检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 629-631,I0011-I0013页

作者：付俊缪时英中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的寻找一种简单可行的研究精子发生过程中蛋白质定位的方法。方法将新鲜的小鼠睾丸去除白膜,通过胶原酶Ⅰ及DNA酶Ⅰ的作用分离各种细胞。细胞经简单处理后以合适的浓度铺片,进行荧光染色,并于共聚焦荧光显微镜下观察。结果通过分析特... 详细信息

目的寻找一种简单可行的研究精子发生过程中蛋白质定位的方法。方法将新鲜的小鼠睾丸去除白膜,通过胶原酶Ⅰ及DNA酶Ⅰ的作用分离各种细胞。细胞经简单处理后以合适的浓度铺片,进行荧光染色,并于共聚焦荧光显微镜下观察。结果通过分析特异的染料对顶体和细胞核染色的结果,可以分辨出各个阶段的生精细胞。结论建立了一种研究精子发生过程中蛋白质定位的简单、可靠的方法。

关键词：精子发生顶体形成细胞核

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胰岛素样生长因子结合蛋白-3与甲状腺激素受体α1的相互作用及其对甲状腺激素应答性基因转录的调节

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中国医学科学院学报 2011年第2期33卷 156-161,222页

作者：裘佳马晓骊王欣陈虹黄秉仁中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节。方法采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之... 详细信息

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)与甲状腺激素受体α1(TRα1)之间的相互作用,及其对甲状腺激素应答性基因转录作用的调节。方法采用谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验检测IGFBP-3与TRα1之间的相互作用;激光共聚焦显微镜观察两种蛋白在细胞中的分布;采用双萤光素酶实验检测过表达IGFBP-3对甲状腺素T3激活的生长激素启动子的影响。结果谷胱甘肽-S-转移酶拉下实验、免疫共沉淀以及荧光共振能量转移实验结果证明IGFBP-3与TRα1在体内和体外都可以相互作用,激光共聚焦显微镜观察IGFBP-3和TRα1可以共定位于HEK-293细胞的细胞核。通过双萤光素酶实验检测到过表达IGFBP-3可以抑制甲状腺激素对生长激素启动子的激活作用(P<0.01)。结论 IGFBP-3通过与TRα1相互作用抑制甲状腺激素应答性基因的转录,为IG-FBP-3在核内发挥胰岛素样生长因子非依赖的作用提供了新的实验依据。

关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白-3 甲状腺激素受体α1 三碘甲状腺原氨酸生长激素启动子

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蛋白激酶Nemo样激酶基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 632-637,I0014页

作者：程筱雯梁俊波缪时英王琳芳中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建含有蛋白激酶Nemo样激酶(NLK)的重组腺病毒载体。方法采用RT-PCR方法在人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增NLK基因及其突变体K155M、T286V和C425Y,同时在目的基因的C端添加便于蛋白表达检测的FLAG tag,经与载体pAdTrack-CMV连接、... 详细信息

目的构建含有蛋白激酶Nemo样激酶(NLK)的重组腺病毒载体。方法采用RT-PCR方法在人胚肾细胞系HEK293T细胞中扩增NLK基因及其突变体K155M、T286V和C425Y,同时在目的基因的C端添加便于蛋白表达检测的FLAG tag,经与载体pAdTrack-CMV连接、转化、筛选、鉴定后,将Western blot检测表达正确的重组过渡质粒pAdTrack-CMV-NLK及其突变体再经酶切、电转入BJ5183感受态细胞(已包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1)同源重组,并筛选、鉴定、扩增。通过PacI酶切后,以快速简便的乙醇沉淀法替代传统的酚-氯仿-异戊醇法回收酶切产物,用高效低毒高稳定性的FuGENE HD转染试剂替代传统的lipofectamin 2000转染低代数的HEK293A包装细胞,进行病毒包装。包装后的重组腺病毒感染结直肠癌细胞HCT116,Western blot检测以确认NLK及其突变体蛋白的表达。结果经PCR、测序及Western blot检测证实,成功构建了携带NLK基因及其突变体的腺病毒载体,PCR及限制性内切酶酶切鉴定重组过渡质粒pAdTrack-CMV-NLK及其突变体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组成功,重组表达克隆转染HEK293A细胞获得病毒原液,扩增后感染结直肠癌细胞HCT116能正确表达NLK蛋白及其突变体蛋白。结论成功制备NLK基因及其突变体重组腺病毒,可进一步用于NLK生理功能的研究。

关键词：蛋白激酶Nemo样激酶重组腺病毒载体同源重组

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死亡受体5氨基末端的结构与功能

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中国医学科学院学报 2011年第1期33卷 33-38页

作者：张鹏陈采凤刘士廉郑德先刘彦信中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究死亡受体5(DR5)氨基末端的结构与功能。方法利用基因工程技术构建一系列DR5胞外区(DR5-ECD)缺失突变体并获得相应的重组蛋白。利用蛋白免疫印迹及ELISA技术研究重组蛋白与小鼠抗人DR5单克隆抗体AD5-10的结合情况。结果含有完整... 详细信息

目的研究死亡受体5(DR5)氨基末端的结构与功能。方法利用基因工程技术构建一系列DR5胞外区(DR5-ECD)缺失突变体并获得相应的重组蛋白。利用蛋白免疫印迹及ELISA技术研究重组蛋白与小鼠抗人DR5单克隆抗体AD5-10的结合情况。结果含有完整氨基末端结构的DR5-ECD缺失突变体能够与AD5-10结合,而缺失氨基末端的重组蛋白则不能与AD5-10相互作用。结论 DR5氨基末端含有AD5-10激动性抗体的靶点,该靶点可能在发展肿瘤免疫治疗新策略中发挥重要作用。

关键词：死亡受体激动性抗体肿瘤治疗

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蛋白连接组织生长因子表达腺病毒的构建及其基因功能

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 649-653,I0014页

作者：宫宁章华兵方福德常永生中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建及鉴定蛋白连接组织生长因子(CTGF)基因过表达腺病毒,初步探究CTGF在糖脂代谢方面的功能。方法克隆CTGF过表达质粒,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,Pme I酶切线性化穿梭质粒转化改造的***5183(含腺病毒载体pAdEasy-1)感受态细... 详细信息

目的构建及鉴定蛋白连接组织生长因子(CTGF)基因过表达腺病毒,初步探究CTGF在糖脂代谢方面的功能。方法克隆CTGF过表达质粒,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,Pme I酶切线性化穿梭质粒转化改造的***5183(含腺病毒载体pAdEasy-1)感受态细菌产生重组腺病毒载体,用Pac I线性化重组质粒,回收转染293A细胞包装病毒颗粒,经过3轮扩增,感染肝原代细胞,观察感染效率及检测基因表达情况。通过对小鼠不同时间段的饥饿处理,提取肝脏RNA做RT-PCR,实时定量PCR检测CTGF基因在不同营养条件下的变化情况。结果成功包装CTGF的腺病毒,感染效率达90%以上。CTGF在不同营养条件下表达情况不同,并且与糖脂代谢重要基因过氧化物酶体增值激活受体γ共激活因子1α表达情况一致。饥饿24h,CTGF上调(3.38±0.51)倍;饥饿48h,CTGF上调(5.26±1.25)倍(P<0.05)。结论初步认定CTGF可能参与糖脂代谢。

关键词：蛋白连接组织生长因子过表达腺病毒饥饿

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过氧化物酶体增殖物激活受体γPro12Ala:老问题,新问题

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 591-592页

作者：方福德中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

本文就不同人群过氧化物酶体增殖物激活受体γPro12A la多态性与2型糖尿病发病风险和易感性的相关性的Meta分析结果进行了评述,并就中国疾病遗传分析研究工作中所存在的相关问题作了点评,提出了相关的建议。

关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体糖尿病

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AD5-10与表阿霉素联合作用治疗类风湿性关节炎

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中国医学科学院学报 2011年第4期33卷 367-370页

作者：周剑锁史娟朱洁卿袁海芹刘彦信尤欣郑德先中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究抗死亡受体抗体(AD5-10)与表阿霉素联合作用治疗类风湿性关节炎的机制。方法采用MTT法检测成纤维样滑膜细胞(FLS)存活率,用蛋白免疫印迹研究细胞凋亡信号通路蛋白和p53、p21的变化。结果不同剂量的表阿霉素可增强FLS对AD5-10的... 详细信息

目的研究抗死亡受体抗体(AD5-10)与表阿霉素联合作用治疗类风湿性关节炎的机制。方法采用MTT法检测成纤维样滑膜细胞(FLS)存活率,用蛋白免疫印迹研究细胞凋亡信号通路蛋白和p53、p21的变化。结果不同剂量的表阿霉素可增强FLS对AD5-10的敏感性,促进FLS凋亡。表阿霉素处理可使FLS细胞中caspase-3、-8、-9,c-FLIP,Bcl-2,p53和p21表达水平发生变化。结论表阿霉素可能通过改变p53、p21、c-FLIP和Bcl-2协同AD5-10诱导FLS凋亡。

关键词：类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞 AD5-10 表阿霉素

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小鼠大脑皮层层次特异表达基因天然反义转录物的筛选与鉴定

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 620-623页

作者：李萍张靖李爱花王珊谈小超阴彬彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选并鉴定小鼠大脑皮层发育过程中皮层层次特异表达的基因是否存在天然反义转录物(NAT)。方法对63个小鼠大脑皮层层次特异表达的基因进行生物信息学预测,筛选出31个可能存在NAT的基因,从小鼠脑组织及神经系统来源的细胞系提取总RNA... 详细信息

目的筛选并鉴定小鼠大脑皮层发育过程中皮层层次特异表达的基因是否存在天然反义转录物(NAT)。方法对63个小鼠大脑皮层层次特异表达的基因进行生物信息学预测,筛选出31个可能存在NAT的基因,从小鼠脑组织及神经系统来源的细胞系提取总RNA,采用RT-PCR方法对筛选阳性基因进行鉴定并克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果 31个经生物信息学预测的基因中,8个为NAT阳性。结论小鼠大脑皮层发育过程中皮层层次特异表达的基因存在NAT,NAT可能通过调控编码基因影响小鼠皮层发育。

关键词：天然反义转录物小鼠大脑皮层筛选鉴定

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间充质干细胞介导的TRAIL可控性表达及其杀伤人肝癌细胞的活性研究

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中华医学杂志 2011年第8期91卷 544-548页

作者：刘铮马宏史娟张亚玺刘彦信郑德先中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）在间充质干细胞中可控性表达及其对肿瘤细胞的杀伤活性，探索问充质干细胞用于肿瘤治疗的前景。方法构建TRAIL可控性表达的腺病毒载体Ad—Tet—TRE-TRAIL，包装获得重组腺病毒后，感染小... 详细信息

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）在间充质干细胞中可控性表达及其对肿瘤细胞的杀伤活性，探索问充质干细胞用于肿瘤治疗的前景。方法构建TRAIL可控性表达的腺病毒载体Ad—Tet—TRE-TRAIL，包装获得重组腺病毒后，感染小鼠间充质干细胞，免疫印迹法和酶联免疫吸附法测定间充质干细胞TRAIL可控性表达和分泌。四甲基偶氮唑盐（MrTT）法测定TRAIL抑制肝癌细胞生长的能力。膜联蛋白（Annexin）-V／碘化丙啶（PI）染色和流式细胞术测定TRAIL对肝癌细胞的杀伤活性。结果重组腺病毒Ad—Tet-TRE—TRAIL感染的小鼠间充质干细胞能够在强力霉素的控制下表达和分泌TRAIL，并显著抑制SMMC-7402人肝癌细胞生长，其机制是诱导肝癌细胞凋亡，结果显示SMMC-7402细胞在杀伤24、48h后的存活率分别为66．5％±4．8％和42．9％±6．5％，而对照组（未加强力霉素）的细胞存活率分别为97．3％±2．2％和99．4％±4．7％。结论间充质干细胞介导TRAIL可控性表达进而有效诱导肝癌细胞凋亡并抑制肝癌细胞生长，为肿瘤的细胞治疗提供了新的策略。

关键词：干细胞基因表达调控癌肝细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞治疗

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亚硒酸钠对结直肠癌HCT 116和SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 654-658页

作者：罗慧杨洋许彩民中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究亚硒酸钠对结直肠癌HCT116和SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响。方法采用10μmol/L亚硒酸钠处理HCT116和SW480细胞,Western blot及RT-PCR检测亚硒酸钠处理后不同时间HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达情况,并观察蛋白酶体抑制剂MG132预处理后对HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1表达的影响。采用免疫共沉淀方法检测亚硒酸钠对HCT116和SW480细胞中β-catenin与T细胞因子4(TCF4)相互作用的影响。结果亚硒酸钠可降低HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达水平,用蛋白酶体抑制剂MG132预处理可增加亚硒酸钠处理后HCT116和SW480细胞中β-catenin和cyclin D1的表达水平。免疫共沉淀实验结果显示,亚硒酸钠能破坏β-catenin与TCF4间的相互作用。结论亚硒酸钠可降低结直肠癌HCT116和SW480细胞中β-catenin及cyclin D1的表达水平,蛋白酶体介导的降解途径可能在这一过程中发挥了重要作用。亚硒酸钠引起的β-catenin与TCF4相互作用减少可能对β-catenin靶基因的转录也起到了一定的调控作用。

关键词：亚硒酸钠结直肠癌 β-catenin cyclin D1

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