检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2009年第4期29卷 337-341页

作者：王先平赵理朱镜羲彭小忠阴彬中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的对Musashi1发挥功能的RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法通过构建Musashi1 RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果通过系统筛选... 详细信息

目的对Musashi1发挥功能的RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法通过构建Musashi1 RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。

关键词： RNA结合蛋白 Musashi1 RRM1 蛋白表达和纯化结晶

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miR-9和miR-9＊在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制

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中国医学科学院学报 2015年第3期37卷 253-258页

作者：刘伟刘畅阴彬彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院人体解剖与组织胚胎学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院神经科学中心北京100005

目的探讨miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制。方法选取4-、8-、12-月龄快速老化倾向小鼠(SAMP8)作为研究对象,并以同月龄快速老化抵制小鼠(SAMR1)为对照,每组3只,取脑,切片进行原位杂交检测miR-9和miR-9*的表达;分别以miR-9和... 详细信息

目的探讨miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制。方法选取4-、8-、12-月龄快速老化倾向小鼠(SAMP8)作为研究对象,并以同月龄快速老化抵制小鼠(SAMR1)为对照,每组3只,取脑,切片进行原位杂交检测miR-9和miR-9*的表达;分别以miR-9和miR-9*的模拟物和抑制物转染N2a细胞,采用流式细胞术检测过表达和敲低miRNA对细胞周期的影响;生物信息学预测miR-9和miR-9*靶基因并进行双荧光素酶报告基因实验验证。结果 miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠海马区的表达低于SAMR1小鼠。敲低miR-9和miR-9*都可以增加N2a细胞G1期细胞在群体中的比例,减少S期细胞在群体中的比例,过表达则相反。生物信息学预测并通过文献筛选miR-9的靶基因有PSEN1、SCN2B、MAP3K3和BACE1,miR-9*的靶基因有CDKn1c。荧光素酶报告基因实验证实miR-9的靶基因是MAP3K3,miR-9*的靶基因是CDKn1c。结论 miR-9和miR-9*可能是分别通过其靶基因MAP3K3和CDKn1c在SAMP8小鼠衰老进程中发挥重要作用。

关键词： miR-9 miR-9＊衰老 SAMP8小鼠 SAMR1小鼠靶基因

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利用流式细胞术检测LPS刺激活化后小鼠腹腔巨噬细胞体积的变化

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 767-770页

作者：刘音刘硕王文蝶朱军陈朱波姜明红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨小鼠腹腔巨噬细胞经脂多糖(LPS)刺激活化后体积的变化。方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞3和24 h后,用倒置显微镜观察细胞的形态,用ELISA法检测细胞上清中IL-6的含量,用流式细胞术定量检测细胞活化后的体积。结果小鼠腹腔巨噬细胞... 详细信息

目的探讨小鼠腹腔巨噬细胞经脂多糖(LPS)刺激活化后体积的变化。方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞3和24 h后,用倒置显微镜观察细胞的形态,用ELISA法检测细胞上清中IL-6的含量,用流式细胞术定量检测细胞活化后的体积。结果小鼠腹腔巨噬细胞在正常状态下呈圆型,细胞边缘光滑无伪足,胞质内无空泡。经LPS刺激3 h后,小鼠腹腔巨噬细胞的表面积变大,伸出伪足,伪足的数量和长度随时间延长而逐渐增多和增长,胞质内的空泡也逐渐增加;24 h后,细胞表面积明显增大,伪足牵拉使细胞形状呈梭型。LPS处理后细胞上清中IL-6的含量较对照组显著增加(P<0.01)。流式细胞术检测发现细胞的前向角散射光(FSC)的数值(代表细胞大小)随LPS刺激时间的延长而增加,3和24 h分别增加了11.0%(P<0.05)和20.2%(P<0.01);侧向角散射光(SSC)的数值(代表表面颗粒数)也逐渐增加,3和24 h分别增加了21.6%(P<0.05)和68.0%(P<0.01)。结论流式细胞术可以定量检测小鼠腹腔巨噬细胞经LPS活化后的体积变化,为天然免疫细胞的活化研究提供了新的检测手段。

关键词： LPS 巨噬细胞活化流式细胞术

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酵母双杂交技术筛选NECL1胞内区的结合蛋白

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基础医学与临床 2009年第2期29卷 119-123页

作者：李晨陈涛阴彬龚燕华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选人源膜表面黏附分子NECL1蛋白胞内区相互作用蛋白。方法构建含人NECL1蛋白胞内区氨基酸编码序列的诱饵质粒pGBKT7N-ECL1C,对人胎脑cDNA文库进行酵母双杂交筛选。用GST pu ll down实验进行体外蛋白相互作用的验证。结果酵母双杂... 详细信息

目的筛选人源膜表面黏附分子NECL1蛋白胞内区相互作用蛋白。方法构建含人NECL1蛋白胞内区氨基酸编码序列的诱饵质粒pGBKT7N-ECL1C,对人胎脑cDNA文库进行酵母双杂交筛选。用GST pu ll down实验进行体外蛋白相互作用的验证。结果酵母双杂交阳性克隆测序后显示共存在9段不同序列(存在重复克隆)。比对氨基酸序列得到5个可能相互作用蛋白。通过GST pu ll down实验验证了其中两个蛋白与NECL1胞内区的相互作用。结论应用酵母双杂交系统,获得了一些候选的NECL1胞内区相互作用蛋白。

关键词：酵母双杂交 NECL1 相互作用蛋白

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儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Ala22/72Ser多态性与精神分裂症的相关性及初步功能学探索

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基础医学与临床 2009年第5期29卷 449-452页

作者：王彦房岳许琪沈岩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因单核苷酸多态性(SNP)位点Ala22/72Ser与北方汉族人群精神分裂症(SCZ)之间的关系。方法在506例SCZ患者中,用聚合酶链式反应(PCR),对COMT基因Ala22/72Ser位点进行基因分型;用阳性与阴性症状量表(... 详细信息

目的研究儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因单核苷酸多态性(SNP)位点Ala22/72Ser与北方汉族人群精神分裂症(SCZ)之间的关系。方法在506例SCZ患者中,用聚合酶链式反应(PCR),对COMT基因Ala22/72Ser位点进行基因分型;用阳性与阴性症状量表(PANSS)对患者的精神病性症状的严重程度进行评分;同时用Real-Time PCR测定COMT基因的表达量。结果在SCZ患者中,携带Ser等位基因和Ser/Ala基因型的患者的阳性症状总分和一般精神病理症状总分显著升高(P<0.01),而且COMT基因的表达量显著降低(P<0.01)。结论COMT基因的Ala22/72Ser多态性与SCZ患者的阳性症状和一般精神病理症状的严重程度相关,而且与COMT基因表达量相关。

关键词：儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因精神分裂症(SCZ) 单核苷酸多态性(SNP)

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组胺刺激棕色和米色脂肪产热

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生理学报 2021年第5期73卷 821-827页

作者：冯月瑶张玉洁常永生天津医科大学基础医学院生理与病理生理学系天津300070 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

3-肾上腺素受体激动剂能够刺激棕色脂肪适应性产热,并能促进白色脂肪米色化。然而到目前为止,有哪些代谢产物参与介导β3-肾上腺素受体激动剂促进脂肪产热作用尚不清楚。本研究通过给予8周龄C57/BL6J雄性小鼠腹腔注射β3-肾上腺素受体... 详细信息

3-肾上腺素受体激动剂能够刺激棕色脂肪适应性产热,并能促进白色脂肪米色化。然而到目前为止,有哪些代谢产物参与介导β3-肾上腺素受体激动剂促进脂肪产热作用尚不清楚。本研究通过给予8周龄C57/BL6J雄性小鼠腹腔注射β3-肾上腺素受体激动剂CL316,243,分离提取小鼠脂肪组织进行RNA-Seq检测,结果显示组胺合成限速酶组氨酸脱羧酶(histidine decarboxylase, HDC)在脂肪中被CL316,243强烈诱导,因此推测HDC的代谢产物组胺可能参与了脂肪组织的产热过程。通过给予正常饮食与高脂饮食C57BL/6J小鼠静脉注射组胺,以明确组胺促进脂肪产热的生理作用和机制。结果显示,组胺可刺激正常饮食小鼠棕色脂肪和皮下白色脂肪中产热基因的表达,包括过氧化物酶体增殖物激活受体γ-辅活化因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α, PGC-1α)和解耦联蛋白1 (uncoupling protein 1, UCP1)。HE染色表明,组胺处理降低了脂肪细胞中脂滴的大小。此外,组胺还可以促进高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪产热,改善糖耐量和脂肪肝表型。最后,我们通过脂肪原代前体细胞实验验证了组胺促进产热是细胞的自主特性。本研究结果表明,组胺可能参与介导了β3-肾上腺素受体激动剂促进脂肪的产热。

关键词：组胺产热肥胖 UCP1 PGC-1α

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PNPLA3基因表达以及干扰腺病毒的构建及鉴定

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基础医学与临床 2011年第5期31卷 485-489页

作者：乔爱君方福德常永生中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定。方法根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV的BglⅡ和XhoⅠ位点,干扰序列克隆入pAdTrack-U6穿梭载体,PmeⅠ酶切... 详细信息

目的构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定。方法根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV的BglⅡ和XhoⅠ位点,干扰序列克隆入pAdTrack-U6穿梭载体,PmeⅠ酶切线性化穿梭质粒与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共转化***5183感受态细菌产生重组腺病毒载体,用PacⅠ酶切线性化的回收质粒转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293A细胞绿色荧光蛋白的表达,并初步观察其感染小鼠原代细胞的效率。结果测序、酶切鉴定证实,构建出了PNPLA3基因过表达及干扰腺病毒载体。包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.5×1011VP/mL。以120感染复数感染小鼠肝脏原代细胞,感染效率可达到90%以上,干扰效率超过80%以上。结论成功构建了PNPLA3基因的过表达以及干扰腺病毒载体。

关键词： PNPLA3 过表达干扰腺病毒

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肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定

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基础医学与临床 2013年第7期33卷 840-844页

作者：王冠洲叶飞赵阿妮韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克隆并验证感染性。方法用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体。将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT-PCR验证其感染性。随后利... 详细信息

目的构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克隆并验证感染性。方法用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体。将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT-PCR验证其感染性。随后利用空斑法测定拯救病毒的一步生长曲线。结果成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆;体外转录及转染RD细胞60 h后可观察到明显的CPE现象;RT-PCR在转染RD细胞中检测到病毒的存在;成功利用空斑法测定了拯救病毒的一步生长曲线,最大滴度达到2×107pfu/mL。结论成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆并验证了其感染性,同时测定了拯救病毒的一步生长曲线,与野生型病毒相近。

关键词：肠道病毒71型感染性克隆一步生长曲线

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miR-195过表达促进人神经胶质瘤细胞T98G凋亡

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基础医学与临床 2012年第7期32卷 783-787页

作者：赵志强阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测过表达miR-195对人神经胶质瘤细胞T98G增殖的影响,探讨miRNA-195在胶质瘤发病过程中可能机制。方法用合成的miR-195模拟物,转染miR-195表达水平较低的人神经胶质瘤细胞T98G,用MTT、流式细胞术和TUNEL法分别检测T98G细胞增殖、... 详细信息

目的检测过表达miR-195对人神经胶质瘤细胞T98G增殖的影响,探讨miRNA-195在胶质瘤发病过程中可能机制。方法用合成的miR-195模拟物,转染miR-195表达水平较低的人神经胶质瘤细胞T98G,用MTT、流式细胞术和TUNEL法分别检测T98G细胞增殖、细胞周期和凋亡,用Western blot检测细胞BCL-2的表达。结果 miR-195模拟物转染T98G后,成熟miR-195明显升高(P<0.05)。在T98G中过表达miR-195后,可明显抑制细胞增殖,过表达miR-195能促进T98G细胞的凋亡和下调细胞BCL-2的表达。结论过表达miR-195能显著促进T98G细胞凋亡,提示miR-195可能对胶质瘤的治疗起作用。

关键词： miR-195 T98G细胞细胞增殖凋亡 BCL-2

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二甲基亚砜通过激活caspase-3以及抑制PARP-1引起A549细胞凋亡

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基础医学与临床 2010年第6期30卷 566-569页

作者：刘晓琴郭峰张艳丽刘昊霖中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测肺上皮癌细胞A549经二甲基亚砜(DMSO)诱导发生凋亡后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活性是否受到抑制。方法通过MTT法检测caspase-3的活性升高以及TUNEL等方法验证DMSO可引起A549细胞凋亡后,采用Western blot验证PARP-1是... 详细信息

目的检测肺上皮癌细胞A549经二甲基亚砜(DMSO)诱导发生凋亡后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活性是否受到抑制。方法通过MTT法检测caspase-3的活性升高以及TUNEL等方法验证DMSO可引起A549细胞凋亡后,采用Western blot验证PARP-1是否被切割成两个片段。结果 DMSO可诱导A549细胞发生凋亡,凋亡过程中caspase-3的活性上调,其下游底物PARP-1被大量切割成小片段。结论 DMSO诱导的A549细胞凋亡受到caspase-3-PARP-1信号分子的调节。

关键词：二甲基亚砜 A549细胞凋亡 PARP-1

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