检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2011年第4期31卷 440-444页

作者：李辉龚燕华胡光宇阴彬武警医学院组织胚胎学教研室北京100005 武警医学院生物化学教研室天津300162 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 武警医学院

目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组... 详细信息

目的建立并鉴定人NSPc1慢病毒过表达系统,以便应用过表达技术进一步研究NSPc1功能。方法设计针对人NSPc1cDNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的pLenti6-TO-EGFP-TRIP载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒,转染293T细胞并用Western blot检测质粒过表达效果。用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用Western blot检测慢病毒系统过表达效果。结果证实人NSPc1正确插入慢病毒载体,人NSPc1慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达NSPc1。结论人NSPc1慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人NSPc1功能打下了基础。

关键词：过表达 NSPc1 慢病毒载体多梳家族

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组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9对myogenin基因表达的影响

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医学研究杂志 2011年第1期40卷 32-35页

作者：潘炜松代辉张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用本组构建的小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9真核表达质粒及RNA干扰(siRNA)质粒,在体外成肌细胞分化模型C2C12细胞中检测SET7/9对肌肉分化关键基因myogenin基因表达的影响。方法转染SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9至C2... 详细信息

目的利用本组构建的小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9真核表达质粒及RNA干扰(siRNA)质粒,在体外成肌细胞分化模型C2C12细胞中检测SET7/9对肌肉分化关键基因myogenin基因表达的影响。方法转染SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9至C2C12细胞,Western blot技术验证其表达;利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测SET7/9对myogenin基因mRNA水平的影响;利用双荧光素酶报告系统检测SET7/9对myogenin基因启动子活性的影响;转染SET7/9的siRNA质粒,利用Real-time PCR技术检测其抑制效果以及对myogenin mRNA水平的影响。结果 SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9可在C2C12细胞中有效表达;SET7/9可使myogenin mRNA水平升高并能够促进myogenin启动子活性升高;干扰SET7/9表达可使myogenin mRNA水平降低。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9可激活肌肉分化关键基因myogenin的转录。

关键词： SET7/9 肌肉分化 RNA干扰 myogenin

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人类miRNA上游转录因子及下游靶基因的基因本体分析

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中国微生态学杂志 2011年第8期23卷 712-713,716页

作者：朱文楠习杨吕湘刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究人类miRNA转录因子及靶基因之间的相关关系。方法利用生物信息学方法预测miR-NA的上游转录因子和下游靶基因,并对预测结果做基因本体分析,得到参与各生物学过程及分子功能的比例,用统计学软件PASW做相关性分析。结果人类382个mi... 详细信息

目的研究人类miRNA转录因子及靶基因之间的相关关系。方法利用生物信息学方法预测miR-NA的上游转录因子和下游靶基因,并对预测结果做基因本体分析,得到参与各生物学过程及分子功能的比例,用统计学软件PASW做相关性分析。结果人类382个miRNA参与应激、代谢、发育等10个生物学过程和行使转录调控、翻译调控、催化活性等12个分子功能,miRNA上游转录因子之间、下游靶基因之间以及上下游之间存在着广泛的正负相关关系。结论基因在参与生物学过程及行使分子功能的过程中,通过miRNA实现协同作用或隔离效应。

关键词： miRNA 生物信息学基因本体

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TβRI与Fascin1相互作用研究

TβRI与Fascin1相互作用研究

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第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：张俊文田硕杜延顺陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:研究转化生长因子β1的受体I(Transforming growth factorβreceptor I,TβRI)和肌动蛋白的成束蛋白Fascin1的相互作用,了解TGFβ1和Fascin1在肿瘤的发生过程中的作用,为肿瘤的治疗提供新靶点。方法:1、基因的克隆和载体构建。设... 详细信息

目的:研究转化生长因子β1的受体I(Transforming growth factorβreceptor I,TβRI)和肌动蛋白的成束蛋白Fascin1的相互作用,了解TGFβ1和Fascin1在肿瘤的发生过程中的作用,为肿瘤的治疗提供新靶点。方法:1、基因的克隆和载体构建。设计引物,以人脑cDNA文库为模板,分别扩增TβRI

关键词： Fascin1

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抗酶裂重组人p75NTR169/Fc融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及生物学活性鉴定

抗酶裂重组人p75NTR169/Fc融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及生...

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第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：景丽玲张俊文黄秉仁陈虹王欣中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的:重组人p75/Fc融合蛋白是一种具有潜在的抗凋亡和止痛功能的一类新药,其理化性质和生物学功能的基础研究为其临床应用奠定基础。方法:1.参考Gene Bank中已知的p75,即神经生长因子低亲和力受体全序列和免疫球蛋IgG1重链的恒定区Fc的... 详细信息

目的:重组人p75/Fc融合蛋白是一种具有潜在的抗凋亡和止痛功能的一类新药,其理化性质和生物学功能的基础研究为其临床应用奠定基础。方法:1.参考Gene Bank中已知的p75,即神经生长因子低亲和力受体全序列和免疫球蛋IgG1重链的恒定区Fc的DNA片段（216-443）顺序,分别设

关键词：生物学活性 NTR169 p75 大肠杆菌

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SIRT1在小鼠股动脉新生内膜形成中作用机制的研究

SIRT1在小鼠股动脉新生内膜形成中作用机制的研究

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第十三次全国心血管病学术会议

作者：王放阎云飞陈厚早李莉张慧娜高鹏刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所分子生物学国家重点实验室

目的研究SIRT1在新生内膜形成中的调节作用及其机制。方法平滑肌特异性转基因小鼠的构建是基于C57BL/6背景。在SM22α启动子调控下,将人的SIRT1 cDNA进行显微注射。钝性分离小鼠右侧股动脉,结扎近心端,于远心端将导丝置入血管腔内,来回... 详细信息

目的研究SIRT1在新生内膜形成中的调节作用及其机制。方法平滑肌特异性转基因小鼠的构建是基于C57BL/6背景。在SM22α启动子调控下,将人的SIRT1 cDNA进行显微注射。钝性分离小鼠右侧股动脉,结扎近心端,于远心端将导丝置入血管腔内,来回螺旋拉伤3次,撤出导丝,缝合皮肤。结果对小鼠股动脉施行导丝拉伤28 d后,发现SIRT1表

关键词：新生内膜形成 SIRT1 股动脉

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mTOR信号通路在颞叶癫痫小鼠模型中的时空激活研究

mTOR信号通路在颞叶癫痫小鼠模型中的时空激活研究

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第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：幸小亮沙龙泽张丹何婷婷吴立文许琪沈岩中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医院

目的:mTOR信号通路是调节神经元生理状态的一条关键信号转导通路,mTOR通路的过度激活与多种神经系统疾病相关,最近的研究表明,mTOR通路可能参与内侧颞叶癫痫的异常放电。本研究旨在详细阐述mTOR通路在颞叶癫痫小鼠模型的病变海马中激活... 详细信息

目的:mTOR信号通路是调节神经元生理状态的一条关键信号转导通路,mTOR通路的过度激活与多种神经系统疾病相关,最近的研究表明,mTOR通路可能参与内侧颞叶癫痫的异常放电。本研究旨在详细阐述mTOR通路在颞叶癫痫小鼠模型的病变海马中激活的时空分布情况,这将有助于探究mTOR通路的过度激活与癫痫发生以及海马硬化的关系。方法:1.通过脑立体定位注射的方式,

关键词：颞叶癫痫小鼠模型海人酸信号通路神经元死亡

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表皮松解性掌跖角化症相关KRT9基因致病新突变鉴定

表皮松解性掌跖角化症相关KRT9基因致病新突变鉴定

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中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：赵秀丽肖继芳刘雅萍张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室

掌跖角化症(Palmoplantar keratoderma,PPK;MIM 144200)是一组以掌跖表皮过度角化为特征的遗传性皮肤病,主要临床表现为手掌和足底皮肤角化加厚。根据病灶范围和形态的不同,非综合征型PPK又可分为弥散性掌跖角化症,点状掌跖角化症和灶... 详细信息

掌跖角化症(Palmoplantar keratoderma,PPK;MIM 144200)是一组以掌跖表皮过度角化为特征的遗传性皮肤病,主要临床表现为手掌和足底皮肤角化加厚。根据病灶范围和形态的不同,非综合征型PPK又可分为弥散性掌跖角化症,点状掌跖角化症和灶性掌跖角化症三类。其中弥散性掌跖角化症最为常见,又可分为弥散性表皮松懈性掌跖角化(Epidermolytic palmoplantar keratoderma,EPPK)和弥散性非表皮松解性掌跖角化。EPPK患者的主要临床特征为:掌跖表皮弥漫性过度角化,病变部位周边有明显的红斑缘,患者出生后数周到数月出现掌跖角化过度。我们发现一个中国人EPPK大家系。该家系23人共有患者15人,患者具有严重的EPPK临床表现。所有患者均在出生一个月出现症状,手足角质层可达1cm,龟裂、感染。本研究采集该家系23名成员的外周血(5-8ml/人份),常规酚-氯仿法提取基因组DNA;对先证者KRT9基因编码区及外显子/内含子交界区进行PCR扩增和测序;并进一步通过设计错配引物引入Bal I限制性酶切位点,对家系所有成员及群体中50名正常人进行相关突变区的鉴定;通过生物信息学对KRT9突变区序列的保守性分析,进一步确认突变的致病性。先证者KRT9基因测序结果显示在该基因外显子1中发生点突变c.491T>C,该突变导致KRT9编码蛋白第164位氨基酸由亮氨酸变为脯氨酸(p.L164P);Bal I限制性酶切分析表明,所有患者都携带同一突变,而家系正常人和群体样本未携带该突变。突变区的序列分析表明164L为高度保守的氨基酸,进一步确定该突变致病性。总之,我们在一个中国人EPPK大家系中发现了一个新的KRT9致病突变,丰富了人EPPK致病基因突变谱,并且为该家系患者的产前基因诊断奠定了基础。

关键词：表皮松解性掌跖角化症 KRT9基因测序限制性酶切基因突变

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2C型肢带型肌营养不良相关SGCG基因致病新突变鉴定

2C型肢带型肌营养不良相关SGCG基因致病新突变鉴定

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中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会

作者：肖继芳赵秀丽刘雅萍张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室

肢带型肌营养不良症(limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)为一类常染色体遗传性肌营养不良。其遗传模式和临床表现具有高度异质性。遗传模式有常染色体显性和隐性之分,显性遗传的LGMD用LGMD1表示,隐性遗传的LGMD则用LGMD2表示。根据... 详细信息

肢带型肌营养不良症(limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)为一类常染色体遗传性肌营养不良。其遗传模式和临床表现具有高度异质性。遗传模式有常染色体显性和隐性之分,显性遗传的LGMD用LGMD1表示,隐性遗传的LGMD则用LGMD2表示。根据临床表现LGMD1和LGMD2又可分为若干亚型,其中LGMD2C(limb-girdle muscular dystrophytype 2C;MIM 253700)为重型的LGMD,其致病基因为gamma-sarcoglycan gene(SGCG)。SGCG定位于13q12,含有7个外显子,编码γ肌聚糖(γ-sarcoglycan,γ-SG),为肌聚糖复合物的亚单位之一,是构成抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物的重要成分。本研究室收集LGMD-2C型患儿1例,采集患儿及其父母和外婆的外周血(5mL/人份),常规蛋白酶K-SDS-酚/氯仿法提取基因组DNA。针对SGCG基因的7个外显子、5′UTR、3′UTR及外显子-内含子交界处设计引物。通过PCR扩增患儿SGCG基因并测序;将SGCG基因测序结果中的SNP作为遗传标记(rs4769246和rs17078517),对家系成员进行单倍型分析,确定致病突变的来源;并通过群体样本对相关突变进行验证。SGCG基因测序结果表明,患儿为SGCG基因外显子3内点突变c.320C>T的纯合子。该突变导致SGCG编码蛋白第107为氨基酸由丝氨酸变为亮氨酸(p.S107L)。对HGMD数据库检索,确认该突变为新突变。对患者父母及外婆相应位点进行测序,发现患儿父亲为该突变的杂合子,在患儿母亲,外婆及群体样本均未发现该突变。SNP单倍型分析显示患儿致病基因来源于其父,并为该突变的单亲二体。总之,我们在SGCG基因中发现了一个LGMD-2C的致病新突变,丰富了LGMD-2C致病突变谱;并通过SNP单倍型分析明确患儿致病突变来源,为该家系的遗传咨询和产前基因诊断奠定了基础。

关键词：肢带型肌营养不良症 LGMD-2C,SGCG,基因突变,SNP,单亲二体

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N糖基化位点突变的IFN-λ1的多拷贝表达载体的构建、表达及活性的初步研究

N糖基化位点突变的IFN-λ1的多拷贝表达载体的构建、表达及活性的...

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第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：惠希武马雯陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室清华大学医学部北京协和医学院基础学院

目的:构建N糖基化位点突变的IFN-λ1的多拷贝表达载体,进行该突变体IFN-λ1的表达、纯化并对其生物活性作初步研究。方法:1.利用重叠延伸PCR定点突变技术构建多拷贝IFN-λ1-N43Q(IFN-λ143位天冬酰胺密码

关键词：多拷贝表达载体重组蛋白糖基化位点干扰素 IFN 初步研究

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