生长、成瘤、转移能力的影响。结果：重组慢病毒表达载体pWPXL-VAP33构建成功，包装滴度达6×10^3IU／mL，感染DG6细胞后筛选到VAP33稳定过表达细胞株（DG6-VAP33）。与DG6细胞相比，DG6-VAP33细胞体外增殖减慢，每孔集落数分别为（52±8）个和（36±5）个（P〈0．05）；Transwell方法观察到，DG6-VAP33细胞体外侵袭能力显著下降，穿膜细胞数（14＋11）个少于DG6（36±17）个（P〈0．01）。通过6周的连续观察，DG6-VAP33组肿瘤生长速度显著慢于DG6组，成瘤率50％（5／10）、肺转移率（0）也明显降低（DG6组成瘤率100％、肺转移率80％）。结论：VAP33过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、成瘤及侵袭转移能力。

关键词：树突状肉瘤细胞株囊泡膜蛋白相关蛋白增殖侵袭转移

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国内建立的人肿瘤细胞系的身份认证问题及对策

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解剖学报 2019年第2期50卷 201-210页

作者：卞晓翠刘玉琴杨振丽冯海凉中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系细胞资源中心北京100005

目的为国内建立的人肿瘤细胞系进行身份认证,确认这些细胞系使用的可靠性。方法收集、整理国内实验室建立的人肿瘤来源细胞系,提取细胞的基因组DNA,PCR扩增其中的多个短串联重复序列(STRs)位点后进行毛细管电泳,分析获得细胞的STR图谱... 详细信息

目的为国内建立的人肿瘤细胞系进行身份认证,确认这些细胞系使用的可靠性。方法收集、整理国内实验室建立的人肿瘤来源细胞系,提取细胞的基因组DNA,PCR扩增其中的多个短串联重复序列(STRs)位点后进行毛细管电泳,分析获得细胞的STR图谱作为细胞系的DNA指纹,然后与原始组织或国际数据库中已有细胞的STR谱进行比对,通过匹配度的高低判断该细胞是否被其他细胞交叉污染。对怀疑He La细胞污染的肿瘤细胞,检测其基因组中是否有人乳头瘤病毒18型(HPV-18)病毒插入片段。对怀疑T细胞白血病细胞污染的,则检测T细胞的各种特性(表面标志),根据表面标志表达情况判断是否为错误细胞。结果本研究共收集了37种国内建立的肿瘤细胞系46个样品。本中心建立的6株细胞系均STR正确。其他单位建立的细胞系中有8株系正确,有23(62. 2%)株系认定为错误细胞,人宫颈癌细胞He La是主要污染源;另外发现有些国内自建的细胞系被人结直肠癌细胞HCT-8、宫颈鳞癌细胞Si Ha、T细胞白血病细胞CCRF-CEM及大鼠细胞污染。结论国内建立的肿瘤细胞很高比例地发生了细胞间的交叉污染,科研人员在实验前一定要首先进行细胞身份认定,或者从国家实验细胞资源共享服务平台选择细胞。另外,建立细胞系时保留原始组织用于后续细胞系的身份认证。

关键词：短串联重复序列分型交叉污染特性鉴定聚合酶链反应肿瘤细胞细胞培养人

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蛋白磷酸酶2A催化亚基C在小鼠脑与阿尔茨海默病患者脑中的表达

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中华病理学杂志 2018年第9期47卷 714-718页

作者：丁菁李晴牛亚梅佟伟民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005 中国医学科学院神经科学中心

目的为了研究蛋白磷酸酶2A催化亚基C（PP2AC）在中枢神经系统中的功能与疾病相关性。探讨其在小鼠脑中与阿尔茨海默病患者脑中的表达情况。方法应用成年野生型小鼠全身组织、不同年龄野生型小鼠脑组织：阿尔茨海默病患者与正常人的额叶... 详细信息

目的为了研究蛋白磷酸酶2A催化亚基C（PP2AC）在中枢神经系统中的功能与疾病相关性。探讨其在小鼠脑中与阿尔茨海默病患者脑中的表达情况。方法应用成年野生型小鼠全身组织、不同年龄野生型小鼠脑组织：阿尔茨海默病患者与正常人的额叶皮质，分别制作石蜡切片和提取组织蛋白。通过免疫组织化学染色检测PP2AC在小鼠各年龄不同脑区和阿尔茨海默病患者及正常人脑样本中的表达：应用免疫印迹法检测PP2AC在小鼠全身各器官和各年龄段大脑皮质中的表达。结果在成年小鼠各器官中，PP2AC在中枢神经系统中的表达丰度最高；从胚胎第18．5天到出生后2年的小鼠脑组织中PP2AC在不同脑区呈显著的时空特异性表达模式，且PP2AC在大脑皮质呈年龄相关性表达升高的趋势。与正常人样本相比较，阿尔茨海默病患者额叶皮质中Aβ1-42表达和Tau蛋白磷酸化水平升高，而PP2AC明显减少。结论PP2AC在小鼠脑中以及在阿尔茨海默病患者脑中表达降低的时空特异性表达模式，提示PP2AC在中枢神经系统中有重要作用，且PP2AC表达下降可能与阿尔茨海默病相关。

关键词：阿尔茨海默病脑脑图年龄因素蛋白磷酸酶

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线粒体内膜蛋白Mic60半量缺失与小鼠心脏衰老的相关性

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中华病理学杂志 2017年第6期46卷 406-410页

作者：王春楼孙立红岳永松牛亚梅佟伟民中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005 中国医学科学院基础医学研究所实验动物中心中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院感染科

目的初步探索线粒体内膜蛋白Mic60与小鼠心脏衰老的关系.方法将野生型及Mic60杂合缺失雄性小鼠分为青年组（4~6个月龄,6对）及老年组（18~20个月龄,9对）,取心脏,制作石蜡、冷冻切片,提取组织蛋白.应用苏木精-伊红、Masson染色法鉴定... 详细信息

目的初步探索线粒体内膜蛋白Mic60与小鼠心脏衰老的关系.方法将野生型及Mic60杂合缺失雄性小鼠分为青年组（4~6个月龄,6对）及老年组（18~20个月龄,9对）,取心脏,制作石蜡、冷冻切片,提取组织蛋白.应用苏木精-伊红、Masson染色法鉴定小鼠心脏组织形态学变化;衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测小鼠心肌组织中β-半乳糖苷酶活性;应用免疫印迹法检测野生型小鼠心肌组织中Mic60的表达及各组小鼠心肌组织中衰老相关蛋白p21的表达.结果野生小鼠心肌组织中Mic60蛋白表达呈现年龄依赖性增高.Mic60杂合缺失导致老年小鼠左心室壁肥厚[（1.32±0.09）mm比（1.12±0.09）mm,P〈0.05]、心肌细胞肥大[（474.9±27.6）μm2比（358.8±48.7）μm2,P〈0.05]及心肌间质纤维化面积增多[（38.24±7.58）×10^3μm2比（25.81±4.12）×10^3μm2,P〈0.05],但对年轻小鼠无显著影响.同时,Mic60杂合缺失导致老年小鼠心脏衰老相关β-半乳糖苷酶活性上调（2.26±0.24比0.25±0.05,P〈0.01）,对年轻小鼠无明显影响.另外,Mic60杂合缺失老年小鼠心肌组织中衰老相关蛋白p21表达显著增加（P〈0.01）.结论通过对青年及老年组小鼠心脏衰老相关指标的检测,发现Mic60半量缺失可导致老年小鼠心肌肥厚、心肌间质纤维化及衰老相关β-半乳糖苷酶活性上调和衰老相关蛋白p21表达增加,提示线粒体内膜蛋白Mic60可能与小鼠心脏衰老有关.

关键词：肌细胞,心脏线粒体蛋白质类年龄因素动物实验

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分泌IL-21的白血病细胞系的建立及其抑瘤作用

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基础医学与临床 2014年第7期34卷 961-967页

作者：朱琰孙蕊王春景刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系北京100005

目的建立及鉴定稳定表达白介素21的4种白血病细胞系,并初步分析其刺激活化的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。方法构建携带白介素21和红色荧光蛋白基因的质粒,包装慢病毒,感染4种白血病细胞系,连续传代后,通过荧光显微镜、流式细胞仪和EL... 详细信息

目的建立及鉴定稳定表达白介素21的4种白血病细胞系,并初步分析其刺激活化的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。方法构建携带白介素21和红色荧光蛋白基因的质粒,包装慢病毒,感染4种白血病细胞系,连续传代后,通过荧光显微镜、流式细胞仪和ELISA法鉴定建立的4种细胞系。以稳定分泌IL-21白血病细胞为抗原刺激外周血单个核细胞增殖,细胞分析计数仪检测增殖倍数,流式细胞仪分析淋巴细胞的表型,细胞计数试剂盒(CCK8)检测增殖后的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。结果建立稳定表达IL-21的4种细胞系:K562-IL-21、THP-1-IL-21、jurkat E6-1-IL-21和RPMI8226-IL-21。3份人PBMC在4种分泌IL-21的白血病细胞的作用下都有增殖,增殖倍数在1.147±0.057~2.725±0.345倍之间。不同数量的IL-21分泌白血病细胞都可激活淋巴细胞增殖,增殖的倍数在1.127±0.152~2.213±0.200之间。增殖后CD3+T淋巴细胞和CD56+NK细胞的比例降低(P<0.05),CD19+B淋巴细胞比例增加(P<0.05);由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞的杀伤作用明显高于对照组。由分泌IL-21白血病细胞激活后的淋巴细胞对母系白血病细胞和其他7种肿瘤细胞均有杀伤作用,杀伤率在(28.68±9.31)%^(78.45±0.61)%之间。结论 4种分泌IL-21的白血病细胞可刺激PBMC增殖并激活其对肿瘤细胞的杀伤作用。

关键词：白血病细胞系白介素21 肿瘤治疗

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