检索结果-内蒙古大学图书馆

临床与实验病理学杂志 2017年第3期33卷 297-302页

作者：由磊赵烨阚秀李一林王东民张爱群王红霞刘颖王丹丹林平郑直北京协和医院基本外科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系及中心实验室北京100005 北京大学人民医院病理科北京100044 北京博雅医学健康研究所北京100005 北京大学肿瘤医院消化内科北京100044 北京大学第一医院乳腺癌中心北京100044 中国人民解放军总医院(301医院)肝胆中心北京100853 上海第一人民医院肿瘤中心上海200080 赛特生物医药科技有限公司江苏泰州225300 Cylelligen San DiegoCaliforniaUSA

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)及播散肿瘤细胞(disseminated tumor cell,DTC)的可靠检测主要取决于有效的细胞分离与鉴别,目前最为新颖的"差相富集-多重瘤标免疫荧光染色-染色体荧光原位杂交(SE-i FISH)"技术平台... 详细信息

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)及播散肿瘤细胞(disseminated tumor cell,DTC)的可靠检测主要取决于有效的细胞分离与鉴别,目前最为新颖的"差相富集-多重瘤标免疫荧光染色-染色体荧光原位杂交(SE-i FISH)"技术平台,首次将CTC/DTC的富集方法与后续的原位、同步检测肿瘤细胞染色体异倍体的核型分析及多种肿瘤标志物的表型分析等进行有效整合,并成功应用于肿瘤细胞的基础分析与临床检测。大量临床实验证明,独特的SE-i FISH可以为分析CTC/DTC在肿瘤早期诊断、疗效快速评估、肿瘤耐药与复发的实时监测等提供可靠的技术保障。该文阐述SEi FISH在不同瘤种患者及人源肿瘤动物模型体内的有效检测方法,并锁定具有不同临床意义的不同表型与核型的CTC/DTC亚类细胞,为后续的肿瘤单细胞分析与实验提供指导。

关键词：肿瘤转移染色体异倍体肿瘤标志物 CTC亚类文献综述

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nPTB基因座上T-uc.33在小鼠神经系统发育中的功能

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基础医学与临床 2016年第7期36卷 962-968页

作者：朱丽媛赵阿妮张靖侯琳阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的 n PTB基因座上T-uc.33这一超保守长非编码RNA的鉴定及其在小鼠神经系统发育过程中的功能。方法利用生物信息学方法和实验对现存的481个超保守区域(UCRs)进行数据挖掘和检测,筛选到n PTB基因座上存在的UCR,即T-uc.33,并用RACE扩增T-... 详细信息

目的 n PTB基因座上T-uc.33这一超保守长非编码RNA的鉴定及其在小鼠神经系统发育过程中的功能。方法利用生物信息学方法和实验对现存的481个超保守区域(UCRs)进行数据挖掘和检测,筛选到n PTB基因座上存在的UCR,即T-uc.33,并用RACE扩增T-uc.33的RNA转录本全长;用实时荧光定量PCR检测T-uc.33和n PTB在小鼠脑组织发育及神经干细胞分化不同时间点的表达谱;用siRNAs转染细胞法检测T-uc.33对n PTB所起的调控作用。结果筛选并鉴定了n PTB基因座上的T-uc.33为真实转录的超保守长非编码RNA,全长为807 nt;T-uc.33和n PTB在小鼠脑组织中的表达呈显著正相关(P<0.01),并随着脑组织发育从胚胎到成年期呈现先升高后降低的趋势,在体外神经干细胞分化过程也存在差异表达;敲低T-uc.33可显著降低n PTB的表达(P<0.01)。结论 T-uc.33为n PTB基因座上的超保守长非编码RNA,对n PTB起到正向调控作用,潜在地影响小鼠脑组织发育和神经干细胞的分化过程。

关键词：超保守区域(UCR) nPTB 神经发育长非编码RNA(lncRNA)

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利用CRISPR／Cas9技术敲除HeLa细胞中YAF2基因

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医学研究杂志 2016年第11期45卷 22-27页

作者：丛晓杰马晓骊陈虹黄秉仁陈等中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的利用CRISPR/Cas9技术建立YAF2(YY1 associated factor 2)基因敲除的宫颈癌He La细胞株,用于YAF2基因在宫颈癌细胞中分子功能的研究。方法首先利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计两对靶向YAF2基因第2外显子不同位点的向导RNA(single-g... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9技术建立YAF2(YY1 associated factor 2)基因敲除的宫颈癌He La细胞株,用于YAF2基因在宫颈癌细胞中分子功能的研究。方法首先利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计两对靶向YAF2基因第2外显子不同位点的向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,分别克隆至质粒p X335中,测序确认插入片段正确的克隆。先用一对重组载体转染He La细胞,7天后,再用另一对转染He La细胞,第2对转染3天后,取培养细胞的2/3提取基因组DNA,对敲除位点附近的片段进行PCR扩增后通过DNA测序对敲除效率进行分析,剩余细胞在96孔平板上通过有限稀释法筛选YAF2敲除的细胞株。用蛋白质免疫印迹实验初步鉴定YAF2蛋白质表达缺失的细胞克隆,提取其基因组DNA,对敲除位点附近的序列进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p GEM-T easy载体,通过DNA测序确认YAF2基因纯合敲除的细胞株。结果成功构建两对针对人YAF2基因第二外显子的p X335-sgRNA质粒;PCR产物测序证明两对重组载体均有YAF2基因敲除活性;得到2株YAF2敲除的He La细胞株。结论利用CRISPR/Cas9技术在He La细胞中成功敲除YAF2基因,为在He La细胞中研究YAF2的分子功能奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 YAF2 HeLa

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天然反义转录物及其在神经胶质瘤中的功能

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中国生化药物杂志 2016年第5期36卷 1-4,221页

作者：朱丽媛彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系/医学分子生物学国家重点实验室北京100005

天然反义转录物(natural antisense transcripts,NATs)被定义为在自然状态下生物体内产生的内源性RNA,其通常是通过与靶分子进行序列互补而形成天然的正义-反义转录物配对的双链RNA。NATs普遍存在于原核和真核生物中,可以在转录水平、... 详细信息

天然反义转录物(natural antisense transcripts,NATs)被定义为在自然状态下生物体内产生的内源性RNA,其通常是通过与靶分子进行序列互补而形成天然的正义-反义转录物配对的双链RNA。NATs普遍存在于原核和真核生物中,可以在转录水平、转录后水平、翻译水平等多个层次经由不同机制调节基因的表达。此外,NATs也与恶性肿瘤的发生发展密切相关,一些NATs在正常组织与神经胶质瘤组织中的表达存在显著差异。NATs可能成为神经胶质瘤诊断、预后以及治疗效果的一种新的标志物,同时NATs也是潜在的新的胶质瘤基因治疗的靶点。本文对NATs的分类及其在神经胶质瘤中的功能及可能的机制做具体阐述。

关键词：天然反义转录物(NATs) 神经胶质瘤癌症

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C57BL/6J小鼠慢性束缚应激抑郁症模型的建立

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中国医学科学院学报 2015年第1期37卷 8-11页

作者：孙楠楠沙龙泽许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过慢性束缚应激（CRS）建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。方法 C57BL/6J小鼠经体重、糖水偏好、旷场实验初筛后从中选择20只小鼠并随机分为正常对照（NC）组和CRS组2组,每组10只。对CRS组小鼠进行连续21 d,每天4 h的束缚刺激,并最终... 详细信息

目的通过慢性束缚应激（CRS）建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。方法 C57BL/6J小鼠经体重、糖水偏好、旷场实验初筛后从中选择20只小鼠并随机分为正常对照（NC）组和CRS组2组,每组10只。对CRS组小鼠进行连续21 d,每天4 h的束缚刺激,并最终进行糖水偏好检测和强迫游泳检测。结果 CRS组小鼠在水中不动的时间为（131.70±21.65）s,明显长于NC组的（68.88±8.43）s（P=0.0304）。CRS组小鼠0～24 h和0～48 h的糖水偏好百分比分别为（66.21±3.24）%和（73.25±1.50）%,均明显低于NC组的（79.46±3.85）%（P=0.0196）和（80.20±2.26）%（P=0.0248）。结论通过慢性束缚应激成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。

关键词：抑郁症慢性束缚应激 C57BL/6J小鼠行为学检测

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牛磺熊去氧胆酸减轻TGF-β1诱导的MRC-5纤维化表型

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基础医学与临床 2015年第6期35卷 767-771页

作者：朱锦东杜涧超李宁蒋澄宇中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对肺纤维化防治作用。方法建立转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)肺纤维化细胞模型。用MTS法测定TUDCA的安全实验剂量后,用实时定量-PCR和Western blot检测α-平滑肌动蛋白(α-SMA... 详细信息

目的研究牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对肺纤维化防治作用。方法建立转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)肺纤维化细胞模型。用MTS法测定TUDCA的安全实验剂量后,用实时定量-PCR和Western blot检测α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白的mRNA和蛋白表达。结果 1)TUDCA对MRC-5细胞无明显细胞毒作用。2)TUDCA显著缓解TGF-β1诱导的α-SMA和纤连蛋白的表达。结论 TUDCA可以缓解TGF-β1诱导的肺纤维化表型。

关键词：牛磺熊去氧胆酸肺纤维化转化生长因子β1

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利用CRISPR-Cas9系统建立Prmt1敲除的小鼠胚胎干细胞系

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医学研究杂志 2015年第12期44卷 18-22,29页

作者：蔡昀杨光辉张业中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系 100005

目的利用CRISPR-Cas9系统构建Prmt1敲除的E14小鼠胚胎干细胞系,并分析验证其敲除效果。方法利用第3代基因编辑技术CRISPR-Cas9系统,针对Prmt1第4、5、6、7外显子设计4条gRNAs,gRNA两两组合转染E14细胞,特异性的敲除E14细胞中的Prmt1,并... 详细信息

目的利用CRISPR-Cas9系统构建Prmt1敲除的E14小鼠胚胎干细胞系,并分析验证其敲除效果。方法利用第3代基因编辑技术CRISPR-Cas9系统,针对Prmt1第4、5、6、7外显子设计4条gRNAs,gRNA两两组合转染E14细胞,特异性的敲除E14细胞中的Prmt1,并在蛋白质水平,mRNA水平和基因组水平分别验证敲除效果。结果与对照组相比,两组敲除实验组都检测不到Prmt1蛋白质和mRNA的表达,基因组测序结果分析显示,两实验组中Prmt1的mRNA均出现无义突变,使其mRNA的翻译异常终止。同时,实时定量PCR结果显示,精氨酸甲基转移酶家族其他成员Prmt2,Carm1和Prmt6 mRNA表达不受影响。结论成功获得特异性敲除Prmt1的E14细胞系,为研究Prmt1在胚胎干细胞中的作用提供了重要工具。

关键词： CRISPR-Cas9 Prmt1 小鼠胚胎干细胞

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中国人脑组织库建设

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国际学术动态 2015年第2期 24-25页

作者：胡霞马超包爱民严小新中南大学基础医学院人体解剖学与神经生物学系长沙410013 中国医学科学院基础医学研究所及北京协和医学院基础医学院解剖与组织胚胎学系北京100730 浙江大学医学部神经生物学系及神经科学研究所杭州310058

由中南大学湘雅医学院和中国医学科学院北京协和医学院主办，浙江大学医学院、首都医科大学、中国人脑组织库联盟等国内外12所著名研究机构、医院和学术团体协办的中国人脑组织库建设国际研讨会于2014年4月18～26日在我国顺利举行。来... 详细信息

由中南大学湘雅医学院和中国医学科学院北京协和医学院主办，浙江大学医学院、首都医科大学、中国人脑组织库联盟等国内外12所著名研究机构、医院和学术团体协办的中国人脑组织库建设国际研讨会于2014年4月18～26日在我国顺利举行。来自美国、澳洲、荷兰、英国、丹麦和斯里兰卡等国家的22位海外专家，浙江大学、首都医科大学、北京大学、北京协和医学院和中南大学等单位的15位国内专家进行了专题演讲。会议举办学术讲座共37场，与会代表达500余人。主场学术讲座于4月19日在湖南长沙进行，分场学术讲座于4月25日在北京进行。

关键词：中国医学科学院组织库人脑首都医科大学北京大学学术讲座中南大学浙江大学

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NOK癌基因对人胚肾293T细胞周期G_1/S期的影响及其作用机制

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基础医学与临床 2014年第4期34卷 470-474页

作者：刘斌刘力中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原生物学系北京100005

目的探讨NOK癌基因对人胚肾293T细胞周期G_1/S期的影响,并研究NOK对G_1/S期调控的作用机制。方法用流式细胞仪对瞬时转染NOK及pcDNA3.0空载体的293T、293ET及HeLa细胞进行周期检测,并用免疫印迹法(Western blot)在293T细胞中,对其细胞周... 详细信息

目的探讨NOK癌基因对人胚肾293T细胞周期G_1/S期的影响,并研究NOK对G_1/S期调控的作用机制。方法用流式细胞仪对瞬时转染NOK及pcDNA3.0空载体的293T、293ET及HeLa细胞进行周期检测,并用免疫印迹法(Western blot)在293T细胞中,对其细胞周期G_1/S期检验点调控蛋白cyclin D/E1及CDK2/4等蛋白水平进行检测。结果瞬时转染NOK可使293T、293ET及HeLa细胞G_1期较转染空载体pcDNA3.0的细胞比例减少,S期比例增多(P<0.05)。转染NOK可使G_1/S期检验点相关蛋白cyclin D、cyclin E1、P-CDK-2、p-CDK-4、p-Akt及p-Rb蛋白的表达量上升,使P21及P53蛋白表达量下降。结论NOK可促进细胞快速通过细胞G_1/S期检测点,其机制涉及对Akt及CDK2/4通路的影响。

关键词： NOK 细胞周期周期素

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TXNDC5介导缺血清诱导的HeLa细胞增殖抑制

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中国医学科学院学报 2014年第5期36卷 470-476页

作者：张红飞张洁雯孔丽娟王乐朱宁郭思超邱川闫雪静陈梅红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究TXNDC5在缺血清诱导的HeLa细胞增殖抑制过程中的作用。方法在人HeLa细胞中分别过表达TXDNC5或用干扰小RNA(siRNA)抑制TXDNC5的表达后,对其进行正常或缺血清培养,采用Western blot法检测TXDNC5蛋白水平,荧光实时定量PCR检测TXDNC... 详细信息

目的研究TXNDC5在缺血清诱导的HeLa细胞增殖抑制过程中的作用。方法在人HeLa细胞中分别过表达TXDNC5或用干扰小RNA(siRNA)抑制TXDNC5的表达后,对其进行正常或缺血清培养,采用Western blot法检测TXDNC5蛋白水平,荧光实时定量PCR检测TXDNC5 mRNA水平,细胞增殖检测试剂盒(MTS法)检测活细胞数,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果缺血清诱导HeLa细胞增殖抑制时,TXNDC5 mRNA水平下降(P<0.05),蛋白水平显著升高,TXNDC5 mRNA的稳定性不受影响,而放线菌酮则可消除缺血清诱导TXNDC5蛋白水平升高的作用。在HeLa细胞中过表达TXNDC5对细胞增殖速度无影响。抑制TXNDC5的表达能减弱缺血清诱导的HeLa细胞增殖抑制(P<0.05),使S期细胞比例略有增加(P<0.05),但对细胞凋亡没有明显影响。结论 TXNDC5介导了缺血清诱导的HeLa细胞增殖抑制。

关键词： TXNDC5 HeLa细胞缺血清细胞增殖

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