检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2014年第5期36卷 466-469页

作者：陈凤萍吴霖沈岩许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的对与精神分裂症相关的胆囊收缩素受体A基因(CCKAR)进行深度测序,寻找精神分裂症相关位点。方法采用Haloplex目标富集系统对8个病例样本与8个正常对照样本进行CCKAR区域的深度测序,利用IGV软件去除结果中的假阳性,然后利用Unphased... 详细信息

目的对与精神分裂症相关的胆囊收缩素受体A基因(CCKAR)进行深度测序,寻找精神分裂症相关位点。方法采用Haloplex目标富集系统对8个病例样本与8个正常对照样本进行CCKAR区域的深度测序,利用IGV软件去除结果中的假阳性,然后利用Unphased软件进行分析。结果深度测序后得到103个变异位点,其中30个变异位点位于CCKAR基因上,发现了可能与精神分裂症相关的位点rs191275118。结论发现了新的可能与精神分裂症相关的位点,对CCKAR基因研究资料进行了补充。

关键词：精神分裂症胆囊收缩素受体A基因深度测序变异位点

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利用RIP-Chip筛选结合多聚胞嘧啶结合蛋白2的microRNAs

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 834-839页

作者：韩为林细华阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术(RIP-Chip)在人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞(T98G和U87MG)中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA)。方法选择兔抗人PCBP2抗体,用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA... 详细信息

目的通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术(RIP-Chip)在人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞(T98G和U87MG)中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA)。方法选择兔抗人PCBP2抗体,用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA、T98G和U87MG细胞中的表达。用兔Ig G作为阴性对照,收集3种细胞的RIP蛋白和RNA样品,通过Western blot检测PCBP2蛋白富集效果,利用Nano Drop定量并经Agilent2100检测RNA完整性。选择Affymetrix miRNA 3.0芯片对RNA样品进行杂交,筛选富集4倍以上且P<0.05的miRNA。结果用PCBP2抗体进行RIP-Chip实验,最终筛选和PCBP2相互作用的103条miRNA,1条前体miRNA和1条核仁小分子RNA;其中15条存在PCBP2的结合位点。结论 PCBP2可以通过识别靶序列或者以核糖核蛋白复合物形式在细胞内结合成熟的miRNA、前体miRNA或核仁小分子RNA。

关键词： PCBP2 microRNA RIP-Chip 神经胶质瘤

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SUN结构域家族蛋白研究进展

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中国细胞生物学学报 2014年第10期36卷 1413-1421页

作者：沙志强许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

SUN(Sad-1,UNC-84)结构域家族蛋白是一种广泛分布于酵母、线虫等真核生物的膜蛋白,主要定位于细胞核膜以及内质网。由于在酵母中发现Sad-1突变后的表型与线虫中UNC-84突变的表型一致,并且两者C-端有近一半的同源相似性,因此得名SUN结构... 详细信息

SUN(Sad-1,UNC-84)结构域家族蛋白是一种广泛分布于酵母、线虫等真核生物的膜蛋白,主要定位于细胞核膜以及内质网。由于在酵母中发现Sad-1突变后的表型与线虫中UNC-84突变的表型一致,并且两者C-端有近一半的同源相似性,因此得名SUN结构域,其家族成员也都具有SUN结构域。根据SUN结构域所在家族成员中蛋白质一级序列位置的不同,分为经典及非经典家族蛋白,经典的家族蛋白一般通过与KASH(Klarsicht、ANC-1、Syne homology)蛋白相互作用行使功能。越来越多的研究结果表明,SUN蛋白可能参与核膜锚定、核膜重塑、细胞迁移和DNA损伤修复等过程,其形成的复合体与人类进行性肌营养不良等疾病的发生发展也有紧密联系。该文就SUN家族各成员蛋白的结构特性以及功能特点的研究进展进行简要综述。

关键词： SUN结构域核膜锚定细胞迁移进行性肌营养不良

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小RNA干扰PCBP2在神经胶质瘤细胞中对P53相关基因的调节和对细胞增殖的影响

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 776-781页

作者：韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP... 详细信息

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP2蛋白的抑制效果及对P53蛋白和它的两个靶基因PUMA和BAX的表达影响,同时检测P53共调节因子FHL2和同家族成员FHL1表达变化。用生物素pull-down分析PCBP2是否和FHL家族成员mRNA结合。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法检测细胞增殖能力,Hoechst染色观察细胞凋亡率。结果 PCBP2 siRNA转染这3株细胞后使PCBP2蛋白表达水平明显下调(P<0.05);增加P53及它的靶基因PUMA和BAX的蛋白表达(P<0.05);抑制FHL2蛋白(P<0.05),但并不结合其mRNA的3'非编码区(3'UTR);Brd U阳性细胞减少(P<0.05);Hoechst染色阳性细胞增多(P<0.05)。结论抑制PCBP2表达可以增强胶质瘤细胞中P53通路活性,并减弱细胞增殖能力,诱导细胞凋亡。

关键词： RNA干扰多聚胞嘧啶结合蛋白2 P53 细胞增殖细胞凋亡

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BRCA2对乳腺癌癌症干细胞的影响及其机制研究

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医学研究杂志 2015年第3期44卷 56-60页

作者：张军红杨晶王春华袁芳李青李静赵春华河北省邢台市眼科医院/河北省眼病治疗中心/河北省眼科研究所 054000 河北医科大学生理学教研室 050017 贵阳医学院附属医院骨科 550004 组织工程中心中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院细胞生物学系100005

目的探讨乳腺癌易感基因2(breast cancer suscepbility gene 2,BRCA2)对上皮型乳腺癌癌症干细胞的影响及从Notch信号角度分析其机制。方法利用本实验室前期建立的反转录病毒干扰载体p MSCVneo/e GFP-U6构建BRCA2的载体,合成慢病毒颗粒,... 详细信息

目的探讨乳腺癌易感基因2(breast cancer suscepbility gene 2,BRCA2)对上皮型乳腺癌癌症干细胞的影响及从Notch信号角度分析其机制。方法利用本实验室前期建立的反转录病毒干扰载体p MSCVneo/e GFP-U6构建BRCA2的载体,合成慢病毒颗粒,转染上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞。筛选出单克隆细胞后,利用Western blot法检测MCF7细胞中干扰BRCA2的效果。球形成试验分析干扰BRCA2后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞的影响。克隆形成试验分析BRCA2下调后对MCF7上皮型乳腺癌干细胞增殖能力的影响。Western blot法检测乳腺癌癌症干细胞自我更新因子Notch1和Notch4在干扰BRCA2的上皮型乳腺癌中的影响。结果干扰BRCA2的反转录病毒载体和对照载体测序正确,可以合成反转录病毒。Western blot法发现干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中BRCA2的表达较对照细胞显著下调。球形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞球形成数量较对照细胞显著增加。克隆形成试验结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞克隆形成能力较对照细胞显著增加。Western blot法检测结果显示干扰BRCA2的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞中Notch1的表达较对照细胞显著上调,未在对照和干扰BRCA2的MCF7细胞中检测到Notch4的表达。结论BRCA2沉默的上皮型乳腺癌细胞系MCF7细胞可通过上调Notch1表达使其形成癌症干细胞的能力增加。

关键词： BRCA2 乳腺癌癌症干细胞 Notch1

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精氨酸甲基转移酶CARM1 shRNA慢病毒表达质粒的构建及稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系的建立

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医学研究杂志 2014年第7期43卷 38-43页

作者：冯炯杨光辉沈珝琲张业中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系 100005

目的构建慢病毒表达小鼠CARM1基因shRNA的质粒,观察其在小鼠畸胎瘤P19细胞中对CARM1的表达抑制效率。验证CARM1 shRNA慢病毒表达质粒,进一步筛选得到稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系。方法设计并且合成针对小鼠CARM1 mRNA不同部位的... 详细信息

目的构建慢病毒表达小鼠CARM1基因shRNA的质粒,观察其在小鼠畸胎瘤P19细胞中对CARM1的表达抑制效率。验证CARM1 shRNA慢病毒表达质粒,进一步筛选得到稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系。方法设计并且合成针对小鼠CARM1 mRNA不同部位的4组shRNA序列,以AgeⅠ和EcoRⅠ克隆入pLKO.1慢病毒载体中,得到含shRNA的慢病毒表达质粒。氨苄青霉素筛选后,DNA测序鉴定结果。鉴定正确的质粒大量制备后,与慢病毒包装辅助质粒psPAX2、pMD2.G共同转染HEK293T细胞,包装得到具有感染能力的慢病毒。将含病毒的培养基上清感染P19细胞后,经嘌呤霉素筛选获得CARM1稳定敲低的P19细胞系,并用Western blot法和实时荧光定量PCR进行鉴定。结果测序鉴定表明4组CARM1 shRNA慢病毒表达质粒构建成功。Western blot法检测和实时荧光定量PCR分析结果显示4组CARM1 shRNA慢病毒表达载体中的2组可有效地抑制小鼠畸胎瘤P19细胞中CARM1基因的表达,即pLKO.1/CARM1 shRNA2、pLKO.1/CARM1 shRNA3有明显的抑制效果。结论成功构建了针对CARM1基因的shRNA的慢病毒表达质粒并筛选得到稳定敲低CARM1表达的P19细胞系,为进一步研究CARM1基因的功能奠定了基础。

关键词： CARM1 shRNA 慢病毒小鼠畸胎瘤P19细胞

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Sirt6杂合子增加动脉粥样硬化的发生

Sirt6杂合子增加动脉粥样硬化的发生

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脂质组学与脂蛋白的新功能——第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议

作者：谭英王婷婷任思冲李佐治张祝琴陈厚早刘德培北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所生化与分子生物学系

目的:Sirtuins基因家族是一类是依赖于NAD+的组蛋白去乙酰酶家族,在高等动物包含Sirt1-Sirt7七个成员。其中,Sirt6与寿命密切相关,其敲除鼠在1个月左右表现为严重的早老样综合征并死亡,相反,Sirt6的过表达则延长寿命。动脉粥样硬化是老... 详细信息

目的:Sirtuins基因家族是一类是依赖于NAD+的组蛋白去乙酰酶家族,在高等动物包含Sirt1-Sirt7七个成员。其中,Sirt6与寿命密切相关,其敲除鼠在1个月左右表现为严重的早老样综合征并死亡,相反,Sirt6的过表达则延长寿命。动脉粥样硬化是老年相关疾病。在本研究中,我们探讨了长寿基因Sirt6对于动脉粥样硬化发生发展的作用。方法:Sirt6的纯合子敲除鼠在一个月致死,利用Sirt6的杂合子鼠与ApoE-/-交配,

关键词：动脉粥样硬化杂合子 Sirt6

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Sirt6杂合子增加动脉粥样硬化的发生

Sirt6杂合子增加动脉粥样硬化的发生

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2014年第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议

作者：谭英王婷婷任思冲李佐治张祝琴陈厚早刘德培北京协和医学院基础学院/中国医学科学院基础医学研究所生化与分子生物学系

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IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响

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医学研究杂志 2014年第10期43卷 53-58页

作者：杨霞张俊文黄秉仁陈虹中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室

目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-... 详细信息

目的构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响。方法利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位。用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用。用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响。结果成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上。细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在。细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达。结论证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据。

关键词： IFN-λR1 TRAF6 NF-κB ISRE 相互作用

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去唾液酸糖蛋白受体的研究现状

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中国医药生物技术 2014年第3期9卷 214-218页

作者：张黎黄维金许雪梅王佑春中国食品药品检定研究院艾滋病性病病毒疫苗室北京100050 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理及结构生物学系北京100005

去唾液酸糖蛋白受体（ asialoglycoprotein receptor ， ASGPR），也被称为肝细胞半乳糖/N-乙酰基葡糖胺受体，或者 Ashwell-Morell 受体[1]。它主要表达于肝窦状间隙的肝实质细胞表面，是第一个被发现的凝集素。由于它结合配体的钙离... 详细信息

去唾液酸糖蛋白受体（ asialoglycoprotein receptor ， ASGPR），也被称为肝细胞半乳糖/N-乙酰基葡糖胺受体，或者 Ashwell-Morell 受体[1]。它主要表达于肝窦状间隙的肝实质细胞表面，是第一个被发现的凝集素。由于它结合配体的钙离子依赖性，因此属于 C 型凝集素。ASGPR 能够介导去唾液酸化的糖蛋白被肝细胞内吞降解[2]。目前已知的ASGPR 的配体非常多，提示其在糖蛋白代谢、脂代谢、凋亡细胞降解、调节凝血、介导病毒进入细胞和自身免疫性炎症反应等多个生理环节均发挥着重要的作用[3]。

关键词：去唾液酸糖蛋白受体 receptor ASGPR 糖蛋白代谢自身免疫性细胞表面细胞内吞唾液酸化

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