检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2022年第2期42卷 282-285页

作者：杨佳卉赵微解相宏李春美刘晓军姚红山西医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室山西太原030001 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国点重点实验室北京100005

目的探究沉默信息调节因子1(Sirt1)基因的缺失对小鼠肝脏炎性反应的影响及其作用机制。方法每周记录在高脂喂养下的野生型C57BL/6J雄性小鼠和肝脏特异性Sirt1敲除(Sirt1-LKO)雄性小鼠的体质量,用Western blot和q-PCR检测炎性因子的表达... 详细信息

目的探究沉默信息调节因子1(Sirt1)基因的缺失对小鼠肝脏炎性反应的影响及其作用机制。方法每周记录在高脂喂养下的野生型C57BL/6J雄性小鼠和肝脏特异性Sirt1敲除(Sirt1-LKO)雄性小鼠的体质量,用Western blot和q-PCR检测炎性因子的表达;给小鼠腹腔注射20 mg/kg LPS,用生存曲线来反映小鼠对炎性反应的敏感性。结果与对照组WT小鼠相比,Sirt1-LKO小鼠表现为体质量明显减轻(P<0.05)。另外,生存曲线KaplaneMeier图显示Sirt1-LKO小鼠对LPS刺激呈现低敏感性(P<0.05)。Sirt1-LKO小鼠原代肝细胞中NF-κB蛋白水平增高(P<0.05),及NF-κB下游靶基因炎性因子Tnfα和IL6明显上调(P<0.05)。结论肝细胞特异性Sirt1缺失加重肝脏炎性反应。

关键词： Sirt1 肝细胞炎性反应 NF-κB

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双三体胚胎干细胞的增殖与分化特征分析

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中国细胞生物学学报 2021年第5期43卷 922-931页

作者：张美丽肖蓉贾玉艳黄粤中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

该文旨在研究双三体胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)在细胞增殖、分化以及畸胎瘤形成等方面的特征,揭示非整倍体与肿瘤发生之间的关系。首先建立了两株常染色体双三体的小鼠ESC株系,通过微阵列比较基因组杂交(array comparative ... 详细信息

该文旨在研究双三体胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)在细胞增殖、分化以及畸胎瘤形成等方面的特征,揭示非整倍体与肿瘤发生之间的关系。首先建立了两株常染色体双三体的小鼠ESC株系,通过微阵列比较基因组杂交(array comparative genomic hybridization,array CGH)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验对双三体ESC株系进行了染色体拷贝数分析和核型鉴定;通过绘制细胞生长曲线检测了双三体ESCs的增殖能力;通过流式细胞术检测了双三体ESCs的细胞周期和细胞凋亡情况;采用细胞克隆形成实验分析了双三体ESCs的克隆形成效率;通过实时荧光定量PCR和免疫荧光染色实验检测了双三体ESCs中多能干细胞标志物的表达;通过撤掉培养体系中的白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)诱导分化和进行拟胚体(embryoid body,EB)形成实验检测了双三体ESCs的分化能力;通过重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠皮下接种细胞实验分析了双三体ESCs的畸胎瘤形成能力和体内分化能力。结果显示,这两株双三体细胞分别是3号与6号染色体双三体并伴有Y染色体丢失的ESCs(DTs-3+6),以及6号与8号染色体双三体的ESCs(DTs-6+8)。双三体ESCs表现出相对于野生型细胞较强的生长增殖能力和OCT4、SOX2、NANOG等多能干细胞标志物的高表达。当培养液中不添加LIF时,野生型细胞基本完全走向分化,而双三体细胞形成许多未分化或部分分化的克隆,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色阳性。在EB分化早期,双三体细胞中Fgf5、T、Foxa2等三胚层标志物的表达水平较野生型细胞明显降低,分化滞后。当被接种到SCID小鼠皮下后,双三体ESCs形成畸胎瘤的能力较野生型细胞增强,畸胎瘤中包含大量未分化区域。因此,双三体ESCs的生长增殖能力增强,它通过限制细胞分化能力而促进畸胎瘤形成。双三体ESCs是研究非整倍体在肿瘤发生发展过程中作用的重要模型。

关键词：非整倍体双三体胚胎干细胞增殖分化畸胎瘤

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人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 630-635页

作者：柳满任悦高玉风王芳余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控。方法通过Polysome profiling结合Western blot实验检测并验证HEK293细胞中mRNA的翻译活性;通过针对RPL10A和RPS17两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀、建库测序(RIP-seq)及生物信息学分析,获得参... 详细信息

目的探讨人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控。方法通过Polysome profiling结合Western blot实验检测并验证HEK293细胞中mRNA的翻译活性;通过针对RPL10A和RPS17两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀、建库测序(RIP-seq)及生物信息学分析,获得参与HEK293细胞蛋白质合成调控的相关分子。结果在两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀实验富集的分子中共有129种基因,其中93.8%为蛋白质编码基因;且功能与RNA剪接、分解代谢、MAPK信号通路、染色体定位、RNA转运等相关。结论通过针对核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀可以获得HEK293细胞中活跃翻译的mRNA。

关键词：人胚胎肾细胞系293 Polysome profiling RNA结合蛋白免疫共沉淀

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RNA靶向的CRISPR/CasRx系统在小鼠精原细胞系GC1-spg中的应用

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 653-660页

作者：李梦真柳俊邹定峰缪时英王琳芳宋伟李凯中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探究CRISPR/CasRx介导的RNA水平的基因敲降在小鼠精原细胞系GC1-spg的应用。方法利用同源重组的方法构建EF1a core ***表达质粒(CasRx-gRNA)和***、***、*** 3种荧光蛋白表达质粒。在人胚肾细胞系HEK-293T内瞬时转染3种荧光蛋白表... 详细信息

目的探究CRISPR/CasRx介导的RNA水平的基因敲降在小鼠精原细胞系GC1-spg的应用。方法利用同源重组的方法构建EF1a core ***表达质粒(CasRx-gRNA)和***、***、*** 3种荧光蛋白表达质粒。在人胚肾细胞系HEK-293T内瞬时转染3种荧光蛋白表达质粒和CasRx-gRNA表达质粒,通过荧光强度、Western blot检测外源基因(荧光蛋白、EGFP和mCherry)的敲降情况。在HEK-293T细胞内转染CasRx-gRNA,通过q-PCR检测内源基因mRNA和lncRNA干扰后的表达水平。在小鼠精原细胞系GC1内瞬时转染外源基因egfp、mCherry和CasRx-gRNA表达质粒并通过以上方法检测外源基因(荧光蛋白)沉默效率。结果成功构建了CasRx-gRNA和3种荧光蛋白表达质粒。在HEK-293T细胞内CRISPR/CasRx介导的RNA干扰外源基因(egfp、mCherry)和内源基因(mRNA、lncRNA)后,表达水平均显著下调(P<0.01)。在小鼠精原细胞系GC1内验证CRISPR/CasRx系统,可有效和特异敲降外源基因egfp、mCherry。结论CRISPR/CasRx系统能够在GC1-spg细胞中发挥有效和特异的敲降作用,为雄性生殖发育的研究提供新的基因沉默工具。

关键词： CRISPR/CasRx RNA 敲降 GC1-spg

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维持人胚胎干细胞多能性顺式作用元件的筛选

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 636-640页

作者：孙梦瑶刘思琪周凡琦马艳妮余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在人胚胎干细胞(hESCs)中建立一种可行的CRISPR文库筛选方法,筛选参与维持hESCs多能性的顺式作用元件。方法将诱导型Cas9蛋白表达元件插入hESC基因组中,构建诱导型Cas9稳定表达株(iCas9-hESC)。通过分析已发表的hESCs中的染色质互... 详细信息

目的在人胚胎干细胞(hESCs)中建立一种可行的CRISPR文库筛选方法,筛选参与维持hESCs多能性的顺式作用元件。方法将诱导型Cas9蛋白表达元件插入hESC基因组中,构建诱导型Cas9稳定表达株(iCas9-hESC)。通过分析已发表的hESCs中的染色质互作信息,确定可能参与多能性基因调控的顺式作用元件,并以此来构建双gRNA CRISPR敲除文库。使用CIRSPR文库在低感染复数情况下感染iCas9-hESC,诱导Cas9蛋白表达,对细胞进行基因编辑。以OCT4的表达水平作为衡量多能性的标准,对基因编辑后的细胞进行OCT4的流式抗体染色与分析,确定顺式元件敲除后是否影响到hESC的多能性。结果成功构建iCas9-hESC,且该细胞仍保持多能性状态。构建顺式元件的CRISPR敲除文库,成功感染目的细胞。对文库感染后的细胞进行OCT4表达水平的流式分析,发现基因编辑后的细胞确实存在多能性下降的部分群体。结论建立了在hESC中通过CRISPR文库筛选参与维持多能性顺式作用元件的可行性方案。

关键词：人胚胎干细胞多能性顺式元件 CRISPR文库

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利用CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的B16细胞株

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基础医学与临床 2021年第3期41卷 318-324页

作者：刘孟雨周雅博黄波吕家迪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的用新型CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的小鼠黑色素瘤B16细胞株,分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,并进行功能探讨。方法用微同源介导的末端连接(MMEJ)方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列插入到CSDE1基因最后... 详细信息

目的用新型CRISPR/PITCH系统构建表达CSDE1-EGFP的小鼠黑色素瘤B16细胞株,分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,并进行功能探讨。方法用微同源介导的末端连接(MMEJ)方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列插入到CSDE1基因最后一个外显子上;用流式细胞测量术、PCR、免疫荧光及活细胞成像来检测CSDE1-EGFP是否插入成功,检验EGFP的荧光强弱与CSDE1的表达高低是否一致;用Transwell小室法、小鼠荷瘤模型实验观察低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株之间的功能差异。结果分选出低表达CSDE1与高表达CSDE1的B16细胞株,检测出EGFP表达强弱与CSDE1表达高低一致。观察到CSDE1蛋白表达量不同的B16细胞株在功能上有所差异。结论为研究CSDE1在其他肿瘤细胞内的动态定位以及因表达量不同而产生的功能差异,新型CRISPR/PITCH系统提供了快速有效的直观方法。

关键词： CRISPR/PITCH系统 CSDE1 微同源末端连接(MMEJ) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)

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四倍体滋养层干细胞的分离培养与鉴定

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基础医学与临床 2021年第7期41卷 975-981页

作者：王海豫肖翼黄粤中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立可在体外培养的小鼠四倍体滋养层干细胞(TTSCs)系,为研究胎盘发育提供新的细胞模型。方法用电融合的方法获得四倍体胚胎并进行体外培养,挑取克隆并传代后获得细胞系。通过中期染色体计数检测染色体数目;RT-qPCR、Western blot... 详细信息

目的建立可在体外培养的小鼠四倍体滋养层干细胞(TTSCs)系,为研究胎盘发育提供新的细胞模型。方法用电融合的方法获得四倍体胚胎并进行体外培养,挑取克隆并传代后获得细胞系。通过中期染色体计数检测染色体数目;RT-qPCR、Western blot、免疫荧光检测标志基因表达;显微注射检测细胞的体内发育潜能。结果建立了可以传代培养并且可在体内发育的TTSCs。分化条件下,TTSCs分化基因的表达量与二倍体滋养层干细胞(TSCs)存在差异(P<0.001)。结论可传代的TTSCs系可以在体外建立,但其维持自我更新及分化的机制与二倍体TSCs有所不同。

关键词：四倍体滋养层干细胞胚胎发育胎盘发育分化

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骨形态形成蛋白信号在内皮生理及肺动脉高压中的调控机制

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协和医学杂志 2020年第6期11卷 720-726页

作者：赵欣韦清霞杨隽中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 浙江大学医学院基础医学院杭州310058

骨形态形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)家族成员除在胚胎发育早期的中胚层形成过程中发挥作用外,其在血管功能紊乱过程中亦发挥重要作用,如参与调控内皮细胞成管、迁移和氧化应激效应等。BMP信号通路的异常与多种心肺血管疾... 详细信息

骨形态形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)家族成员除在胚胎发育早期的中胚层形成过程中发挥作用外,其在血管功能紊乱过程中亦发挥重要作用,如参与调控内皮细胞成管、迁移和氧化应激效应等。BMP信号通路的异常与多种心肺血管疾病的发生、发展相关,如肺动脉高压、遗传性出血性毛细血管扩张症和动脉粥样硬化。本文主要阐述BMP信号通路在不同内皮细胞中的功能,以及BMP9和BMP10在肺动脉高压相关病理过程中的调控机制。

关键词：内皮细胞骨形态形成蛋白信号肺动脉高压

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环境激素对纹沼螺RXR基因表达的影响

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中国科学：生命科学 2021年第9期51卷 1328-1338页

作者：刘人杰崔铁峰史文卓何建武安立会王宏伟王菲菲河北大学生命科学学院保定071002 河北大学生命科学与绿色发展研究院保定071002 中国环境科学研究院环境基准与风险评估国家重点实验室北京100012 中国医学科学院基础医学研究所&北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

维甲酸X受体(RXR)基因在调控软体动物内分泌行为过程中起着关键作用.为揭示环境激素对软体动物RXR基因表达的调控作用,在前期构建纹沼螺转录组基础上,利用RACE技术扩增获得纹沼螺RXR基因cDNA全序列,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对环... 详细信息

维甲酸X受体(RXR)基因在调控软体动物内分泌行为过程中起着关键作用.为揭示环境激素对软体动物RXR基因表达的调控作用,在前期构建纹沼螺转录组基础上,利用RACE技术扩增获得纹沼螺RXR基因cDNA全序列,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对环境激素暴露后纹沼螺RXR基因表达水平进行定量分析.研究结果显示,纹沼螺RXR基因与其他软体动物RXR具有较高的同源性,雌激素处理后RXR基因的表达先被抑制后被促进,雄激素处理后RXR基因的表达先被诱导后被抑制,并且不同暴露浓度组RXR基因表达差异不显著.研究结果表明,环境激素可能对纹沼螺有一定的毒理效应,为从分子水平上深入探究环境激素对软体动物危害机制提供了数据支持及理论基础.

关键词：纹沼螺维甲酸X受体(RXR) 雌二醇(E2) 甲基睾酮(MT)

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PARP14在3种抑郁症模型小鼠海马区的表达升高及其与神经炎性反应的关系

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基础医学与临床 2021年第5期41卷 641-647页

作者：李辰修建波许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探究ADP核糖聚合酶14(PARP14)与抑郁症是否相关及其是否影响小胶质细胞的炎性反应。方法构建抑郁症小鼠模型,通过实时定量PCR和Western blot对比了慢性束缚(CRS)模型、慢性不可预知压力(CUMS)模型和脂多糖(LPS)模型,3种抑郁症模型... 详细信息

目的探究ADP核糖聚合酶14(PARP14)与抑郁症是否相关及其是否影响小胶质细胞的炎性反应。方法构建抑郁症小鼠模型,通过实时定量PCR和Western blot对比了慢性束缚(CRS)模型、慢性不可预知压力(CUMS)模型和脂多糖(LPS)模型,3种抑郁症模型小鼠抑郁症相关脑区中相比于对照组PARP14的蛋白及mRNA表达水平变化。而后在永生化小胶质细胞系BV2中检测其敲低及过表达Parp14后对炎性反应的影响。结果在3种抑郁症模型小鼠海马区均观察到了PARP 4表达水平相较于对照组的升高(P<0.05),且在CRS模型组中观察到PARP14表达水平与组织中炎性反应因子的表达水平相关(P<0.05)。LPS刺激小鼠永生化小胶质细胞系BV2后PARP14表达水平也随之升高(P<0.05);同时过表达PARP14后的BV2细胞响应LPS刺激表达更多促炎性细胞因子(P<0.01),而敲低Parp14或使用PARP14抑制剂处理后表现与其相反(P<0.05)。结论抑郁模型小鼠海马区PARP14表达水平升高,这可能加剧小胶质细胞响应LPS的炎性反应,从而促使神经炎性反应水平升高。

关键词：重度抑郁症 ADP核糖聚合酶14(PARP14) 神经炎性反应小胶质细胞

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