检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 507-510页

作者：付俊缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金... 详细信息

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂和谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B树脂两次亲和纯化和分子筛分离目的蛋白;以表达的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ACTL7a的多克隆抗体。ELISA检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性,免疫荧光组织化学技术检测ACTL7a在曲精小管细胞的表达。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a(1-70),纯化后免疫新西兰大白兔,成功获得抗血清。血清效价达到1:160000以上,且具有良好的特异性。结论成功构建了ACTL7a基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,经纯化获得高纯度的目的蛋白;制备出兔抗ACTL7a抗体,效价及特异性均良好。

关键词： ACTL7a 原核表达多克隆抗体

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孤独症的遗传学和神经生物学研究进展

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中国科学：生命科学 2015年第8期45卷 717-724页

作者：朱春燕许琪中国医学科学院基础医学研究所&北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

孤独症是一种遗传度高达90%的多基因复杂疾病,具有典型的遗传和表型异质性,并受到环境因素的影响.本文对近年来孤独症遗传学、表观遗传学和神经生物学3方面的进展进行了简要综述.细胞遗传学法、全基因组扫描及候选基因法是孤独症分子遗... 详细信息

孤独症是一种遗传度高达90%的多基因复杂疾病,具有典型的遗传和表型异质性,并受到环境因素的影响.本文对近年来孤独症遗传学、表观遗传学和神经生物学3方面的进展进行了简要综述.细胞遗传学法、全基因组扫描及候选基因法是孤独症分子遗传学研究中较为常见的3种方法.虽然应用上述方法发现了一些孤独症易感基因集中的染色体区域,但确切的致病或易感基因仍未被检出.因而,越来越多的关注被集中于如何提高样本同质性、如何将遗传学机制与环境作用相联系、如何提高微效基因的检出率上.在提高样本同质性方面,功能核磁共振及交叉表型的研究正在进行.同时,表观遗传学的研究可以联系遗传与环境因素,从而更好地解释孤独症的发病机制.目前,对染色体上表观遗传与遗传共同调控的区域,如7号和15号染色体长臂,进行了大量研究.在神经生物学方面,神经递质、神经发育及神经免疫学假说均有一定的进展.其中,针对神经递质的研究主要集中于5-羟色胺、?-氨基丁酸及谷氨酸.在神经发育假说方面,神经发育相关蛋白,如肝细胞生长因子、神经生长因子及Reelin,研究得较为深入.

关键词：孤独症分子遗传学表观遗传学神经生物学

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PGC-1β调节大鼠ALAS-1基因表达机制的初步探讨

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 587-592页

作者：刘阳邵迪方福德常永生中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测PGC-1β在人肝癌细胞(Hep G2)和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达。方法在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统检测过表达PGC-1β时大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化。同时构建了5′端顺式元件系列截短和... 详细信息

目的检测PGC-1β在人肝癌细胞(Hep G2)和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达。方法在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统检测过表达PGC-1β时大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化。同时构建了5′端顺式元件系列截短和突变的ALAS-1启动子报告基因,检测并分析介导PGC-1β作用的转录因子结合元件。分离肝原代细胞并检测PGC-1β对ALAS-1转录的影响。构建干扰NRF-1基因的siRNA腺病毒,证明NRF-1介导PGC-1β激活ALAS-1启动子转录的作用。结果在Hep G2细胞中,过表达PGC-1β显著促进ALAS-1表达。分别构建了FoxA2和NRF1结合元件突变的ALAS-1启动子,发现PGC-1β对NRF1突变的ALAS-1启动子的激活作用显著下降,而FoxA2作用不明显。在肝原代细胞中过表达PGC-1β促进了ALAS-1的转录。当用小RNA干扰NRF-1的表达后,则抑制了PGC-1β对ALAS-1转录的促进作用。结论在Hep G2和大鼠肝原代细胞中,PGC-1β能够促进ALAS-1基因的表达,并且这种作用是通过NRF-1介导完成的。

关键词： PGC-1β NRF-1 ALAS-1 转录调控

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重组融合蛋白EGF-E4orf4多聚体的鉴定及结构分析

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中国生物工程杂志 2012年第7期32卷 1-7页

作者：倪蓓蓓范真真陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的:确认重组融合蛋白EGF-E4orf4为多聚体及其具有EGFR结合活性。方法:通过凝胶过滤层析、SDS-PAGE和免疫印迹分析重组融合蛋白EGF-E4orf4是否形成聚合物。利用动态光散射、静态光散射和圆二色谱测定EGF-E4orf4的分子半径、分子量和二... 详细信息

目的:确认重组融合蛋白EGF-E4orf4为多聚体及其具有EGFR结合活性。方法:通过凝胶过滤层析、SDS-PAGE和免疫印迹分析重组融合蛋白EGF-E4orf4是否形成聚合物。利用动态光散射、静态光散射和圆二色谱测定EGF-E4orf4的分子半径、分子量和二级结构。应用流式细胞术分析EGF-E4orf4与细胞表面EGFR结合能力。结果:凝胶过滤等方法证实EGF-E4orf4形成了多聚体,光散射实验证明了EGF-E4orf4多聚体的分子量和分子半径分别为1.656×107Da、67.90nm,约为820聚体。圆二色谱表明该聚合体融合蛋白含有大量的β-折叠结构。受体结合实验证明该聚合物具有EGFR结合活性。结论:重组融合蛋白EGF-E4orf4以蛋白多聚体形式存在,可以与EGFR结合。因此,EGF-E4orf4作为一种新型靶向性抗肿瘤药物,具有潜在的临床应用前景。

关键词： EGF-E4orf4 多聚体光散射圆二色谱生物学活性

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一种用作阴性对照的siRNA可诱导人K562细胞向红系分化

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中国生物化学与分子生物学报 2011年第4期27卷 330-336页

作者：范翠青朱宁沈岩陈梅红中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

我们发现,一种在RNA干扰实验中用作阴性对照的商业化siRNA具有明显的诱导人慢性髓性白血病K562细胞系向红系方向分化的作用.它表现为K562细胞瞬时转染该siRNA后,红系分化的特异表面标志CD235及ε-、γ-和β-珠蛋白的表达升高,GATA-2的... 详细信息

我们发现,一种在RNA干扰实验中用作阴性对照的商业化siRNA具有明显的诱导人慢性髓性白血病K562细胞系向红系方向分化的作用.它表现为K562细胞瞬时转染该siRNA后,红系分化的特异表面标志CD235及ε-、γ-和β-珠蛋白的表达升高,GATA-2的表达降低,细胞增殖速度减慢,软琼脂克隆形成率降低,并且此过程不伴随细胞凋亡.而生物信息学分析显示,该siRNA序列与目前所有已知人类基因均无明显同源性.研究结果提示,该siRNA不适于用作红系分化实验中的阴性对照.siRNA的作用远比人们目前所知的要复杂得多,siRNA的脱靶效应应当引起研究者的足够重视,在RNA干扰实验中阴性对照siRNA的选择会极大地影响对实验结果的判读.

关键词： siRNA K562细胞红系分化

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非编码RNA与动物发育

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中国科学（C辑） 2009年第1期39卷 21-30页

作者：黄守均朱大海北京协和医学院基础学院/中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是指不翻译产生蛋白质的RNA.近年来,对ncRNA在基因表达调控中的功能进行了广泛的研究,ncRNA在发育、代谢和疾病等生命活动中都起着重要的作用.本文总结了ncRNA在胚胎发育、干细胞维持和器官发生等动物... 详细信息

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是指不翻译产生蛋白质的RNA.近年来,对ncRNA在基因表达调控中的功能进行了广泛的研究,ncRNA在发育、代谢和疾病等生命活动中都起着重要的作用.本文总结了ncRNA在胚胎发育、干细胞维持和器官发生等动物发育过程中的作用.

关键词： ncRNA发育干细胞基因印记

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反转录病毒载体介导的人β-珠蛋白基因在小鼠体内整合和表达的实验研究

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中华医学杂志 1999年第2期79卷 121-124页

作者：翟锦彬刘德培王晶陈迪郑勇梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用... 详细信息

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用回体（ｅｘｖｉｖｏ）基因转移策略，分析人β珠蛋白基因在小鼠体内的整合及表达。结果病毒重组体的病毒滴度在“乒乓”超感染后有明显提高，最高病毒滴度约为１×１０６ＣＦＵ／ｍｌ；在小鼠ＣＦＵＳ１２（第１２天脾结节）中检测到２个重组体中人β珠蛋白基因的整合，表达水平约为内源性鼠α珠蛋白基因的０５％～５％。在２只长期造血重建小鼠的骨髓、脾、胸腺及另一只小鼠的骨髓及脾中整合有人β珠蛋白基因，在一只重建小鼠的骨髓和脾中有人β珠蛋白基因表达，约为鼠α珠蛋白基因的７％。结论反转录病毒载体介导的人β珠蛋白基因可稳定整合在小鼠骨髓造血干细胞中。

关键词：珠蛋白基因表达 β地中海贫血

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亚硒酸钠通过AMPK/mTOR通路调控白血病NB4细胞凋亡

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基础医学与临床 2013年第3期33卷 297-302页

作者：段婧罗慧史可鉴杨洋许彩民中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院北京100005

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及... 详细信息

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及P70S6K的磷酸化水平、流式细胞术检测NB4细胞凋亡率;免疫共沉淀法检测AMPK和mTOR的相互作用。结果亚硒酸钠可以上调NB4细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR及P70S6K的磷酸化水平;AICAR和亚硒酸钠单独处理具有类似的促进NB4细胞凋亡的效果;干扰AMPK后,mTOR及P70S6K的磷酸化水平上升,亚硒酸钠对NB4细胞的促凋亡作用被拮抗;AMPK和mTOR有直接相互作用。结论亚硒酸钠可通过激活AMPK表达,抑制mTOR及P70S6K,促进NB4细胞凋亡。

关键词：亚硒酸钠白血病 AMPK mTOR

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CD3ε和5-氟尿嘧啶在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达

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中华医学杂志 2003年第22期83卷 1962-1967页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM... 详细信息

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 /或 5 FU(2 5 μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡 ,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率 ,并计算细胞死亡率 ;用瞬时转染野生型或突变型P5 3表达质粒的方法和Western印迹检测P5 3蛋白质的表达 ,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果　在CD3ε和 5 FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中 ,均伴随着P5 3蛋白质表达增加 ;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P5 3蛋白质表达显著增加 ;P5 3过表达可明显增加T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。结论　抗CD3ε抗体和 5 FU联合作用可显著提高P5 3蛋白质表达 ,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。

关键词： CD3ε 5-氟尿嘧啶 T淋巴细胞凋亡协同作用 P53 表达单克隆抗体

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靶向细胞衰老在血管疾病中的作用及其潜在应用

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中国科学：生命科学 2022年第5期52卷 682-690页

作者：王惠瑜丁杨楠魏子钰陈厚早刘德培中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

血管衰老是指血管发生形态、结构改变及功能失常的一系列退行性变化的过程.随着血管衰老、动脉粥样硬化等血管性疾病的发病风险显著增加,血管衰老成为探索衰老相关性血管疾病干预策略的重要方向,改变血管衰老的进程有望延缓心血管疾病发... 详细信息

血管衰老是指血管发生形态、结构改变及功能失常的一系列退行性变化的过程.随着血管衰老、动脉粥样硬化等血管性疾病的发病风险显著增加,血管衰老成为探索衰老相关性血管疾病干预策略的重要方向,改变血管衰老的进程有望延缓心血管疾病发生.细胞衰老是血管衰老的重要基础,以往的研究集中于血管内皮细胞衰老在血管衰老和血管性疾病中的作用,而对于血管平滑肌细胞衰老的认识较少.本文重点讨论了血管细胞中平滑肌细胞的衰老及其在血管性疾病发病中的研究进展,并阐述了血管衰老细胞的清除(senotherapy)在延缓衰老和衰老相关血管性疾病中的作用,以期为促进血管健康和延缓衰老相关血管性疾病提供新策略.

关键词：血管衰老平滑肌细胞衰老血管性疾病 senotherapy

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